人直肠癌血管内皮生长因子-C的表达及其意义*

曾昭明,刘 杰,先雄斌,戴 穹,范光碧

(泸州医学院:1.解剖学教研室;2.公共卫生系,四川 646000)

人直肠癌血管内皮生长因子-C的表达及其意义*

曾昭明1,刘 杰2,先雄斌1,戴 穹1,范光碧1

(泸州医学院:1.解剖学教研室;2.公共卫生系,四川 646000)

目的检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在人直肠癌组织和淋巴结中的表达,探讨VEGF-C在人直肠癌发生、发展和淋巴结转移中的作用。方法选择31例手术切除并经病理切片检查确诊为直肠癌患者的癌组织及其中14例淋巴结石蜡标本,采用免疫组织化学方法检测VEGF-C在癌组织和淋巴结内的表达。结果在31例直肠癌组织的癌细胞质中,VEGF-C显色阳性17例,占54.8%;在14例淋巴结中,VEGF-C显色阳性10例,占71.4%。结论VEGF-C在直肠癌组织和淋巴结中均有较高表达,可能在促使淋巴管内皮细胞增殖、迁移并形成新的淋巴管,导致癌细胞转移过程中起重要作用。

血管内皮生长因子-C;免疫组织化学;直肠腺癌

直肠癌是常见的恶性肿瘤。近年来其发病率呈上升趋势,严重危害人类健康。本研究应用免疫组织化学方法检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在人直肠癌组织及引流淋巴结中的表达,探讨VEGF-C在人直肠癌发生、发展和淋巴结转移中的作用,以助于阐明直肠癌淋巴转移的机制,为直肠癌的治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择泸州医学院附属医院收治的直肠癌患者31例,其中男15例,女16例,年龄26～72岁,平均54.4岁;有淋巴结转移者9例,无淋巴结转移者22例;分化Ⅰ级 10例,Ⅱ级12例,Ⅲ级9例。在31例患者手术取得的淋巴结中选取14例(包括9例Ⅲ级分化患者和5例Ⅱ级分化患者)。另取直肠癌患者远癌直肠组织(均距癌组织区 5 cm以上)5例作为对照。

1.2 试剂 兔抗人VEGF-C抗体、生物素化羊抗兔二抗、浓缩型SABC免疫组织化学试剂盒、DAB显色剂(棕黄色)均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 方法 采用SABC免疫组织化学法。将石蜡块标本制成5 μ m厚切片,常规脱蜡,室温下3%双氧水溶液处理20 min,阻断内源性过氧化物酶,于柠檬酸盐缓冲液中抗原热修复20 min,滴回正常山羊血清,室温下作用20 min,阻断非特异性反应,滴加兔抗人 VEGF-C抗体(浓度1∶100),湿盒中37℃孵育,4℃过夜,用0.01 mol/L PBS洗涤,生物素化羊抗兔二抗(浓度1∶100)孵育,滴加 SABC复合物,DAB显色,镜下观察。

1.4 统计学处理 用 SPSS11.5统计软件进行χ2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 VEGF-C在直肠癌组织中的表达 在31例直肠癌癌组织中VEGF-C显色阳性 17例,其中高、中、低分化(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级)腺癌分别为 2、7、8例,总阳性表达率为54.8%。VEGF-C免疫反应阳性物质位于癌细胞胞质内,为棕黄色颗粒,背景不着色,见封3图1,远癌对照组织内未见阳性物质。

2.2 VEGF-C在淋巴结中的表达 在14例淋巴结中VEGFC显色阳性10例,其中癌细胞转移阳性的9例患者中8例为阳性,转移到淋巴结中的癌细胞VEGF-C免疫反应阳性物质同样位于细胞质内,见封3图2;癌细胞转移阴性的5例患者中2例为阳性,阳性物质位于淋巴细胞内,见封 3图3,总阳性表达率为71.4%。

2.3 VEGF-C与性别、年龄、腺癌分化程度、淋巴结转移的关系 VEGF-C阳性表达与性别、年龄无关(P＞0.05),与腺癌分化程度、淋巴结转移相关(P＜0.05),见表1。

表1 VEGF-C与性别、年龄、腺癌分化程度、淋巴结转移的关系(n)

3 讨 论

本研究结果显示VEGF-C在直肠癌组织和转移淋巴结内均有较高的表达;其表达与患者的性别和年龄无关,与肿瘤分化程度和淋巴结转移相关,提示病理情况下VEGF-C的表达较正常组织有所不同;VEGF-C高表达是直肠癌细胞的一种特性,且这种表达特性与癌细胞的转移相关。

本研究结果表明在直肠癌组织和转移淋巴结中VEGF-C表达于癌细胞胞质内,与其他研究结论一致[1-5],但没有观察到Witte等[2]描述的VEGF-C在直肠癌组织的基质细胞内的阳性表达,这可能与染色方法差异有关;与綦晓龙等[5]得出的VEGF-C的表达与患者年龄相关的结论不同,本研究结果表明VEGF-C的表达与患者年龄无关。由此看来,影响 VEGF-C表达的因素比较复杂,要探明VEGF-C表达的相关因素及VEGF-C表达与直肠癌淋巴结转移的关系及其转移机制尚需进一步的实验研究。

VEGF-C是重要的促淋巴管生成因子,能促进淋巴管的生成,与癌淋巴管转移密切相关[6-8]。VEGF-C通过与血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)结合,使受体产生自身磷酸化,经胞质内信息传递,使DNA合成增强,导致淋巴管内皮细胞增殖、迁移,形成新的淋巴管,癌细胞随新生淋巴管转移[9]。本研究结果显示VEGF-C也表达于有癌细胞转移的淋巴结内,提示直肠癌的淋巴管转移是其重要的转移方式[10],尽管不同作者对新生成的淋巴管的功能等特性仍存在争议[11-13]。作者推测VEGF-C/VEGFR-3信号通路异常可能是癌淋巴管生成或扩张的主要机制,若能阻断VEGF-C与VEGFR-3的结合则能抑制直肠癌细胞发生转移。应用VEGFR-3的中和抗体、可溶性细胞外片段或低相对分子质量抑制物抑制VEGF-C/VEGFR-3信号通路,阻断淋巴管内皮细胞增殖、迁移及形成新的淋巴管从而阻断癌细胞的转移途径,可能为直肠癌的治疗提供一种新方法[14-16]。

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Expression and significance of VEGF-C in rectal adenocarcinoma of human*

Zeng Zhaoming1,Liu Jie2,Xian Xiongbin1,Dai Qiong1,Fan Guangbi1
(1.Department of Anatomy;2.Department of Public Health,Luzhou Medical College,Sichuan 646000,China)

ObjectiveTo study the expression of vascular endothelial growth factor-C(VEGF-C)in rectal adenocarcinoma tissue and lymph nodes,and to determine the function of VEGF-C in the process of occurrences,development and lymphatic metastasis of rectal adenocarcinoma.MethodsThe expression of VEGF-C was detected in 31 paraffin-embedded cases of rectal adenocarcinoma tissue and 14 paraffin-embedded cases of lymph nodes using immunohistochemistry method.ResultsIn plasma of cancer cell of 31 cases of rectal adenocarcinoma,VEGF-C positive expression was detected in 17 cases,the positive rate is 54.8%.In 14 cases of lymph nodes,VEGF-C positive expression was detected in 10 cases,the positive rate is 71.4%.ConclusionThe positive rate of VEGF-C are high both in rectal adenocarcinoma and in lymph nodes.VEGF-C can promote proliferation and migration of lymphatic endothelial cells and formation of new lymphatic vessels which plays an important role in metastasis of cancer cells.

vascular endothelial growth factor-C;immunohistochemistry;rectal adenocarcinoma

10.3969/j.issn.1671-8348.2011.05.004

A

1671-8348(2011)05-0425-02

泸州医学院青年基金资助项目(436)。

2010-01-25

2010-08-22)

·临床研究·