柠檬桉叶油对复方阿司匹林软膏的透皮促进作用研究＊

林三清，洪剑浩，李 芳，夏敬民

(湛江师范学院化学科学与技术学院，广东 湛江 524048)

柠檬桉叶油对复方阿司匹林软膏的透皮促进作用研究＊

林三清，洪剑浩，李 芳，夏敬民

(湛江师范学院化学科学与技术学院，广东 湛江 524048)

目的探讨复方阿司匹林软膏剂的最佳处方及柠檬桉叶油对阿司匹林透皮扩散作用的影响。方法用正交试验法对复方阿司匹林软膏处方进行优化;用离体家兔皮肤作为试验材料，用药物透皮仪对软膏中阿司匹林进行透皮扩散试验，紫外分光光度法测定阿司匹林透皮扩散的累积渗透量，配对 t检验法验证柠檬桉叶油对阿司匹林是否有促透作用。结果复方阿司匹林软膏的最佳处方是阿司匹林占2%，十二烷基硫酸钠占1.2%，硬脂醇占20%，柠檬桉叶油占1%，三乙醇胺占2%。柠檬桉叶油能明显提高软膏中阿司匹林的皮肤累积渗透量和稳态渗透流量(P＜0.05)。结论柠檬桉叶油对阿司匹林有透皮促进作用。

柠檬桉叶油;阿司匹林软膏;透皮扩散

阿司匹林作为传统的非甾体抗炎药，不良反应较多，尤其易引起胃肠道不良反应[1]，剂量过大时还可能引起水杨酸反应，诱发中枢神经症状等[2]。目前，为了减轻阿司匹林对胃的损伤，多将其制成肠溶制剂，但内服制剂并不能解决其对全身其他系统的影响。因此，在治疗局部炎症性疾病时，研究一种对全身不良反应小的制剂非常重要。透皮给药系统具有独特优势，如可避免首过效应和胃肠道因素对药物吸收的影响、恒速释药、使用方便、安全、降低药物毒副作用等，其给药剂量是由有效释药面积和药物的透皮速率决定的。大多数药物的透皮速率满足不了治疗要求，而实际应用又制约了有效释药面积，故提高药物的透皮速率是开发透皮给药系统的关键。烯萜类中药促透剂多为挥发油成分，研究较多的有薄荷油、丁香油、主要含1，8－桉叶素的桉叶油、冰片、樟脑等。其中主要含1，8－桉叶素的桉叶油是同类物质中最有价值的一种透皮吸收促进剂，即使与经典的透皮吸收促进剂氮酮相比[3]，也有较好的透皮吸收促进作用，而且皮肤刺激性很小[4]。柠檬桉叶油的主要成分是香茅醛和β香茅醇，具有与上述桉叶油相似的理化性质，但其促透作用研究却未见报道，故研究其促透作用有较大的实用意义和经济价值。本试验中，将柠檬桉叶油与阿司匹林制成复方软膏剂，并初步观察了柠檬桉叶油对软膏中阿司匹林透皮扩散的影响。

1 动物、仪器与试药

健康家兔(雌雄兼用，体重2～3 kg)，由广东医学院实验动物中心提供(合格证号为粤实动证字第2009035号)。

RYJ－6A型药物透皮仪(上海黄海药检仪器有限公司);Gold Spectrumlab 53/54型紫外可见分光光度计(上海棱光技术有限公司);BS124S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);XC69－HGFHGF型恒温水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)。

柠檬桉叶油(湛江师范学院化学科学与技术学院自制，批号为20091206);阿司匹林(A Johnson Matthey Company，批号为10112030);十八醇(批号为 20091109)，尼泊金乙酯(批号为20091010)，酒石酸(批号为 20091109)，三乙醇胺(批号为20091015)，均由天津市光复精细化工研究所生产;月桂醇(批号为0709182)，乙醇(批号为20090815)，均为广东汕头市西陇化工厂产品;1，2－丙二醇(汕头市光华化学厂，批号为20081213);氯化钠(天津市光复科技发展有限公司，批号为20081009);磷酸氢二钠(国药集团化学试剂有限公司，批号为20090119);磷酸二氢钠(广东化学试剂厂，批号为20090630)。以上试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 离体皮肤的制备

取健康家兔，用5.5%的Na2S脱净腹部皮肤的毛，用生理盐水仔细清洗家兔腹部的Na2S残液，然后敲击家兔后脑，使之被击晕。用手术剪取下腹部皮肤，剥离皮下脂肪组织，不伤角质层，将皮肤用新鲜生理盐水冲洗干净，然后浸泡于生理盐水中冷藏12 h，备用。

2.2 离体皮肤渗透试验装置

采用双室渗透扩散池。装置由上下两个剥离组件对合而成，圆形皮肤夹在中间形成上下两室，用夹子将两室固定。上室为供给室，下室为接收室，在接收室一侧连有1个上倾管道供取样、补充接收液或排气泡用。扩散面积为2.8 cm2，外置恒温水浴(37±1)℃，并置磁力搅拌器上，恒定转速(300 r/min)下不断搅拌。

2.3 标准曲线绘制[5]

精密称取阿司匹林0.020 0 g，置20 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释到刻度，分别精密称取 1.00，1.50，2.00，2.5，3.00 mL，置25 mL容量瓶中，于275 nm波长处测定其吸光度(A)，以 A值对质量浓度(C)进行线性回归，得曲线方程 A=6.015 0 C+0.021 8，r=0.999 8(n=5)。

2.4 阿司匹林软膏制备

将油相成分硬脂醇与水相成分十二烷基硫酸钠、尼泊金乙酯、丙二醇、三乙醇胺、酒石酸分别溶于蒸馏水中，加热至75℃，将水相加入油相中，搅拌，得O/W型乳剂型基质。室温下将预先溶于95%乙醇中的阿司匹林加入上述基质中，充分搅拌至冷凝，即得细腻均匀且易于涂布的透皮软膏[6]。配制系列含柠檬桉叶油的2%阿司匹林软膏作为供试品溶液，以不含柠檬桉叶油的2%阿司匹林作为对照品溶液，同时以不含柠檬桉叶油和阿司匹林的软膏作基线校正。

2.5 制备工艺优选[7]

因素水平设计:根据预试验结果，结合有关资料，以6 h的累积渗透量为考察指标，选阿司匹林软膏处方中十二烷基硫酸钠(因素A)、硬脂醇(因素 B)、柠檬桉叶油(因素 C)、三乙醇胺(因素D)的质量分数作为考察因素，每个因素设计3个水平，进行四因素三水平正交试验，优选参数组合。因素水平设计见表1。

正交试验设计:参照 2.4项下方法制备阿司匹林软膏，按L9(34)正交表进行试验。结果见表2和表3。可见，各因素影响大小依次为D＞C＞A＞B，因素D是最重要的影响因素，而因素C和因素A是次要因素。方差分析结果显示，因素D和因素C对阿司匹林累积渗透量的影响有显著性意义(P＜0.05)。方差分析与直观分析结果具有一致性，即三乙醇胺的质量分数是影响阿司匹林累积渗透量的最主要因素，柠檬桉叶油的质量分数次之，十二烷基硫酸钠的质量分数有一定影响，而硬脂醇的质量分数影响不大。综合考虑，最优处方是A2B3C1D2。

表1 正交试验因素水平表(%)

表2 L9(34)正交试验结果与分析

表3 方差分析表

验证试验:考虑到试验误差和实际生产，尚需进一步试验加以验证。按优选的最佳工艺条件验证3批样品，结果阿司匹林的累积渗透量分别为 992，965，981 μg/cm2，平均 979 μg/cm2，RSD=1.39%(n=3)。可见优选的工艺条件正确、可靠。

2.6 渗透试验

2.6.1 磷酸盐缓冲液制备

称取磷酸氢二钠71.644 g，磷酸二氢钠27.610 g，分别置1 000 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，量取磷酸氢二钠溶液720 mL，磷酸二氢钠溶液280 mL，将二者混合即得pH=7.4的磷酸缓冲溶液。

2.6.2 渗透率测定

将家兔皮肤固定在Franz扩散池的上、下两室之间，角质层朝上，准确称取软膏0.4 g，均匀涂于皮肤表面，接受池(扩散面积 S=2.8 cm2，容积为6.5 mL)中pH=7.4的磷酸缓冲液为接受液，接受液与皮肤真皮层刚好接触。在接受池内置一磁力搅拌棒，将接受池置磁力搅拌器上，在恒温(37±1℃)、恒速(300 r/min)下不断搅拌。再于涂药后 1，2，3，4，5，6 h 时分别取 4 mL 接受液，同时补充等量接受液。于275 nm波长处测定取出的接受液吸收度(A)值。将 A值代入标准曲线方程，计算样品质量浓度，并计算累积渗透量(Q)。Cn=Cni+V0/V∑Cpt;Qn=CnV/A。Cn为 t时间药物的校正质量浓度，Cni为 t时间药物的测定质量浓度，Cpt为 t时间前药物的测定质量浓度，V0为每次取样体积，V为接受杯的总体积，Qn为接受液的总体积，A为接受液的面积。

2.6.3 柠檬桉叶油对阿司匹林累积渗透量的影响

选取阿司匹林软膏的最优处方，比较软膏中含柠檬桉叶油与不含柠檬桉叶油的阿司匹林在各小时的累积渗透量。结果见表 4。计算得 t=3.508，由 t界值表得 t0.05，5=2.571.t＞ 2.571，P＜0.05。因此，可以认为柠檬桉叶油对阿司匹林软膏具有促透作用。

表4 柠檬桉叶油对各小时阿司匹林累积渗透量的影响

2.6.4 柠檬桉叶油对阿司匹林稳态渗透流量的影响

根据正交试验的9组数据，画出 Q－t图，得 Q－t方程(表5)，用配对 t检验法比较含柠檬桉叶油与不含柠檬桉叶油的阿司匹林软膏累积渗透速率的差异是否有显著性意义。结果见表6。计算得t=5.42，由 t界值表得 t0.05，8=2.306，t＞ 2.306，P ＜0.05。结果显示，柠檬桉叶油可以提高软膏中阿司匹林的渗透速率。

3 讨论

以累积渗透量和渗透流量为考核指标的正交试验结果表明，复方阿司匹林软膏的最优处方为:阿司匹林占2%，十二烷基硫酸钠占1.2%，硬脂醇占20%，柠檬桉叶油占1%，三乙醇胺占2%。试验结果还表明，柠檬桉叶油能够提高复方软膏中阿司匹林的累积皮肤渗透量和渗透流量，且均有显著性意义(P＜0.05)，说明柠檬桉叶油对软膏中阿司匹林具有促透作用。我国柠檬桉资源十分丰富，而柠檬桉叶基本被废弃，若经过深入研究，能将其作为药物透皮吸收促进剂，则对于综合利用丰富的柠檬桉资源、降低药物透皮吸收促进剂的成本具有重要意义。

表5 各处方的 Q－t方程

表6 柠檬桉叶油对阿司匹林渗透速率的影响

[1]邵 展，刘春安.胃黏膜病变[M].北京:中国科学技术出版社，1992:219－226.

[2]Charles LM.New research on aspirin and health[M].New York:Nova Science Publishers，2006:220 － 325.

[3]李 娟，平其能，樊 荣.非诺洛芬钙凝胶剂的制备及其体外透皮吸收研究[J].中国医院药学杂志，1999，19(6):323－325.

[4]胡晋红，张立超，朱全刚.我国透皮给药的研究进展[J].解放军药学学报，2002，18(4):38－40.

[5]池秀珍.紫外分光光度法测定阿司匹林肠溶片含量[J].海峡药学，2002，14(1):27 －28.

[6]康艳萍，刘紫英.吡罗昔康乳膏的制备及稳定性考察[J].时珍国医国药，2008，19(10):2 429 －2 430.

[7]周永治，马志庆.医药数理统计[M].第2版.北京:科学出版社，2004:189－194.

Preparation of Compound Aspirin Ointment and Effect of Citriodora Oil on Transdermal Enhancing Action of Aspirin

Lin Sanqing，Hong Jianhao，Li Fang，Xia Jingmin
(Chemical Science and Technology School， Zhanjiang Normal University， Zhanjiang， Guangdong， China 524048)

ObjectiveTo research the best prescription of Compound Aspirin Ointment and the effect of citriodora oil on the transdermal diffusion action of aspirin.MethodsThe orthogonal test was used to optimize the prescription of Compound Aspirin Ointment.With the rabbit skin in vitro as test material，aspirin in the ointment was performed the transdermal diffusion test by the medicinal transdermal delivery and the accumulation permeation amounts of aspirin in the ointment were determined by ultraviolet spectrophotometer.The paired t test was adopted to verify the effect of citriodora oil on the transdermal delivery enhancing action of aspirin.ResultsThe best prescription of Compound Aspirin Ointment was 2% of aspirin，1.2% of sodium lauryl sulfate，20% of stearyl alcohol，1% of citriodora oil and 2% triethanolamine.Citriodora oil had the enhancement effects on the accumulation permeation and steady permeation flux of aspirin in the ointment with statistical significance(P＜0.05).ConclusionCitriodora oil could enhance the transdermal delivery of aspirin in the ointment.

citriodora oil;aspirin ointment;transdermal delivery

R285.5;R282.71

A

1006－4931(2011)10－0025－03

＊湛江市财政资金科技专项竞争性分配项目，项目编号:湛财工[2009]163号;湛江师范学院科研基金资助项目，项目编号:QL0804。

林三清(1983－)，男，学士，助理实验师，主要从事药剂学与药理学研究工作，(电话)0759－3182455;夏敬民(1961－)，男，硕士，教授，主要从事药剂学与药理学研究工作，本文通讯作者，(电子信箱)muqing209@163.com。

2010－06－03;

2010－11－06)