重症肺炎患者外周血自然杀伤细胞变化的意义

李金美

(丽水市人民医院,浙江 丽水 323000)

重症肺炎是多种原因引起的、临床上以进行性呼吸困难及难以纠正的低氧血症为主要表现的肺部损伤,是肺组织失控性炎症反应的结果。自然杀伤细胞(Natural killer cells,NK)是天然免疫系统中的重要细胞,在机体免疫调控中发挥重要的作用,其特征性表型主要是NK细胞表达CD56和CD16分子,而不表达CD3分子和T细胞受体(TCR)[1]。多种感染性疾病与NK细胞调节功能异常或丢失有关[2]。作者通过轻症肺炎40例和重症肺炎56例的外周血NK细胞绝对数及其占淋巴细胞比例的变化,分析其与肺炎病情及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2006年5月～2009年5月本院住院56例重症肺炎患者,其中男35例,女21例,平均年龄(51.3±12.2)岁,其中 24例出现多器官功能障碍综合征(MODS),符合MODS的诊断标准[3]。40例轻症肺炎患者中男25例,女15例,平均年龄(52.3±13.2)岁,均符合社区、医院获得性肺炎中轻、重症肺炎诊断标准[4-5]。另外选择50名本院体检中心同期相互间无血缘关系的体检健康者为对照组,其中男30例,女20例,平均年龄(49.7±10.5)岁,三组年龄、性别差异均无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 方法 (1)标本采集:用2mL EDTA抗凝负压真空采血管采集研究对象外周静脉血,在24小时内进行标本染色;(2)流式细胞仪校准:为保证实验准确性,用 FACS Comp CaliBRITE Beads、Trucount Controls和Multi-Check Control校准FACSC alibur流式细胞仪,检测仪器的准确性,合格后再进行标本测定;(3)NK细胞绝对值和比值测定:取各表面抗体(CD3、CD16+、CD56+、CD45)10μ L 加入专用流式管,再加EDTA抗凝血 50μ L与之充分混匀,涡旋震荡器震荡混匀5秒,置室温避光处(以抽屉代替)反应15～30分钟,加入已配好的BD FACS Lysing Solution(10倍)1000μ L,涡旋震荡器混匀,置避光处5～10分钟,应用FACSC alibur流式细胞仪检测标记细胞并分析检测结果。依NK细胞不表达CD3分子的特点,将门设在CD3阴性淋巴细胞群,把表达CD56和/或CD16分子者计为NK细胞,分析NK细胞绝对值及比值[试剂 CD3-FITC、CD16+、CD56-PE、CD45-PerCP、BD FACS Lysing Solution(10倍)购于美国BD公司,PBS BUFFER购于美国BECKMAN COULTER公司]。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件,所有数据均以(±s)表示,原始数据经转换,拟合正态分布后组间差异采用t检验。

2 结 果

2.1 NK细胞绝对值及比值 轻、重症肺炎患者的NK细胞绝对值及比值与对照组相比均降低,均有显著性差异(P＜0.01),轻、重症肺炎两组相比,也有显著性差异(P＜0.01),见表1。

表1 三组NK细胞绝对值及相应比值的比较(±s)

表1 三组NK细胞绝对值及相应比值的比较(±s)

与对照组比较**P＜0.01,与轻症肺炎组比较△△P＜0.01

组 别 n NK(个/μ L) NK(%)轻症肺炎组 40 213±102** 10.01±4.07**重症肺炎组 56 136±87**△△ 6.36±2.71**△△对照组 50 396±198 18.20±6.76

2.2 不同进展期重症肺炎患者NK细胞绝对值及比值 56例重症肺炎按是否进展为MODS分为MODS组24例与非MODS组32例,结果显示,MODS组NK细胞绝对值及比值明显低于非MODS组,有显著性差异(P＜0.01),见表2。

表2 不同进展期重症肺炎患者NK细胞绝对值及比值的比较(±s)

表2 不同进展期重症肺炎患者NK细胞绝对值及比值的比较(±s)

与非MODS组比较**P＜0.01

组 别 n NK(个/μ L) NK(%)MODS组 24 82±39** 4.11±0.85**非MODS组 32 177±91 8.05±2.38

2.3 并发MODS组不同转归者的NK细胞绝对值及比值的变化 24例继发MODS重症肺炎患者中死亡8例,存活16例。死亡患者的NK细胞绝对值及比值明显低于存活组,两者有显著性差异(P＜0.05),见表 3。

表3 重症肺炎不同转归者NK细胞绝对值及比值的变化(±s)

表3 重症肺炎不同转归者NK细胞绝对值及比值的变化(±s)

与存活组比较*P＜0.05

组 别 n NK(个/μ L) NK(%)死亡组 8 34±20* 2.05±0.91*存活组 16 57±25 3.37±1.18

3 讨 论

近年来,机体免疫状态紊乱在肺炎的发生、发展中所起的作用备受关注。NK细胞是一种来自于骨髓的细胞,无T和B细胞表面特征,它们的胞质中的含有许多嗜苯胺颗粒样的物质,根据CD56和CD16分子表达与否可将NK细胞分为三个主要亚群:CD56+、CD56+CD16+、CD16+NK 细胞,是组成天然免疫系统的重要细胞,NK细胞不需要预先接触抗原,无MHC限制性,不依赖抗体或补体即可直接杀伤MHC I类分子表达低下或缺如的肿瘤细胞,发挥其细胞毒杀伤功能,其效应应答是通过自身细胞膜上受体识别靶细胞上的HLAI类分子而调控免疫反应,NK细胞的功能包括控制病毒和细菌的感染,调节体内环境的稳定,产生细胞因子,对肿瘤细胞具有杀伤效应,并建立一个先天性免疫和获得性免疫间的联系[6]。所以,检测NK细胞可知肺炎患者的免疫功能状态。

作者对40例轻症肺炎和56例重症肺炎患者的外周血NK细胞绝对数及其占淋巴细胞比例进行研究,结果显示轻、重症肺炎患者的NK细胞绝对数及比值与对照组比较,均呈现明显降低(P＜0.01),轻、重症肺炎患者两者相比,重症肺炎患者明显降低(P＜0.01),提示轻、重症肺炎患者NK细胞绝对数及相应比值下降,其原因可能是在清除病原和杀伤受感染细胞的过程中消耗了大量的NK细胞,使患者免疫功能低下,不利于机体清除致病原和感染的细胞,致感染得以持续或二次感染容易发生。机体为了保持平衡性,在诱导产生炎性细胞因子的状态下,也可以诱导产生抗炎性细胞因子,如IL-4、IL-10等,而IL-4、IL-10则能抑制NK细胞的功能[7],另外,抗炎性细胞因子过度分泌使机体处于无应变能力或易感状态,表现为代偿性抗炎反应综合征(CARS),机体对外来刺激反应低下,对感染易感性增强,加剧脓毒症和MODS[8-9],所以,继发MODS的重症肺炎患者外周血NK细胞绝对数及其占淋巴细胞比例均明显低于无继发MODS患者(P＜0.01)。此外,结果还显示MODS重症肺炎死亡患者NK细胞绝对值及相应比值明显低于存活组(P＜0.05),表明死亡患者NK细胞绝对值及相应比值更一步降低,使NK细胞对树突状细胞(DC细胞)的正向调节作用、NK细胞对抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL细胞)活化的启动起必需的辅助作用、NK细胞通过分泌干扰素γ(IFN-γ)促进1型辅助T细胞(Th1细胞)的分化 、NK 细胞对 γ δ T 细胞的正向调节作用、NK细胞对天然杀伤T细胞(NKT细胞)所致爆发性肝脏免疫损伤的负调节作用减弱,不能有效地连接天然免疫和获得性免疫,实现固有免疫对适应性免疫的调节作用,导致患者出现不良预后。

因此,检测外周血NK细胞绝对数及其占淋巴细胞的比例对评估重症肺炎的病情和预后有重要的临床意义。

[1] Jiang Y,Shang H,Zhang Z,et al.Alterations of natural killer cell and T-Lymphocyte counts in adults infectedwith human immunodeficiency virus through blood and plasma sold in the past in China and in whom infection has progressed slowly over a long period.Clin diag lab immunol,2005,12(11):1275

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[4] 中华医学会呼吸病学分会.医院获得性肺炎诊断和治疗指南(草案).现代实用医学,2002,14(3):160

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