从中医脾瘅角度评价OLETF大鼠发病特点*

2010-11-29刘文科李修洋仝小林

天津中医药 2010年6期

甄仲，常柏，李敏，刘文科，李修洋，于波，仝小林

（1.中国中医科学院广安门医院，北京 100053；2.天津医科大学代谢病医院，天津 300070）

“脾瘅”最早见于《素问·奇病论》。书中记载：“此五气之溢也，名曰脾瘅。夫五味入口，藏于胃，脾为之行其精气，津液在脾，故令人口甘也。此肥美之所发也，此人必数食甘美而多肥也。肥者令人内热，甘者令人中满。”本课题组在前期文献研究的基础上提出脾瘅的形成和发展与代谢综合征（MS）极为相似，是肥胖发展为多种心脑血管疾病的过渡阶段[1-2]。

目前关于“脾瘅”的探讨尚不完善、不充分，尚缺乏适合的动物模型平台，以便进行深入的研究，而自发性2型糖尿病大鼠（OLETF）以肥胖（中心型肥胖）起病，未采取人工干预造模，与人类多饮多食缺乏运动的生活方式导致MS发病具有一定的类似性，本实验旨在通过对其肥胖、糖尿病前期、糖尿病期进行动态观察，研究OLETF发病特点，探讨其发病过程是否较好的体现MS的病变特点，也为深入研究脾瘅理论提供新的实验平台。

1 材料与方法

1.1 实验动物以OLETF及同系非糖尿病对照大鼠（LETO）为实验对象。OLETF组（即模型组）30只，LETO组（即正常组）30只，皆为雄性，4周龄，体质量（80±10）g。由日本大冢制药德岛研究所引进,在无特定病原体级（SPF级）条件下单笼饲养，饲以标准饲料。环境温度控制在22～25℃，湿度为（55±5）%，12/12 h 光照黑暗循环（光照时间 7∶00－19∶00），自由获取食物和饮水。

1.2 指标及检测

1.2.1 实验动物体质量定期以电子计重器称鼠体质量并记录，称取时间为（周一）空腹、每间隔7 d，上午9:00。

1.2.2 口服糖耐量实验两组大鼠均定期行口服葡萄糖耐量实验（OGTT）。实验前隔夜禁食15 h、不禁水，按2 g/kg予30%葡萄糖溶液灌胃。于空腹及糖负荷后30、60、90和120 min取血，以德国内卡BIOSEN5030快速葡萄糖分析仪测定血糖值。血糖峰值>16.7mmo1/L和负荷后120min血糖>11.1mmol/L诊为糖尿病，只具备上述一条为糖耐量减低[3]。血糖曲线下面积（AUC）计算：采用近似梯形的计算公式，0～120 min血糖AUC=1/2（0 min值＋120 min值）＋30 min值+60 min值+90 min值。

1.2.3 血脂、游离脂肪酸检测大鼠隔夜禁食12 h，次晨取血，离心取血清，-70℃保存备测。游离脂肪酸（FFA）检测采用比色法，使用南京建成生物公司试剂盒测试。总胆固醇（TC）采用酶法，甘油三酯（TG）采用乙酰丙酮显色法，日立-7150全自动生化分析仪测定。

1.2.4 高胰岛素正葡萄糖钳夹实验大鼠隔夜禁食，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（40 mg/kg），行右侧颈总动脉和左侧颈内或颈外静脉插管，动脉插管以取血测血糖，静脉插管连接小三通管，先恒定输注短效胰岛素，当血糖值超出基础值±0.5 mmol/L的范围时，即开始输注浓度为20%葡萄糖，调整葡萄糖输注速度（即葡萄糖输注率，GIR），使血糖值控制在基础值±0.5 mmol/L的范围左右，如果血糖值超出基础值±0.5 mmol/L的范围，根据血糖值在最短的时间内调整葡萄糖输注率，使血糖恢复到基础值±0.5mmol/L的范围内，达到稳定状态，将钳夹处于稳态的3个GIR值求平均值。

1.2.5 大鼠腹内脂肪的采集分别于16、30、42周剖杀部分实验大鼠,取附睾、肠系膜、返折腹膜脂肪称质量，计为内脏脂肪质量，并计算内脏脂肪质量占体质量百分比。

1.3 统计方法采用SPSS 16.0软件作统计分析,实验数据计量资料以均数±标准差（±s）表示，服从正态分布的两组间均数比较用t检验进行统计，偏态分布用秩和检验，以P<0.05为具有显著性差异。