胰腺癌中RECK和MMP-9蛋白的表达及临床病理意义

叶素素 田字彬 魏良洲 赵清喜 孔心涓 李玉军

·论著·

胰腺癌中RECK和MMP-9蛋白的表达及临床病理意义

叶素素 田字彬 魏良洲 赵清喜 孔心涓 李玉军

目的观察RECK和MMP-9在胰腺癌组织中的表达，探讨其与胰腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化PV6000法检测28例胰腺癌及10例正常胰腺组织中RECK、MMP-9的表达，应用SPSS13.0软件对RECK、MMP-9的表达与肿瘤临床病理特征的关系进行统计学分析。结果RECK在胰腺癌组织中的阳性表达率为46.4%(13/28)，显著低于它在正常胰腺组织中90.0%(9/10)的阳性表达率。胰腺癌临床分期为Ⅰ+Ⅱ期组的RECK阳性表达率(75.0%，9/12)明显高于Ⅲ+Ⅳ期组(25.0%，4/16，P<0.05)，无远处转移组的RECK阳性表达率(60.0%，12/20)明显高于有远处转移组(12.5%，1/8，P<0.05)。MMP-9在胰腺癌组织中的阳性表达率为75.0%(21/28)，显著高于正常胰腺组织中的20.0%(2/10)阳性表达率(P<0.01)。胰腺癌临床分期为Ⅰ+Ⅱ期组的MMP-9阳性表达率(50.0%，6/12)明显低于Ⅲ+Ⅳ期组(93.8%，15/16，P<0.05),肿瘤高分化组的MMP-9阳性表达率(33.3%，1/3)明显低于低分化组(100%，12/12，P<0.01)。胰腺癌组织中RECK与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.536，P<0.01)。结论胰腺癌组织中RECK呈低表达，MMP-9呈高表达，RECK、MMP-9联合检测可以作为胰腺癌临床分期评估的指标。

胰腺肿瘤； 基质金属蛋白酶9； RECK； 免疫组织化学

RECK(reversion inducing cysteine rich protein with kazal motifs, RECK)是1998年发现的一种肿瘤抑制基因，它在转录后水平抑制基质金属蛋白酶的表达与活性，从而抑制肿瘤的侵袭与转移[1]。基质金属蛋白酶(matrix metalproteinases,MMPs)是一类能降解细胞外基质及血管基膜的重要蛋白酶类，具有促进肿瘤侵袭及血管形成的作用，其中MMP-9与肿瘤浸润转移的关系密切。本实验采用免疫组化方法检测RECK和MMP-9在胰腺癌中的表达，探讨它们与胰腺癌临床病理特征的关系。

材料和方法

一、一般材料

选择青岛大学医学院附属医院病理科临床病理资料齐全的胰腺导管腺癌组织蜡块标本28例，正常胰腺组织标本10例。所有患者术前均未行放、化疗。

二、方法

采用免疫组化染色PV6000方法。兔抗人RECK多克隆抗体(Santa Cruz公司)和兔抗人MMP-9多克隆抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)1∶100稀释，PBS代替一抗作为阴性对照。

RECK及MMP-9阳性表达为胞质内出现棕黄色颗粒。在高倍镜下随机观察5个视野，按着色深浅评分：无着色，0分；淡黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分。按阳性细胞数评分：0～5%，0分；>5%～25%，1分；>25%～50%，2分；>50%，3分。两项评分相乘，0～1分为-，2～3分为+，4～7分为++，8～12分为+++。

三、统计学处理

应用SPSS13.0进行统计学处理，各指标之间差异采用χ2检验或Fisher确切概率法，RECK和MMP-9之间相关性采用spearman相关分析，以P<0.05为有统计学差异。

结 果

一、RECK的表达及其与临床病理特征的关系

RECK的表达主要位于细胞质(图1a)。胰腺癌RECK阳性表达率为46.4%，正常胰腺为90.0%，差异显著(P<0.05)。RECK表达与胰腺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度间无关(P>0.05)，但TNM Ⅰ、Ⅱ期患者的阳性率明显高于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05)，无转移患者的阳性率明显高于有转移患者(P<0.05，表1)。

表1RECK、MMP-9在胰腺癌的表达率及与临床病理特征的关系

病理特征例数RECK阳性例数(%)P值MMP-9阳性例数(%)P值性别 男229(40.9)0.37218(81.8)0.144 女64(66.7)3(50.0)年龄 ≥60155(33.3)0.2559(60.0)0.084 <60138(61.5)12(92.3)肿瘤大小 ≥5cm85(62.5)0.4104(50.0)0.142 <5cm208(40.0)17(85.0)分化程度 高分化32(66.7)0.1331(33.3)0.006 中分化138(61.5)8(61.5) 低分化123(25.0)12(100)淋巴结转移 有123(25.0)0.06711(91.7)0.184 无1610(62.5)10(62.5)远处转移 有81(12.5)0.0388(100)0.075 无2012(60.0)13(65.0)肿瘤分期 Ⅰ+Ⅱ129(75.0)0.0206(50.0)0.023 Ⅲ+Ⅳ164(25.0)15(93.8)肿瘤部位 胰头189(50.0)0.37015(83.3)0.171 胰体51(20.0)4(80.0) 胰尾53(60.0)2(40.0)

二、MMP-9的表达及其与临床病理特征的关系

MMP-9也主要表达于肿瘤细胞胞质(图1b)。胰腺癌MMP-9的阳性表达率为75.0%，正常胰腺为20.0%，差异显著(P<0.01)。MMP-9的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、淋巴结转移及远处转移之间无关(P>0.05)，但TNM Ⅰ、Ⅱ期患者的MMP-9阳性率明显低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05),高分化肿瘤的阳性率明显低于低分化者(P<0.01，表1)。胰腺癌组织中RECK和MMP-9的表达呈负相关(r=-0.536，P<0.01)。

图1RECK(a)和MMP-9(b)在胰腺癌组织中的表达(免疫组化 ×400)

讨 论

许多研究表明，RECK在大部分正常组织或正常细胞株中高表达，但在许多肿瘤组织或肿瘤细胞株中低表达甚至不表达，RECK的表达量与肿瘤侵袭力呈负相关。Song等[2]报道，52%的胃癌组织RECK表达缺失，且与肿瘤分期、淋巴结转移呈负相关。宋国庆等[3]报道，胃癌RECK的表达率为51.9%，并随肿瘤浸润深度的加深、淋巴结转移和远处转移的发生、临床分期的提高以及肿瘤分化程度的降低而降低。Furumoto等[4]报道，肝癌组织RECK高表达者与较好的预后显著相关。李晟磊等[5]报道，食管癌RECK的表达明显低于正常食管组织，且与肿瘤的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关。Masui等[6]报道，胰腺癌组织RECK表达率为52%，明显低于癌旁组织，且与肿瘤的侵袭能力、预后成反比。本结果显示，胰腺癌组织RECK表达明显低于正常胰腺组织。RECK表达与患者TNM分期、远处转移呈负相关。提示RECK基因表达的缺失可能与胰腺癌的侵袭转移有关。

MMPs是降解基膜和细胞外基质的主要酶类，其中MMP-9还可以通过促进新生血管的生成而促进肿瘤的生长和转移。Nagakawa等[7]报道，32例胰腺癌组织MMP-9的阳性率为50%，有远处转移者的阳性率明显高于无远处转移者。Pryczynicz等[8]报道，胰腺癌MMP-9阳性率为36%，且与淋巴结转移及远处转移相关。本结果表明，胰腺癌MMP-9表达显著高于正常胰腺组织,且与肿瘤分化程度、临床分期呈正相关。提示MMP-9的表达也与胰腺癌的侵袭过程有关。本组胰腺癌中MMP-9表达与远处转移无关，与文献报道不一致，不排除是由于样本量较少所致。

研究发现[1]，在恶性细胞株中恢复RECK的表达，除能抑制细胞浸润外，还伴有MMP-9的分泌减少，提示RECK可能对MMP-9产生负调节作用。本研究结果显示，RECK和MMP-9在胰腺癌肿瘤组织中的表达呈负相关，提示RECK蛋白可能通过抑制MMP-9表达来发挥抑制胰腺癌的侵袭作用。

[1] Takahashi C，Sheng Z，Horan TP,et al．Regulation of matrix metalloproteinase-9 and inhibition of tumor invasion bv the membrane anchored glycoprotein RECK．Proc Natl Acad Sci USA，1998，95:13221-13226.

[2] Song SY，Son HJ，Nam E，et al．Expression of reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs (RECK)as a prognostic indicator in gastric cancer．Eur J Cancer，2006，42:101-108.

[3] 宋国庆,王强. RECK，MMP-9及TGF-β1在胃癌组织中的表达及其相互关系.世界华人消化杂志，2007,15:1731-1737.

[4] Furumoto K，Arii S，Mori A，et al．RECK gene expression in hepatocellular carcinoma：correlation with invasion-related clinicopathological factors and its clinical significance．Reverse-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs.Hepatology，2001,33：189-195．

[5] 李晟磊,赵秋民,刘宗文，等.食管鳞癌中RECK和MMP-9蛋白表达相关性及临床病理意义.世界华人消化杂志，2007，15:1082-1086.

[6] Masui T，Doi R，Koshiba T，et al．RECK expression in pancreatic cancer:its correlation with lower invasiveness and better prognosis．Clin Cancer Res，2003，9:1779-1784.

[7] Nagakawa Y, Aoki T，Kasuya K，et al．Histologic features of venous invasion，expression of Vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase-2 and matrix metalloproteinase-9，and the relation with liver metastasis in pancreatic cancer．Pancreas，2002，24:169-178．

[8] Pryczynicz A,Guzinska-Ustymowicz K,Dymicka-Piekarska V,et al.Expression of matrix metalloproteinase 9 in pancreatic ductal carcinoma is associated with tumor metastasis formation.Folia Histochem Cytobiol,2007,45:37-40.

2009-11-06)

(本文编辑：屠振兴)

ExpressionofRECKandMMP-9inpancreaticcanceranditsclinicopathologicalsignificance

YESu-su,TIANZi-bin,WEILiang-zhou,ZHAOQing-xi,KONGXin-juan,LIYu-jun.

DepartmentofGastroenterology,AffiliatedHospital,MedicalCollege,QingdaoUniversity,Qingdao266003,China

Correspondingauthor:TIANZi-bin,Email:tianzb@qyfy.cn

ObjectiveTo investigate the expression of RECK and MMP-9 in pancreatic cancer and to explore the relationship between RECK, MMP-9 expression and the clinicopathological characteristics.MethodsPV6000 immunohistochemical method was used to detect the expression of RECK and MMP-9 in 28 cases of pancreatic cancer and 10 cases of normal pancreatic tissue. All the statistical analyses were performed by using SPSS 13.0 statistical software to determine the relationship between RECK, MMP-9 expression and the clinicopathological characteristics.ResultsThe overall positive rate of RECK espression was 46.43% (13/28) in pancreatic cancer, which was significantly lower than that in normal pancreatic tissue (90%, 9/10). The positive rate of RECK espression in Ⅰ+Ⅱ clinical stage (75.0%,9/12) was significantly higher than that in Ⅲ+Ⅳ stage (25.0%,4/16P<0.05). The positive rate of RECK expression in cases without distant metastases (60.0%,12/60) was significantly higher than that in cases with distant metastasis (12.5%, 1/8,P<0.05). The overall positive rate of MMP-9 was 75% (21/28) in pancreatic cancer, and 20% (2/10) in normal pancreatic tissue. The comparison between these two groups indicated a significant difference (P<0.01). The positive rate of MMP-9 in Ⅰ+Ⅱclinical stage(50.0%,6/12) was significantly lower than that in Ⅲ+Ⅳ stage (93.8,15/16,P<0.05). The positive rate of MMP-9 in well differentiation group(33.3%,1/3) was significantly lower than that in poor differentiation group (100%,12/12,P<0.01). The expression of RECK was negatively correlated with the expression of MMP-9(r=-0.536,P<0.01).ConclusionsRECK is lowly expressed in pancreatic cancer, but MMP-9 is highly expressed. RECK and MMP-9 may serve as important markers in the evaluation of tumor stage.

Pancreatic neoplasms; Matrix metalloproteinase-9; RECK; Immunohistochemistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.03.015

266003 青岛，青岛大学医学院附属医院消化内科

田字彬，Email:tianzb@qyfy.cn