赖诺普利聚乙烯醇微粒的制备及其质量评价Δ

吴俊珠，金拓（1.大理学院药学院，大理市671000；2.上海交通大学药学院，上海市200240）

赖诺普利聚乙烯醇微粒的制备及其质量评价Δ

吴俊珠1，2＊，金拓2#（1.大理学院药学院，大理市671000；2.上海交通大学药学院，上海市200240）

目的：制备赖诺普利聚乙烯醇微粒并评价其质量。方法：以聚乙烯醇为载体，采用喷雾干燥法制备赖诺普利聚乙烯醇微粒。考察制剂的形态、粒径、跨度、载药量、包封率和体外溶出度。结果：所制赖诺普利聚乙烯醇微粒为近球形，表面有孔，平均粒径为17.29μm，跨度为0.88，载药量为31.40%，包封率为94.20%，30min时体外累积溶出百分率达90%以上。结论：该制剂制备工艺简单，重复性好，质量检测指标合格。

赖诺普利；聚乙烯醇；微粒；喷雾干燥法；制备；质量评价

赖诺普利（Lisinopril，LIS）是第3代血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI），临床用于高血压和心力衰竭的治疗。目前，心血管疾病的治疗和二级预防常常需要多种药物联合使用[1]，但由此可致患者用药的顺应性较差，而开发携带、使用方便的复方剂型可解决此问题。为使LIS与其它活性成分（尤其是液体鱼油）制备复方制剂时有良好的稳定性，笔者以理化性质较稳定、生物相容性好的聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol，PVA）为载体[2]制备LIS-PVA微粒（LIS-PVA-MP）。PVA-MP的制备有多种方法：以醋酸乙烯为原料，采用乳化-聚合-水解-交联的方法制备交联度不同双层结构的小球（PVA beads）[3，4]；或以PVA为原料，采用乳化-物理交联法[2]以及乳化-化学交联法[5]制备微球；或采用喷雾干燥法制备载药微粒[6]。本研究中笔者采用喷雾干燥法制备LIS-PVA-MP，通过正交试验考查处方、工艺对载药微粒粒径、形态、载药量、包封率的影响，并进行体外溶出试验，为该复方制剂的研究提供基础。

1 材料

1.1 仪器

OPDT-8喷雾干燥机（上海大川原干燥设备有限公司）；2102PC型紫外可见分光光度计（美国Unico公司）；高效液相色谱（HPLC）仪，包括LC-10AT VP泵、SPD-10AVP紫外检测器（日本岛津公司）；pH S-3TC数显pH计（上海天达仪器有限公司）；KQ-100DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；S-2150型扫描电镜（日本Hitachi公司）；CIS 100粒度粒形分析仪（荷兰Ankersmid仪器有限公司）；RCZ-6B1型药物溶出度仪（上海黄海药检仪器有限公司）。

1.2 试药

赖诺普利（批号：050912，纯度：98.2%）及赖诺普利精制品（批号：050912，纯度：99.91%）均由大洋化工有限公司提供；己烷磺酸钠（国药集团化学试剂有限公司，含量：≥98.0%）；PVA（Mr：13000～23000，醇解度：87%～89%；Mr：31000～50000，醇解度：87%～89%；Mr：85000～124000，醇解度：87%～89%）购自美国Aldrich公司；磷酸二氢钾、磷酸、氢氧化钠、盐酸为分析纯，液体石蜡为化学纯，乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 分析方法建立

2.1.1 检测波长的选择。以0.1mol·L－1盐酸（以下简称溶剂）为溶剂，制备浓度为100μg·mL－1的LIS溶液及400μg·mL－1的PVA溶液，以溶剂为空白，在紫外可见分光光度计上200～400nm波长范围内进行扫描，结果LIS在215nm波长附近处有最大吸收峰，而PVA在此波长处几乎无吸收，故选择215nm为检测波长。

2.1.2 色谱条件。色谱柱：Shim-Pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-pH 2.5磷酸盐缓冲液（含0.0053mol·L－1己烷磺酸钠）＝20∶80；流速：0.5mL·min－1；检测波长：215nm ；柱温：55℃；进样量：20μL。

2.1.3 系统适用性。在上述色谱条件下，以0.1mol·L－1盐酸为溶剂，制备LIS精制品溶液、供试品溶液（按“2.3.4”项下方法制备），分别取上述2种溶液及空白样品溶液（取微粒处方用量的PVA，按供试品溶液制备方法制备）各20μL进样，记录色谱。结果，PVA对主药测定无干扰。3种溶液色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.精制品溶液；B.供试品溶液；C.空白样品溶液Fig 2 HPLC chromatographyA.reference substance solution；B.samples solution；C.blank sample solution

2.1.4 线性范围与最低检测限。精密称定LIS精制品10mg，用溶剂约50mL溶解，转移至100mL容量瓶中，溶剂稀释至刻度，摇匀，得精制品贮备液a。精密吸取50mL贮备液a置于100mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，得贮备液b。分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL贮备液b置于10mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，配制一系列不同浓度的LIS溶液。在上述色谱条件下，分别取20μL进样，每个浓度重复进样3次，以LIS峰面积平均值（A）对其浓度（C）回归，得回归方程：A＝30217C+13774（r＝0.9998），结果，LIS检测浓度在5～100μg·mL－1范围内线性关系良好，最低检测限为8ng（信噪比S/N＝3）。

2.1.5 精密度试验。日内精密度：取20μg·mL－1精制品溶液，连续重复进样6次，其峰面积RSD＝0.84%。日间精密度：3d内分别制备20μg·mL－1精制品溶液，重复进样6次，其峰面积RSD＝1.36%。

2.1.6 回收率试验。分别精密称取LIS精制品10.0、11.0、10.4mg，按1∶3配比精密加入PVA，混匀，得3份模拟微粒，分别置于烧杯中，加入溶剂约50mL，60℃水浴加热5min，完全溶解，转移至100mL容量瓶中，溶剂稀释至刻度，摇匀。再对每份溶液继续分别精密吸取0.5、5.0mL置于10mL容量瓶中，溶剂稀释至刻度，摇匀，共制备低、中、高浓度的9份溶液，按上述色谱条件进样，记录峰面积，计算回收率，结果样品的平均回收率为100.3%，RSD＝1.0%（n＝9），符合含量测定要求。

2.1.7 重复性试验。取同一批号的LIS-PVA-MP，分别精密称定5份，按“2.3.4”项下操作制备供试品溶液及对照液，按上述色谱条件进样，记录峰面积，以外标法计算微粒含药量及载药量（%），结果微粒中LIS平均载药量为39.62%，RSD＝1.56%。

2.1.8 稳定性试验。将供试品溶液置于冰箱中4℃保存，分别于0、2、6、8、12、24h 取样，按上述色谱条件进样，6次所得峰面积的RSD＝0.66%，表明样品溶液于4℃保存在24h内基本稳定。

2.2 LIS-PVA-MP制备工艺

称取PVA加入适量去离子水，水浴加热溶解，放冷后加入LIS，搅拌使之溶解制备含药料液，采用进风温度185℃、出风温度95℃，旋风分离器压力0.65kPa，喷雾干燥法制备LISPVA-MP。

2.3 正交试验优化LIS-PVA-MP的处方与工艺

2.3.1 正交试验设计。据初步试验结果，选择对微粒粒径、分布、形态、载药量和包封率有影响的4个因素，每个因素取3个水平，采用L9（34）正交设计表安排试验，因素及水平见表1。

表1 因素水平表Tab 1Factors and levels

2.3.2 粒径及分布测定。取适量LIS-PVA-MP，加入约5mL轻质液体石蜡，超声波分散10min，用粒度粒形分析仪测定平均粒径、D10、D50、D90，并由此计算跨度＝（D90－D10）/D50。

2.3.3 微粒形态的观察。取适量LIS-PVA-MP分散于导电胶表面，喷金后，采用扫描电镜观察其形态。根据颗粒的圆整度、表面凹陷程度、粘连程度对各微粒评分。评分标准：球形+++（3），近球形++（2），不规则形（0）；无凹陷++++（4），略有凹陷+++（3），凹陷较多++（2），不规则形（0）；颗粒无粘连+++（3），颗粒轻微粘连++（2），颗粒粘连较多（1），颗粒呈条状丝状（0）。

2.3.4 载药量与包封率的测定。取LIS-PVA-MP适量精密称定，置于烧杯中，加入溶剂约50mL，60℃水浴加热5min，完全溶解，放冷，转移至100mL容量瓶中，溶剂稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；同时配制LIS对照液，按上述色谱条件，分别取供试品溶液及对照液各20μL进样，记录峰面积，外标法计算含量。按微粒中LIS的百分含量（%，W/W）计算载药量，根据实际药物含量与理论药物含量比值的百分率计算包封率（EE%）。

2.3.5 正交试验结果与分析。采用综合评分法优化处方、工艺，按评分标准：S1＝（10/平均粒径）×2，S2＝（2/跨度）×2，S3＝（载药量/10）×2，S4＝（包封率/10）×2，S5＝形态评分×2，Y＝S1+S2+S3+S4+S5。正交试验的9次试验结果见表2。

表2 正交试验结果Tab 2 Results of orthogonal test

以A、B、C、D因素分别为自变量X1、X2、X3、X4，以Y为因变量，采用Excel电子表格进行多元曲线回归，得回归方程：Y＝－29.876+0.00031959X1+127.09X2－ 1.9436X3+1.5712X4（r＝0.9355），标准误差S＝2.4403，F＝7.0087＞F0.05（4，4）＝6.3882，回归具有显著性（α＝0.05）。

根据回归方程，当X1取31000、X2取0.05、X3取0.33（1∶3）、X4取40时，总分Y最高，即A2B3C3D3。然而，考虑到实际的试验中，料液中PVA的浓度不宜太高，否则制得的微粒易发生粘连，LIS-PVA投料比也不宜取最小，否则载药量过小。因此，根据实际情况，本试验中取A2B2C2D3为优化结果。

2.3.6 优化条件验证。按A2B2C2D3条件制备3批微粒，分别测定粒径、跨度、粒径分布，考查微粒形态（结果评为9分），并测定载药量与包封率，相关结果见表3、图2、图3。

表3 3批微粒各项指标测定结果Tab 3 Index determination of 3batches of LIS-PVA-MP

图2 微粒扫描电镜图（×1000）Fig 2 Scanning electron micrograph（×1000）

图3 微粒的粒径分布图Fig 3 Distribution of particle size of LIS-PVA-MP

由图2可见，LIS-PVA-MP为近球形，表面有孔、略有凹陷。按评分标准为验证试验的产品微粒打分，结果Y＝48.82。将验证试验的自变量代入回归方程，可求得预测值y＝45.72，预测范围为 y±U0.05×S，查表U0.05＝1.960，预测范围为（40.94，50.50）。优化后的实际得分为48.82，高于前9个试验号的得分，并在预测范围内，与预测值之间的偏差为6.78%。

2.4 LIS-PVA-MP体外溶出度考察

对验证试验制得的3批微粒，各称取约相当于LIS 10mg的微粒装于胶囊壳中，放入沉降篮内，根据《美国药典》28版（简称USP 28）[7]LIS片溶出度测定方法，分别在0、5、10、15、20、30、40、50、60、75min 时各取5mL，并向溶出杯内补加溶出介质5mL，采用“2.1.2”所述色谱条件测定，计算累积溶出百分率（n＝3），结果见图4。

图4 LIS-PVA-MP体外溶出曲线（n＝3）Fig 4 Dissolution curves of LIS-PVA-MP（n＝3）

图4 表明，微粒15min时溶出50%左右，30min溶出达90%以上，40min可达98%以上，其释药规律符合Weibull方程：lnln[1/（1－F（t））]＝1.6841ln（t－1.05）－4.7517（r＝0.9990），T50＝14.57min，Td＝17.85min。

3 讨论

3.1 色谱条件的确立

基于USP 28LIS片含量测定方法，以本文所述色谱系统，色谱柱为Shim-Pack VP-ODS，其他条件按USP 28进行测定。结果主峰拖尾严重，无法达到其规定的标准。通过单因素考查，调整流动相pH值、柱温、流速，可获得适宜保留时间，改善LIS的峰形和拖尾，这与Bouabdallah 和Kocijan等[8，9]的报道一致。最终确立了条件相对温和的流动相pH 2.5、柱温55℃、流速0.5mL·min－1的色谱条件，理论塔板数按LIS计算为1903，拖尾因子为1.3，符合USP 28对该片剂的规定。

3.2 喷雾干燥法制备LIS-PVA-MP

根据PVA、LIS的性质以及料液喷雾干燥的效果，确定进风温度为185℃，出风温度为95℃。雾化器转速对微粒形态、大小影响很大，其低于36Hz时，粒径大、分布宽，微粒易发生粘连，故选择在36～40Hz作进一步考查。

通过单因素考查，采用醇解度为87%～89%，Mr为13000～23000、31000～50000、85000～124000的PVA制备LIS-PVA-MP，发现PVA Mr对微粒大小、形态影响较大，Mr为85000～124000的PVA含药料液由于黏度大不能很好地被雾化，干燥过程中易形成丝状、条状物，故选择的Mr为13000～23000、31000～50000采用正交试验作进一步考查。PVA浓度对微粒大小、形态影响也较大，6%PVA料液所得微粒发生粘连，表面变形严重；此外随浓度增大，载药量、包封率略有增加，但趋势并不显著。投药比对微粒载药量、包封率有较大影响，随投药比增大，载药量增大，但包封率降低。

由初步试验的结果，对各主要因素的水平作适当调整后进一步安排了正交试验进行优化。按优化的参数制备LIS-PVA-MP，结果其粒径和粒径分布适当，有比较满意的载药量、包封率及体外溶出速度，且制备工艺简单，重复性好。

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Preparation and Quality Evaluation of Lisinopril Polyvinyl Alcohol Particles

WU Jun-zhu（School of Pharmacy，Dali University，Dali 671000，China）
WU Jun-zhu，JIN Tuo（School of Pharmacy，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200240，China）

OBJECTIVE：To prepare lisinopril-loaded polyvinyl alcohol（PVA）particles（LIS-PVA-P）and establish its quality control method.METHODS：LIS-PVA-P was prepared by spray-drying process with PVA as carrier.The preparation was detected in terms of morphology，particle size，span，drug-loading capacity，encapsulation and in vitro dissolution.RESULTS：The preparation assumed sphere with porous surface.The average particle size was 17.29μm while drug-loading capacity 31.40%，encapsulation 94.20%，Span was 0.88，90%of the drug loads were released within 30min.CONCLUSION：The preparation process is simple，good in repeatability and qualified in quality.

Lisinopril；Polyvinyl alcohol；Particles；Spray-drying process；Preparation；Quality evaluation

R943；R972

A

1001-0408（2010）09-0825-04

2009-04-09

2009-09-25）