古墨膏对小鼠腹腔毛细血管通透性及气囊炎性模型气囊灌洗液中白细胞数和一氧化氮含量影响的实验研究

王思农

（甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000）

古墨膏对小鼠腹腔毛细血管通透性及气囊炎性模型气囊灌洗液中白细胞数和一氧化氮含量影响的实验研究

王思农

（甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000）

目的研究古墨膏的抗炎作用，并初步探讨其作用机制。方法 采用小鼠气囊炎性模型观察古墨膏的抗炎作用。结果 古墨膏能明显降低小鼠气囊灌洗液中白细胞数和一氧化氮（NO）含量，并具有抑制冰醋酸引起小鼠腹腔毛细血管通透性增加的作用。结论 古墨膏具有明显的抗炎作用，其机理可能与抑制NO等炎症介质合成、抑制脂质过氧化、增强自由基清除能力、抑制白细胞渗出有关。

古墨膏；抗炎作用；实验研究

我院制剂古墨膏对体表感染、肛门部疾病，尤其是便血、肿痛、水肿等症状治疗效果非常显著。以前我们只注重古墨膏的临床应用，对其本质研究较少。本实验利用动物模型，观察古墨膏的抗炎作用，并对其机理作初步探讨。

1 材料

1.1 受试药与试剂

古墨膏（主要组成：古墨、黄连、猪胆粉、冰片等），我院制剂室配制，批号为050216，赋形剂为凡士林；阳性对照为马应龙麝香痔疮膏，武汉马应龙药业集团股份有限公司生产，批号为050323；1%伊文思蓝、0.6%冰醋酸，甘肃中医学院实验室提供；一氧化氮（NO）测试盒，购自南京建成生物工程研究所。

1.2 主要仪器

Sartorius分析天平，德国赛多利斯公司生产；722可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司生产；T6紫外-可见光分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司生产。

1.3 动物

昆明种小鼠，SPF 级，雌雄各半，体重（20±2）g，甘肃中医学院实验动物中心提供，合格证为SCXK（甘）2009-0000419。

1.4 古墨膏制备

将煅古墨研粉，过100目筛，黄连粉碎为100目细粉，把煅古墨、猪胆粉、黄连粉置乳钵中，按等量递增法分别加入麝香、冰片等研磨混匀，过100目筛。熔化凡士林，自然冷却至表皮微凝固时（38～60℃），徐徐加入上述药粉，充分搅拌，混匀，装入油膏盒，每盒25g。

1.5 统计方法

采用SPSS13.0统计软件包处理数据。数据以均数±标准差（±s）表示。2组间资料比较采用t检验（方差不齐时采用t′检验）。

2 方法

2.1 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响[1]

将40只小鼠按体重随机分为空白组，模型组和古墨膏高、低剂量组。直肠给药，古墨膏剂量分别为 375.0、187.5mg/cm2。空白组不给予任何处理。连续给药6d。末次给药后1h尾静脉注射1%伊文思蓝生理盐水溶液0.1毫升/只，随即腹腔注射0.6%冰醋酸生理盐水溶液0.2毫升/只。30min后处死小鼠，用蒸馏水5ml，充分洗涤腹腔，收集洗涤液，1 000r/min离心10min，取上清液于722可见分光光度计590 nm波长处读取光密度（OD）值。

2.2 对小鼠气囊炎性模型气囊灌洗液中白细胞数和NO含量的影响[1，2]

40只小鼠分组同上。直肠给药，连续7d。第1天给药前于小鼠肩胛区皮下无菌注入空气5ml形成气囊。第4天补充注射空气3ml维持气囊膨胀。末次给药1h后除空白组外其他组小鼠气囊内注入0.25%角叉菜胶1ml，立即将鼠背向下徐徐转动。空白组气囊内注入等容量生理盐水。致炎6h后以生理盐水4ml灌洗气囊，收集灌洗液并定量其体积，2 000r/min离心10min，沉淀用5ml生理盐水重悬并进行白细胞计数；取上清液0.05ml，采用化学法NO试剂盒测定NO含量。

3 结果

3.1 古墨膏对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（见表1）

3.2古墨膏对小鼠气囊炎性模型气囊灌洗液中白细胞数、NO含量的影响（见表2）

表1 古墨膏对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（n=10，±s）

表1 古墨膏对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（n=10，±s）

注：与空白组比较，※P＜0.05；与模型组比较，▲▲P＜0.01；与古墨膏低剂量组比较，#P＜0.05

组别 剂量（mg/cm2） OD值空白组模型组古墨膏高剂量组古墨膏低剂量组——375.0 187.5 0.067±0.023▲▲0.127±0.041 0.058±0.018※▲▲#0.074±0.015※▲▲

表2 古墨膏对小鼠气囊炎性模型气囊灌洗液中白细胞数和NO含量的影响（n=10，±s）

表2 古墨膏对小鼠气囊炎性模型气囊灌洗液中白细胞数和NO含量的影响（n=10，±s）

注：与空白组比较，※※P＜0.01；与模型组比较，▲▲P＜0.01；与古墨膏低剂量组比较，#P＜0.05

组别 剂量（mg/cm2） 白细胞数（×104/ml） NO含量（mg/L）空白组模型组古墨膏高剂量组古墨膏低剂量组——375.0 187.5 11.250±1.807▲▲89.760±18.647※※34.350±11.399※※▲▲#57.820±15.664※※▲▲4.932±2.477▲▲76.529±19.262※※5.715±2.450※※▲▲#8.617±3.497※※▲▲

4 讨论

外科创伤以及创口感染在临床上十分常见，严重影响病人生活质量。创面愈合受多种因素影响，除常见各种感染外，还与全身与局部营养状况有关，在细胞分子学上主要与一些炎症介质释放和细胞生长因子分泌有关。细胞因子在炎症发生、发展过程中有重要作用，其中NO等是促进炎症反应的重要介质。

古墨膏能显著降低小鼠气囊灌洗液中白细胞数和NO含量，并具有抑制冰醋酸引起小鼠腹腔毛细血管通透性增加的作用。

综上所述，古墨膏对动物炎症模型具有明显的抗炎作用。其机理可能与抑制白细胞向炎症部位游走、抑制NO合成、对抗自由基损伤有关。

[1]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2005.

[2]李莹，秦献辉.复方鱼腥草胶囊抗炎作用及机制实验[J].沈阳药科大学学报，2004，21（5）:371～374.

G424.31

B

1671-1246（2010）03-0099-02

注:本文为甘肃省中医管理局计划项目（06-GSZ-21）{甘卫中发（2006）-298号}