日粮酪氨酸水平对9～12周龄泰和乌骨鸡生产性能及组织黑色素含量的影响

赵艳平 黎观红 瞿明仁 李建喜

泰和乌骨鸡（Chinese Taihe Chicken）原产于江西省泰和县，具有乌皮、乌肉、乌骨等十大特征，是我国特有的珍贵家禽[1]，它集药、补、食三大功能于一体,对人体具有特殊的滋补功能,可调节生理机能,提高机体的免疫力。乌骨鸡与普通鸡最明显的差异就是黑色素。研究表明乌骨鸡中的黑色素具有保护功效,可以避免紫外线引起的急慢性改变,具有清除自由基抗氧化等功能,从而可以预防癌症、抗衰老、提高肌体的免疫力[2-3]。《本草纲目》中记载：泰和乌骨鸡的入药效果与乌鸡皮、骨、肉中的黑色素的深浅有关，其颜色愈黑者，入药愈佳[4]。目前，对泰和乌骨鸡药理作用的解释主要归因于泰和乌骨鸡机体的黑色素，认为乌骨鸡的经济与药用价值主要决定于乌骨鸡的“乌色”性状。因此，提高泰和乌骨鸡体内黑色素含量，是提高泰和乌骨鸡药用滋补价值的重要措施。国内外对乌骨鸡黑色素的分布、沉积规律、乌度特征以及黑色素的物理化学性质、基因调控等方面进行了大量研究[5-9]。然而，到目前为止很少见有如何采用营养调控措施来提高泰和乌骨鸡黑色素含量及药用价值的研究报道。

动物体内黑色素是由酪氨酸经酪氨酸酶的作用，经过一系列复杂的生物转化过程而形成的。酪氨酸是黑色素合成的前体物质[10]，由此推断，日粮酪氨酸水平可能对泰和乌骨鸡组织黑色素的合成具有重要影响。为此，本试验采用6种酪氨酸水平的日粮饲喂泰和乌骨鸡，观察日粮酪氨酸水平对泰和乌骨鸡9～12周龄生产性能及血清和组织中游离酪氨酸含量的影响和组织中黑色素含量的影响，从而为利用营养调控技术提高泰和乌骨鸡药用滋补价值提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验设计

采用单因子试验设计方法。选用健康、体重均匀的56日龄泰和乌骨鸡270只，随机分成6个处理组，每个处理组设3个重复，每个重复15只鸡，饲养至12周龄。各组间初始体重无显著差异（P＞0.05）。在试验期，6个处理组分别饲喂酪氨酸水平为0.45%、0.65%、0.85%、1.05%、1.25%和1.45%的日粮。

1.2 试验日粮

基础日粮配方及营养水平见表1，基础日粮酪氨酸水平为0.45%（实测值）。在基础日粮中按照试验设计方法分别添加不同水平的晶体酪氨酸，使试验日粮酪氨酸分别达到相应水平。所有日粮除酪氨酸外，其余养分水平均相同。酪氨酸购于北京嘉康源有限公司，纯度为98.5%以上。

表1 基础日粮组成及营养水平（风干基础）

1.3 饲养管理

试验于2008年12月～2009年1月在江西农业大学动物科技学院饲养实验室进行。各处理组泰和乌骨鸡的饲养条件完全相同。试验鸡采取随机分层立体饲养，自由饮水，自由采食，室温保持在22～24℃，湿度保持在55%～65%。定期清理打扫鸡舍卫生并消毒，每天冲洗饮水器。按照正常免疫程序进行免疫。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 生产性能指标

于12周龄末晨喂前逐只空腹称重，记录各重复的饲料消耗量，计算日增重、日采食量和料重比。

1.4.2 血清及组织中游离酪氨酸含量的测定

第12周龄末从每处理组中选1只共18只健康状况正常，接近平均体重的乌骨鸡，于清晨空腹称重后，立即宰杀放血，收集约5 ml血液于EP管中，室温静置30 min后，3 500 r/min离心3 min，取得血清并分装，-20℃保存备用。打开腹腔，分别取心脏、肝脏、肌肉（胸部）、皮肤（胸部），置于-20℃冰箱中保存。

样品前处理：将样品从冰箱中取出，置室温下解冻后取组织0.5 g加入1 ml生理盐水在冰浴中匀浆2 min，用1 ml生理盐水清洗匀浆器3次，再用0.5 ml生理盐水清洗匀浆器1次，合并匀浆液和清洗液，然后置于低温高速离心机中4℃离心15min（12000r/min）将上清液作为组织待测液，装入5 ml的EP管中，置于-20℃冰箱中冷藏待测。

测定方法参照邹明珠等[11]的方法并稍加改进：按表2操作程序进行检测,用722可见分光光度计测定吸光度，波长480 nm，比色杯光径1 cm，空白管调零，读取0 min时的吸光度，按下列公式计算：

样品中游离酪氨酸的含量（mol/l）=[（A+0.017）/3.1]×10-3。

表2 血清及组织游离酪氨酸含量测定步骤

1.4.3 组织中黑色素含量的测定

参照Ozeki等[12]（1995）的方法并稍加改进。准确称取组织10 mg溶解在1 ml的Soluene-350：水 =9：1(V/V)试剂中，沸水浴45 min，冷却，用722可见分光光度计在500 nm测定吸光度。

1.5 统计分析

所有结果以平均数±标准差表示。采用SPSS 13.0软件对数据进行方差分析和Duncan's多重比较。

2 结果与分析

2.1 日粮酪氨酸水平对泰和乌骨鸡生产性能的影响（见表3）

由表3可知，日粮酪氨酸水平显著影响了泰和乌骨鸡平均日增重、料重比（P＜0.05），开始平均日增重随着日粮酪氨酸水平的提高而提高，料重比则下降，到添加水平为1.05%时的平均日增重最大，料重比最低，之后继续提高日粮酪氨酸水平，则平均日增重降低，料重比增大。此外，酪氨酸水平极显著影响（P＜0.01）平均日采食量。

2.2 日粮酪氨酸水平对泰和乌骨鸡血清及组织中游离酪氨酸含量的影响（见表4）

表3 不同日粮酪氨酸水平对9～12周龄泰和乌骨鸡生产性能的影响

表4 不同日粮酪氨酸水平对12周龄泰和乌骨鸡血清及组织中游离酪氨酸含量的影响（mol/l）

由表4可知，日粮酪氨酸水平显著影响血清及组织中游离酪氨酸含量（P＜0.05），随着日粮中酪氨酸添加水平的提高血清及组织中游离酪氨酸的含量先增加后降低。心脏、肌肉、皮肤组织中游离酪氨酸的含量在1.25%水平时达到最高，且与0.45%水平组差异极显著（P＜0.01）；而血清和肝脏组织中游离酪氨酸的含量在0.85%水平时达到最高。

2.3 日粮酪氨酸水平对泰和乌骨鸡不同组织中黑色素含量的影响（见表5）

日粮酪氨酸水平极显著影响组织中黑色素的含量（P＜0.01），随着日粮酪氨酸添加水平的提高组织中黑色素含量先增加后降低。肝脏、肌肉、皮肤中黑色素的含量在1.05%水平时达到最高且与0.45%水平组差异极显著（P＜0.01）；而心脏组织中黑色素的含量在1.25%水平达到最高。

表5 不同日粮酪氨酸水平对12周龄泰和乌骨鸡不同组织中黑色素含量的影响

3 讨论

瞿明仁[13]和Li等[14]研究发现，泰和乌骨鸡对酪氨酸需要量与外来肉鸡及其它地方品种鸡相比存在很大差异。泰和乌骨鸡与生长速度相近的生长期白壳蛋鸡相比，其苯丙氨酸+酪氨酸的需要量比生长期白壳蛋鸡高18.49%～26.5%，这应与泰和乌骨鸡独特的遗传特性有关。泰和乌骨鸡与其它品种家鸡相比，最显著的区别是其体内含有大量的黑色素。乌骨鸡黑色素是由酪氨酸经一系列生化反应过程而形成的[10]，因此，泰和乌骨鸡要产生大量的黑色素，日粮中必须有足够的酪氨酸供组织黑色素的合成。在本试验条件下，日粮的酪氨酸水平（0.45%、0.65%、0.85%、1.05%、1.25%和1.45%）显著影响9～12周龄泰和乌骨鸡所有生产性能指标（P＜0.05），并且极显著影响血清及组织中游离酪氨酸的含量和组织中黑色素的含量（P＜0.01）。这进一步说明，为最大程度地促进泰和乌骨鸡组织黑色素的合成和取得最大生长速度，日粮需提供较高水平的酪氨酸，以1.05%水平为宜，而且，泰和乌骨鸡取得最大生长速度和最大黑色素沉积时，对酪氨酸的需求量是相同的。这与Solminski等[15]的细胞培养实验结果一致。令人感兴趣的是，Avraham等[16]研究发现，给运动小鼠注射非必需酪氨酸能够通过抑制5-羟色胺生成而抑制运动性食欲减退，提高小鼠采食量、认知力和运动耐受力。同样地，通过改变日粮酪氨酸浓度可调节动物（哺乳动物和鸟类动物包括鸡、鸭、火鸡等）体重[17]，当动物体重降低时，提高日粮酪氨酸水平可提高动物采食量和日增重；而当动物超重时，降低日粮酪氨酸水平可降低日增重。本试验亦发现，在一定浓度范围内，泰和乌骨鸡日增重和日采食量有随日粮酪氨酸水平的提高而有增加的趋势，且变化趋势与组织黑色素含量变化一致。由此可知，通过提高日粮酪氨酸水平不仅可以提高泰和乌骨鸡生长性能，还可促进泰和乌骨鸡组织黑色素的合成。综合各指标，日粮酪氨酸水平在1.05%时，泰和乌骨鸡可同时取得最大生长性能和组织黑色素沉积。并且Morris研究小组[18-20]发现，饲喂苯丙氨酸+酪氨酸缺乏的日粮会导致黑发猫的毛发由黑色变成红褐色，向日粮中添加充足的酪氨酸或苯丙氨酸+酪氨酸可防止这一变化；同时发现，毛发中黑色素含量与日粮酪氨酸水平（日粮苯丙氨酸含量固定为10 g/kg）成正相关关系，维持毛发最佳黑色素沉积时苯丙氨酸+酪氨酸需要量高于维持最大生长需要量的两倍。

4 小结

日粮酪氨酸水平可显著影响泰和乌骨鸡组织中黑色素的合成和生产性能的提高，在本试验的条件下，以日粮中1.05%的酪氨酸为适宜水平，泰和乌骨鸡组织中黑色素的合成量最大，生产性能最高。

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