广东部分地区猪场PRRS的血清学调查

臧莹安,蒋天宇,杨展基,李春玲

(1.仲恺农业工程学院动物科学系,广东广州 510225;2.广东梅州大浦县畜牧局,广东大浦 514200;3.广东省农业科学院兽医研究所,广东广州 510640)

广东省是中国养猪大省,2006年广东省生猪出栏量为3 662万头,其中3 000头以下中小规模养殖占65%,万头以上猪场仅占12%。在我国养猪生产格局中,大中型猪场不断增加,小型猪场不断减少。但在相当长的时间内,中小规模养殖方式仍将延续,这是我国和广东省养猪生产的基本特点[1]。近年来,猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)成为严重危害广东省中小规模猪场的重要传染病,给广大养猪户带来了巨大的经济损失,大大地挫伤了他们养猪的积极性[2-4]。本次调查采用酶联免疫吸附试验的方法[5-7]检测茂名、惠州、东莞、四会、鹤山5个地区中小规模规模化养猪场PRRS的血清抗体水平,旨在了解广东省部分地区中小规模猪场猪群中PRRSV感染情况及疫苗免疫状况,为中小规模养猪场PRRS的防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 待检血清 2008年7月至2009年1月,在茂名、惠州、东莞、四会、鹤山 5个地区,通过对中小规模猪场各个阶段猪群现场随机或猪只死亡后2 h内采集送样的方式收集猪的血清。对PRR疫苗免疫猪场,猪群首免后1个月采集血样。从各类型猪场共采集血清样品866份。其中免疫过PRR疫苗的猪场血清547份,未免疫过的猪场血清319份(具体参见结果中各表)。

1.1.2 试剂 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测试剂盒(北京爱德士元亨生物科技有限公司生产),包括已包被好抗原的96孔酶联反应板,标准阴、阳性血清,HRPO标记抗 PRV gpI抗体,TMB底物溶液,终止液,样品稀释液,10倍浓缩洗涤液等;蒸馏水。

1.1.3 仪器 酶标检测仪(美国宝特仪器有限公司 ,ELx800),洗涤器,50 μ L,100 μ L 微量移液器或连续移液器,一次性移液器吸头,稀释样品的u型96孔稀释板。

1.2 方法

按试剂盒说明书上的方法进行。用样品稀释液40倍稀释被测样品,取出抗原包被板,在做好标记的PRRS孔和NHC孔内各自加入100 μ L没有稀释的阴性对照、100 μ L没有稀释的阳性对照和100 μ L已稀释好的样本。室温下孵育 30 min。然后进行洗涤、酶标反应、显色反应和终止反应,最后测量并记录被检血清和阴阳对照血清在650nm的吸光度 A(650)。计算S/P值(样品/阳性对照比率)(具体方法参见试剂盒说明书)。

PRRS抗体的有无通过计算每个样品阳性对照(S/P)的比值判定。如果S/P＜0.4,样品应判定为PRRS抗体阴性;如果S/P≥0.4,样品应判定为PRRS抗体阳性。

2 结果

2.1 PRRS未免疫接种猪场调查结果

未免疫猪场319份血清样品检测结果表明,茂名、惠州、东莞、四会、鹤山 5个地区的猪场均有PRRSV感染(表1)。猪群的抗体阳性率在57.14%～77.08%之间,平均阳性率为66.77%,在送检的18个未免疫猪场都曾经发生过PRRSV的野毒感染,猪场阳性率达到100%。这说明,PRRSV普遍存在于广东这些地区,如果猪场的猪只未进行免疫,都极有可能遭到PRRSV野毒感染。

表1 广东5个地区未接种PRRS疫苗免疫猪场的PRRSV抗体检测结果Table 1 Antibody positive rate of pig farms not vaccinated with PRRS vaccine in 5 rigions

2.2 PRRS免疫接种猪场调查结果

547份来自PRRS免疫接种猪场的血清样品检测结果表明:茂名、惠州、东莞、四会、鹤山 5个地区的22个进行过PRRS疫苗免疫猪场的PRRSV抗体阳性率在60.94%～93.14%之间(表2)。

表2 广东5个地区已接种PRRS疫苗免疫接种猪场的PRRSV抗体检测结果Table 2 Antibody positive rate of pig farms vaccinated with P RRS vaccine in 5 rigions

从表2可以看出,进行过PRRS疫苗免疫接种过的猪场,血清抗体阳性率处于较为理想的水平,只有四会地区的猪场血清抗体阳性率低于75%(为60.94%),其他4个地区的猪场抗体水平都较高。

2.3 未免疫接种PRRSV疫苗猪场不同日龄猪感染情况调查

非免疫猪场319份不同日龄的猪血清抗体检测结果表明,生产母猪的PRRSV抗体阳性率高于仔猪,后备母猪的抗体阳性率高于生产母猪。同时发现仔猪中,3～4周龄猪的PRRSV抗体阳性率最低(45.59%),但随年龄增长逐渐升高。

生产母猪平均S/P值显著高于仔猪(P＜0.01),后备母猪的平均S/P值略高于生产母猪,但差异不显著。在仔猪中,3周龄～4周龄猪的抗体S/P值最低,随着年龄增长而逐渐升高,到16周龄的S/P值最高,随后又降到和后备母猪差不多的水平(表3)。

2.4 免疫接种猪群不同日龄猪的抗体检测情况调查

547份来自PRRS疫苗免疫猪场的血清抗体检测结果表明,生产母猪的PRRSV抗体阳性率高于仔猪,后备母猪的阳性率高于生产母猪。同时发现仔猪中,3周龄～4周龄猪的PRRSV抗体阳性率最低(72.34%),16周龄的阳性率最高(91.18%)。抗体S/P值显示,仔猪平均S/P值显著高于生产母猪(P＜0.01),后备母猪平均S/P值略高于仔猪,但差异不显著。同时发现仔猪中,3周龄～4周龄猪的PRRSV抗体S/P值最低,20周龄的S/P值最高(表4)。

表3 未接种PRRSV疫苗免疫猪场不同年龄猪感染情况Table 3 Antibody positive rate of different day-age pigs not vaccinated with PRRS vaccine

表4 PRRSV疫苗免疫接种猪场不同年龄猪感染情况Table 4 Antibody positive rate of different pigs vaccinated with PRRS vaccine

3 讨论

本调查通过对866份来自PRRS疫苗免疫猪场和非免疫猪场的血清样品进行PRRSV特异性抗体检测,结果发现东莞、广州、佛山、四会、鹤山地区的18个未免疫接种PRRS疫苗的猪场猪只存在较高水平的PRRSV感染率(57.14%～77.08%);而22个免疫接种过PRRS疫苗的猪场血清抗体阳性率为60.94%～93.14%,血清抗体阳性率平均值比未免疫猪场高,各猪场间却存在显著差异,且大多显著高于未免疫猪场。这可能和各猪场的综合防疫措施的差异有关。比较免疫和未免疫猪场相同日龄的猪只,更可以发现这个规律,免疫猪场血清抗体水平显著高于未免疫猪场。提示在保育期间免疫猪群遭遇野毒感染将提高其抗体的S/P值。未免疫猪场的野毒感染率达100%,说明PRRS野毒感染在广东地区的普遍存在。从猪场不同日龄猪的调查结果来看,不同日龄的猪群血清阳性率不一样,3周龄～4周龄最低,然后随年龄增长逐渐增高,接着在下降到后备母猪相当的水平。曾有报道,仔猪4日龄就能检测到母源抗体,并在3周龄后消失。在实验室感染条件下用ELISA方法检测到IgG的开始时间为接种后9 d～12 d。3周龄后ELISA抗体水平又逐渐升高可能与引进后备母猪时把PRRSV带到猪群或猪场中其他带毒猪循环传播有关。3周龄～4周龄猪不同亚群状态是由不同亚群母猪造成,母猪感染PRRSV会直接影响到仔猪感染[8-10],因此,建议母猪群免疫。

PRRSV的高阳性率和近年来养猪业的蓬勃发展密不可分[12]。省际间乃至国内外猪只及相关产品交流日益频繁,而相应的管理、免疫措施却不完善,由外地引进或购买猪只不隔离免疫直接混群,疫苗的选择、免疫程序不合理,不严格执行全进全出的管理模式,导致猪场暴发PRRSV的情况屡见不鲜[13]。尤其是广东地区颇具数量的中小规模猪场,由于技术管理及资金等原因,防治措施的不力,导致近年来广东地区的PRRS成为制约本地区养猪业发展的重要疾病。只有通过猪群的综合系统检测,防控技术或工程,以及逐步净化或消灭一些重要的猪病才能有效地控制猪伪狂犬病,也就是说要建立与国际接轨的中小规模猪健康养殖生物技术体系[14-15]。

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