元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响

方远书，何忠平，张 辉，裘颖儿

(浙江省金华市食品药品检验所，金华 321000)

元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响

方远书，何忠平，张 辉，裘颖儿

(浙江省金华市食品药品检验所，金华 321000)

目的 采用血清药理学实验方法，观察元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响。方法 缩宫素诱发大鼠痛经模型和前列腺素E诱发小鼠痛经模型法，对大鼠离体子宫收缩活动的影响。结果 元胡止痛胶囊的含药血清能减少缩宫素所致大鼠扭体反应次数和前列腺素E1所致小鼠扭体反应次数，并能拮抗缩宫素对大鼠离体子宫的收缩作用。结论 元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物有镇痛作用，并对大鼠离体子宫收缩有解痉作用。

元胡止痛胶囊;含药血清;痛经;模型，动物

元胡止痛胶囊是浙江天一堂药业公司生产产品，具有理气、活血、止痛之功能，对气滞血瘀的胃痛、肋痛、头痛及月经痛有较好的治疗作用，主要由元胡、白芷等组成。本实验采用血清药理学实验方法，选择含药血清对缩宫素诱发大鼠痛经模型和前列腺素E诱发小鼠痛经模型的作用，及对缩宫素引起的大鼠离体子宫收缩的作用。来比较不同时间段的含药血清的作用强弱，以确定其药效关系。

1 材料和方法

1.1 试验材料与仪器

元胡止痛胶囊，批号080504，规格2.5 g，浙江天一堂制药公司;缩宫素注射液，南京新天生物化学制药有限公司，批号080705;注射用前列腺素E1，哈药集团第六制药厂，批号090106;已烯雌酚注射液，上海通用药业股份有限公司，批号 080403。Medlab－u/Ac501H生物信号采集处理系统，南京美易科技有限公司产品，张力换能器(10g)，北京新航兴业科贸易有限公司。

1.2 动物

新西兰家兔，金华市药检所动物中心提供，合格证号SCXK(浙)2006－0078。SD大鼠，浙江省实验中心提供，合格证号 SCXK(浙)2009－0039。ICR小鼠，金华市药检所动物中心提供，合格证号SCXK(浙)2009－0040。

1.3 含药血清的制备

取新西兰家兔40只，体重2.5～3.0 kg，每只兔均灌胃给药，剂量1mL/kg(给药剂量=临床常用量×动物等效剂量系数×培养基内的稀释度)，每天早、晚各1次，连续给药7 d，各兔分别于最后一次给药后后马上取血(以 0 h表示)、0.5h、1.5 h、3 h取血1mL，置4℃保存2 h，待血液凝固，血清析出后，3 000 r/min离心10 min，取血清，40只兔血清合并在一起，置－20℃冰箱保存备用。

1.4 对缩宫素所致大鼠扭体反应的影响［1］

雌性大鼠30只，体重(200±20)g，随机分为5组，连续皮下注射己烯雌酚(人工造成动物处于相同的动情期，并提高子宫平滑肌对药物的敏感性)10 d，每日1次(首日 0.8 mg/只，第 2天至第 9天0.4 mg/只，第 10天 0.8 mg/只)，皮下注射己烯雌酚的大鼠第5天开始给受试药，连续灌胃7d。末次给己烯雌酚24 h后，再给一次实验药物，40 min后腹腔注射缩宫素2 U/只，记录给缩宫素30 min内大鼠发生的扭体反应次数(大鼠腹部收缩内凹，躯干与后肢伸展，臂部与侧肢体内旋，为子宫收缩即痛经的指标)。

1.5 对前列腺素E1所致小鼠扭体反应的影响［2］

雌性小鼠50只，体重(20±2)g，随机分为5组，连续皮下注射己烯雌酚10 d。(第1天、第10天为0.2 mg/只，其余每天注射0.1 mg/只)，在注射己烯雌酚的第5天开始，连续灌胃给药7 d，末次给己烯雌酚24 h后，再给1次受试药物，40 min后腹腔注射前列腺素E112.5 μg/10 g，观察30 min内小鼠发生的扭体反应次数。

1.6 对大鼠离体子宫的影响

营养液与温度的选择:参照不同的文献，笔者通过反复的预试验，最后选定文献［3］方法，在此温度与营养液条件下子宫既能够消除自律收缩，又能保持其敏感性。大鼠120～200 g，雌性，实验前24 h按0.2 mg/100 g体重皮下注射己烯雌酚促使动物处于动情期，以提高子宫对药物的敏感性。实验开始前将动物处死，剪取2cm长之子宫，固定于盛有子宫营养液的麦氏浴槽中(15mL)，另一端与张力换能器连接，换能器与电脑相连，调节样品前负荷为1 g(从电脑中可以直接量出子宫肌张力)，麦氏浴槽中不断通入 O2，速度每秒1～2个气泡。待子宫活动平稳后，从浴槽上方加入0.05 U(浴槽终浓度为0.003 U/mL)缩宫素，子宫平滑肌开始收缩，并且能在最高处稳定30 min，我们在缩宫素作用10 min后加入含药血清，观察子宫收缩情况。

2 结果

2.1 对缩宫素所致大鼠扭体反应的影响

由表1可见，，与0时间取血的元胡止痛胶囊含药血清比较，其0.5、1.5、3 h取血的含药血清能明显减少大鼠扭体反应次数，其中1.5 h取血的含药血清作用最强。

表1 对缩宫素所致大鼠扭体反应的影响(±s，n=10)Tab.1 Effect on writhing response of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=10)

表1 对缩宫素所致大鼠扭体反应的影响(±s，n=10)Tab.1 Effect on writhing response of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=10)

注:与0 h取血血清组比，※※P＜0.01，※P＜0.05Note:vs.the serum taken at 0 h

取血时间(h)Time to take blood Dose Writhing number 0 0.2 15.9±2.6 0.5 0.2 7.3±2.2※※1.5 0.2 1.9±0.7※※3.0 0.2 8.8±2.9※剂量(mL/kg)扭体次数

2.2 对前列腺素E1所致小鼠扭体反应的影响

由表2可见，与0时间取血的元胡止痛胶囊含药血清比较，其0.5、1.5、3 h取血的含药血清能明显减少小鼠扭体反应次数，其中1.5 h取血的含药血清作用最强。

表2 对前列腺素E1所致小鼠扭体反应的影响(±s，n=10)Tab.2 Effect on writhing response of prostaglandin E－induced dysmenorrhea model mice(±s，n=10)

表2 对前列腺素E1所致小鼠扭体反应的影响(±s，n=10)Tab.2 Effect on writhing response of prostaglandin E－induced dysmenorrhea model mice(±s，n=10)

注:与0 h取血血清组比，※※P＜0.01，※P＜0.05Note:vs.the serum taken at 0 h

取血时间(h)Time to take blood剂量(mL/kg)Dose扭体次数Writhing number 0 0.2 32.3±5.0 0.5 0.2 21.7±3.6※※1.5 0.2 13.8±3.7※※3.0 0.2 28.2±3.9※

表3 对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响(±s，n=6)Tab.3Effect on the contraction of isolated rat uterus smooth muscle of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=6)

表3 对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响(±s，n=6)Tab.3Effect on the contraction of isolated rat uterus smooth muscle of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=6)

注:同组之间加缩宫素后与再加含药血清后肌张力比较※※p＜0.01，※p＜0.05Note:Comparison of the muscle tension between the same groups after adding of oxyntocin and that after further adding of drug－containing serum

取血时间(h)剂量(mL)加缩宫素肌张力(g)加药后肌张力(g)抑制率(%)Time to take blood Dose Muscle tension after oxytocin Muscle tension after drug Inhibition 0 0.5 2.89±1.26 2.80±1.31 0 0.5 0.5 3.01±1.52 1.32±1.12※※ 56.1 1.5 0.5 2.85±1.36 0.86±0.66※※ 69.8 3.0 0.5 2.92±1.35 1.95±1.32※33.2

2.3 元胡止痛胶囊不同时间取血的含药血清对大鼠离体子宫的影响

由表3可见，当加入含药血清后子宫肌张力降低，不同时间取血，其作用不同，1.5 h取的含药血清作用最强。

3 讨论

元胡止痛胶囊，具有理气、活血、止痛之功能，对气滞血瘀的胃痛、肋痛、头痛及月经痛有较好的治疗作用。痛经多与子宫平滑肌痉挛性收缩、子宫供血不足或子宫炎症有关。缩宫素和前列腺素E1可从不同机制引起子宫平滑肌痉挛(类痛经反应)，是较公认的痛经模型［4］。注射己烯雌酚是给动物催情，人工造成动物处于相同的动情期，并提高子宫平滑肌对药物的敏感性。

本试验采用不同时间取血的元胡止痛胶囊含药血清，观察其对动物痛经模型作用。结果元胡止痛胶囊含药血清能明显缓解缩宫素和前列腺素E1所致的大鼠、小鼠扭体反应，其中1.5h取的含药血清作用最强。我们用HPLC测定不同时间取血的血清中延胡索乙素含量，结果血清中延胡索乙素含量从高到低依次为1.5、0.5、3.0 h取的血清，说明镇痛作用主要是延胡索乙素，并与含量呈正比关系。由于中药口服后其有机成分常在胃肠道内受到消化液和肠菌微生物生态转化，也就是说中药中的有效成分并不一定就是在体内直接发挥作用的成分，用含药血清进行药理实验更能反应其发挥药理作用的有效成分，通过本实验，我们认为其镇痛作用的有效成分主要是延胡索乙素。

［1］芮菁，吴燕敏，唐元泰，等.经痛宁颗粒剂治疗痛经的药理研究［J］.中药药理与临床，2001，17(3):26－27.

［2］嵇波，张露芬，朱江，等.痛经模型建立和评价方法的思考［J］.中国药理学通报，2008，24(6):712.

［3］H.Gerhard Vogel，WolfgangH.Vogel.著，杜冠华，李学军，张永祥，译.药理学实验指南—新药发现和药理学评价［M］.北京:科学出版社，2001:913.

［4］孙海燕，曹永孝，刘静，等.小鼠痛经模型的建立［J］.中国药理学报通报，2002，18(2):233－235.

Effect of the Drug Containing Serum of Yuanhuzhitong Capsule in Animal Model of Dysmenorrhea

FANG Yuan－shu，HE Zhong－ping，ZHANG Hui，Qiu Ying－er
(Jinhua Institute for Food and Drug Control，Jinhua，Zhejiang 321000，China)

Objective To observe the effect of the drug－containing serum of a traditional Chinese medicine，Yuanhuzhitong capsule，on animal model of dysmenorrhea.Methods Oxytocin－induced rat model of dysmenorrhea and prostaglandin E－induced mouse model of dysmenorrhea were prepared，and were treated with the drug containing serum.The effect of the drug－containing serum on isolated rat uterus was examined as well.Results The drug containing serum of Yuanhuzhitong capsule reduced the times of oxytocin－induced and prostaglandin E1－induced writhing response，and excerted antagonistic effect on the oxytocin－induced contraction of isolated rat uterus.Conclusion The drug containing serum of Yuanhuzhitong capsule has an analgesic effect on rat and mouse models of dysmenorrhea，and excerts a spasmolytic effect on the contraction of isolated rat uterus.

Yuanhuzhitong capsule;Drug－containing serum;dysmenorrhea;Model，rat

R－33

A

1671－7856(2010)08－0035－03

2010－05－25

浙江省分析测试基金项目(04003)。

方远书(1968－)，男，兽医师，主要研究方向:实验动物学。E－mail:F19680103@126.com。

何忠平(1964－)，男，主任药师，研究方向:动物实验与管理。E－mail:jhshaoyq@163.com。