雪貂葡萄球菌的分离与鉴定

张丽芳，佟 巍，刘先菊，代小伟，王艳蓉，刘云波

(中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所 卫生部实验动物检测中心，北京 100021)

雪貂葡萄球菌的分离与鉴定

张丽芳，佟 巍，刘先菊，代小伟，王艳蓉，刘云波

(中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所 卫生部实验动物检测中心，北京 100021)

目的 对雪貂分离菌株进行鉴定。方法 通过菌落、菌体形态、生化特征等细菌学检测方法和药敏实验对所分离菌株进行鉴定。结果 根据生物学特性和药敏实验确定所分离菌株为金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌。结论 分离菌株为金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌;中间葡萄球菌;鉴定;雪貂

1 材料

1.1 材料

1.1.1 培养基及试剂:营养琼脂培养基、MH肉汤培养基及微量生化管由陆桥生物技术公司提供，药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。

1.1.2 菌株:金黄色葡萄球菌26003，本室保存。

2 方法

2.1 细菌学检测

2.1.1 触片染色镜检 :雪貂眼部分泌物触片，染色镜检。

2.1.2 分离培养:无菌棉签蘸取眼内黄色分泌物接种血琼脂平板，37℃培养18～24 h，挑可疑菌落纯培养并涂片镜检。

2.1.3 生化鉴定:取纯培养物接种相关微量生化管37℃培养18～24 h观察结果。

2.2 药敏试验

参照文献［1］进行。

2.3 血浆凝固酶试验

参照文献［2］，金黄色葡萄球菌26003作为质控菌株。

3 结果

3.1 细菌学检测

3.1.1 触片染色镜检:眼部分泌物姬姆萨染色可见蓝紫色葡萄球菌。

3.1.2 形态特征:血平板上出现两种菌落，一种白稍黄(SA)，一种白色(SI)，直径均为1mm左右，圆形，凸起，边缘整齐，光滑湿润，菌落周围有明显 β溶血环，两种菌落分别涂片革兰染色镜检，均可见革兰阳性球菌，呈葡萄状排列。

3.1.3 生化特征:见表1。

表1 分离菌株生化实验结果Tab.1 The biochemical characteristics of the isolated strains

3.2 药敏结果 见表2

表2 分离菌株药敏实验结果Tab.2 Sensitivity test of the isolated strains

“S”:敏感 “R”:耐药Note:“S”:Sensitive; “R”:Resistant

综上所述，通过菌落菌体形态、生化反应结果和药敏试验，确定从雪貂眼部分泌物中分离到的菌株分别为金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌。

4 讨论

本研究通过菌落菌体形态、生化反应结果和药敏试验，确定从雪貂眼部分泌物中分离到的菌株分别为金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌。

葡萄球菌(Staphyloccocus)广泛分布于自然界，空气、土壤、水、物品及人和动物的皮肤及与外界相通的腔道中均有，能引起皮肤黏膜、多种组织器官的化脓性炎症。葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌和表皮葡萄球菌等20多种，其中常见的动物致病菌有金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌厌氧亚种、中间葡萄球菌及猪葡萄球菌，其中金黄色葡萄球菌作为条件致病菌已列为SPF级啮齿类实验动物必须排除的致病菌［3］，中间葡萄球菌是动物源性细菌，近年来成为人类(尤其是动物爱好者)感染常见的葡萄球菌，已有动物传染给人中间葡萄球菌的确切证据［5］。实验动物国家标准中将β溶血，血浆凝固酶阳性和甘露醇阳性作为鉴别金黄色葡萄球菌的特征性生化指标［2］，血浆凝固酶阳性，甘露醇阴性的葡萄球菌又被视为金黄色葡萄球菌一种变种［4］。中间葡萄球菌具有 β溶血，血浆凝固酶阳性，甘露醇不确定的生化特征，与金黄色葡萄球菌极易混淆，自1976年将中间葡萄球菌从金黄色葡萄球菌中分出，列为葡萄球菌的一个新种，已有多篇报道研究二者的鉴别方法［6，7］。金黄色葡萄球菌3-羟丁酮、透明质酸酶阳性，多粘菌素耐药是与中间葡萄球菌区别的主要生化指标。本研究通过透明质酸酶和多粘菌素两项指标区别2种葡萄球菌。

本研究中分离的金黄色葡萄球菌菌落白色稍黄，中间葡萄球菌为白色，但依据菌落颜色不能区别金黄色葡萄球菌与中间葡萄球菌。金黄色葡萄球菌产色素，中间葡萄球菌不产色素，金黄色葡萄球菌菌落色泽依菌株而异，呈白色、柠檬色、或黄色，由于实验人员的主观判断因素常见中间葡萄球菌被描述为黄色菌落。

金黄色葡萄球菌可引起啮齿类实验动物多种化脓性疾病，包括化脓性结膜炎和角膜炎，中间葡萄球菌的致病性未见报道，不排除中间葡萄球菌的可能性。作者认为在今后的金黄色葡萄球菌鉴定工作中应考虑中间葡萄球菌。

雪貂由于独特的生理解剖结构已广泛应用于病毒学、生殖生理、药理学等研究，逐渐实验动物化，国外已开展雪貂实验动物化及相关条件标准化的研究，如美国Taconic公司已制定了雪貂微生物和寄生虫学检测标准，而我国尚未制定雪貂的国家及地方质量控制标准。本文从雪貂中分离到金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌为雪貂微生物检测提供了理论依据。

［1］朱忠勇，主编.实用医学检验学［M］.北京:人民军医出版社.1992:543－549.

［2］中华人民共和国国家标准.GB/T14926-2001实验动物微生物学检测方法(2)［S］.北京:2001.

［3］中华人民共和国国家标准.GB/T14922.2-2001实验动物微生物学等级及检测［S］，北京:2001.

［4］陆承平，主编.兽医微生物学(第3版)［M］.北京:中国农业出版社.2002:200－204.

［5］Tanner MA.， Everett CL， Youvan DC.， et al， Molecular phylogenetic evidence for noninvasive zoonotic transmission of Staphylococcus intermedius from a canine pet to a human［J］J Clin Microbiol，2000，38(4):1628－1631.

［6］Roberson JR，Fox LK，Hancock D D，et al.Evaluation of methods for differentiation of coagulase-positive staphylococci［J］1992，J Clin.Microbiol，30:3217－3219.

［7］Wakita Y，Wano JK，Shimazu A，et al，Development of a PCR test for the identification of Staphyloccocus intermedius based on the 16S rDNA sequence［J］.J Vet Med Sci，2002，64(7):603－605.

Identification of the Staphylococcus Strains Isolated from Ferret

ZHANG Li-fang，TONG Wei，LIU Xian-ju，DAI Xiao-wei，WANG Yan-rong，LIU Yun-bo
(Institute of Laboratory Animal Science，Chinese Academy of Medical Sciences(CAMS)＆ Peking Union Medical Collage(PUMC)，Monitoring Center for Laboratory Animals of Ministry of Health，Beijing 100021，China)

Objective To detect and identify the bacterial stains isolated from ferrets.Methods Identification of the stains according to their colony shape，thallus features，biochemical characteristics and their sensitivity to medications.Results The biochemical characteristics and drug sensitivities of the isolated strains were consistent with S.aureus and S.intermedius.Conclusions The bacterial stains isolated from ferrets are S.aureus and S.intermedius.

Staphylococcus aureus，Staphyloccocus intermedius，Identification，Ferret北京某动物室实验用雪貂眼部出现脓性分泌物，送我们实验室进行细菌学检测，通过菌落、菌体形态、生化特征等细菌学检测方法和药敏实验对所分离菌株进行鉴定，确定为金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus，S.aureus)和中间葡萄球菌(Staphyloccocus intermedius，S intermedius)混合感染所导致的细菌性疾病，现报告如下。

R-33

A

1671-7856(2010)08-0050-03

2010-03-08

中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(DWS200906)。

张丽芳(1971－)，女，助理研究员，研究方向:实验动物微生物学。

刘云波(1962－)，男，研究员，Email:liu-yunbo@263.net。