高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA含量的系统适用性优化

2010-09-13郑金聪林王椿姚步华

中国医药导报 2010年32期

郑金聪，林王椿，姚步华

（福建省宁德市闽东医院，福建福安 355000）

丹参酮ⅡA是丹参的重要有效成分之一，临床上能够改善冠心病、心绞痛和胸闷等症状[1]，并具有抗血管炎症的作用[2]。目前，《中国药典》2010年版对丹参酮ⅡA含量测定采用的高效液相色谱法的流动相条件的专属性差。为此，作者采用不同流动相比例进行试验，其结果分别与在《中国药典》2010年版规定的实验条件下得出的结果进行比较，摸索出了一套稳定性好、精密度高、出峰时间更短，并适用于丹参酮ⅡA含量测定HPLC法。

1 仪器与试药

安捷伦1200高效液相色谱仪；北京京立LG16-W型离心机；梅特勒托利多AL204型电子天平；威固特VGT-1730T型超声波清洗器；丹参酮ⅡA对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110766-20041667）；甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：安捷伦 Hypersil ODS（4.0 mm ×250 mm，5 μm）；检测波长：270 nm；柱温：30℃；流速：1.0 ml/min；流动相：A（甲醇∶水为 75∶25）[3]、B （甲醇∶水为 80∶20）、C （甲醇∶水为 85∶15）；进样量：20 μl。

2.2 贮备液的制备

精密称取丹参酮ⅡA对照品0.5 mg，加甲醇溶解，制成每毫升含量约为20 μg的溶液。

2.3 结果

2.3.1 色谱图取一定量的贮备液，将其配制成浓度为10 μg/ml的溶液，在“2.1”项下方法操作进样，所得的不同比例流动相测得的丹参酮ⅡA的HPLC色谱图见图1。

2.3.2 色谱峰参数比较见表1。

表1 不同流动相比例测得的丹参酮ⅡA的色谱峰参数

由表1数据可知，①三者的理论塔板数均大于2 000，符合《中国药典》2010年版规定。②色谱峰拖尾因子T用以衡量色谱峰的对称性，在《中国药典》2010年版中规定T应为0.95～1.05，从表1 中可见，三者均符合要求。③刘德旺等[4]也采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA的含量，其保留时间为12min左右，而丹参酮ⅡA在本试验色谱条件C下的保留时间为6.225 min，与色谱条件A、色谱条件B下的保留时间和刘德旺等报道的保留时间相比，均有显著缩短，这使试验更加快速，并可节约试验成本。④由表1可知，在A、B、C三个条件下出峰的峰宽 W 相比较为：WA＞WB＞WC，根据公式：W=4σ 可知，W越小说明σ越小、分散程度越小、极点浓度越高、峰形越瘦、柱效越高[5]，说明在色谱条件C下出峰形状最好，试验柱效最高。由此可见，在色谱条件C下丹参酮ⅡA的出峰效果最好。

2.4 对色谱条件C的方法考察

2.4.1 线性关系考察分别精密量取上述贮备液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于 10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件C，分别进样20 μl，测定峰面积。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，丹参酮ⅡA浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：Y=35.308X-45.208（r=0.998 9），结果表明丹参酮ⅡA含量在2～10 μg/ml范围内，与峰面积呈良好线性关系。

2.4.2 稳定性试验取同一贮备液，分别于 0、1、2、4、8、24 h在上述色谱条件C下进样，测得丹参酮ⅡA峰面积值的RSD为1.015%，表明丹参酮ⅡA在24 h内的面积分值基本稳定不变。

2.4.3 精密度试验取同一贮备液，在上述色谱条件C下连续进样5次，测定丹参酮ⅡA峰面积积分值，RSD为0.992%。

2.4.4 回收率试验精密称取5份丹参酮ⅡA对照品各0.2 mg，分别用甲醇溶解于25 ml量瓶中，按色谱条件C下进样，按“2.4.1”项下公式测定每份的含量，计算回收率，结果见表2。