酚氨咖敏颗粒含量测定方法的改进

2010-09-13焦付哲高建岭

中国医药导报 2010年32期

焦付哲，高建岭

（1.南阳市卫生职工学校，河南南阳 473000；2.南阳医学高等专科学校，河南南阳 473000）

氨酚咖敏颗粒是由对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林及马来酸氯苯那敏组成的复方制剂，临床用于感冒引起的鼻塞、发热、头痛、咽喉痛、神经痛及风湿痛等[1]。检验标准[2]采用HPLC法测定咖啡因、氨基比林、马来酸氯苯那敏的含量，未测定对乙酰氨基酚的含量；也有人报道采用HPLC法单纯测定氨酚咖敏颗粒中对乙酰氨基酚的含量，但其他组分不能检出，效率较低[3-4]。本文采用HPLC法同时测定氨酚咖敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林，操作简便，快速，准确，为该品种检验标准的修订提供一个依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪；AEL-200电子天平（上海分析天平厂）；超声波清洗器（上海金利超声公司）；对乙酰氨基酚对照品（批号：100018-8905）；咖啡因对照品（批号：171215-200507，中国药品生物制品检定所）；氨基比林对照品（批号：100503-200301，中国药品生物制品检定所）；氨酚咖敏颗粒（南阳市天舜药业有限公司，批号：20060103、20051218、20050412）；甲醇和乙腈为色谱纯，水为去离子水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取经105℃干燥至恒重的对乙酰氨基酚对照品约60 mg与咖啡因对照品约12 mg及经60℃干燥2 h的氨基比林对照品约40 mg，置100 ml棕色量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，得对照品A溶液。精取对照品A溶液5 ml，置50 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，得对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取氨酚咖敏颗粒10袋，精密称定内容物研细，精密称取适量（约相当于氨基比林10 mg），置25 ml棕色量瓶中，加乙醇超声处理15 min，放冷，乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，再精密量取续滤液5 ml，置50 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，即得。另取缺对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林、马来酸氯苯那敏的阴性样品同法制得阴性样品对照液。

2.3 色谱条件与系统适用性试验[5]

色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：1%醋酸溶液（用三乙胺调 pH 为 3.5）-甲醇-乙腈（65∶10∶25）；流速：1.0 ml/min；检测波长：273 nm；柱温：30℃；进样量：20 μl。各组分的理论板数应均不低于4 000，且各组分间的分离度应符合要求。见图1。

2.4 线性关系考察

分别精密量取对照 A 溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml置50 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取20μl，进样，记录色谱图。以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度（μg/ml）为横坐标（X），得对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的回归方程分别为：Y=2.76×104X+2.36×103（r=0.999 6）；Y=3.06×105X+1.26×103（r=0.999 8）；Y=1.77×105X+4.05×103（r=0.999 9），线性范围分别为 12.3～123.2、2.44～24.42、8.23～82.34 μg/ml。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液20 μl，重复进样5次，测得对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林色谱峰面积的RSD分别为0.32%、0.44%、0.35%。

2.6 重复性试验

精密称取同一批号的样品6份，分别测定含量，按外标法计算对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量，并将咖啡因计算结果与1.097 2相乘。结果对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量分别为 93.5%、96.7%、98.6%，RSD分别为0.98%、0.62%、0.56%。

2.7 稳定性试验

取含量测定项下的同一份供试品溶液，在室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h，同法测定，记录色谱峰面积，RSD 为0.82%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取氨酚咖敏颗粒样品（含对乙酰氨基酚92.6%、咖啡因96.8%、氨基比林99.2%）适量（约相当于氨基比林5 mg），共3份，分别精密加入8.0、10.0、12.0 ml的对照品A溶液，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样 20 μl，测定色谱峰面积，并按外标法计算含量，将咖啡因计算结果与1.097 2相乘。结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=3）Tab.1 Results of recovery test(n=3)

2.9 样品含量测定

取氨酚咖敏颗粒样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，各进样20 μl，测定色谱峰面积，并按外标法计算。样品含量测定结果见表2。

3 讨论

本法采用LC-MS分离技术[6]，选用的流动相保留时间短，分离效果好，在流动相中加入三乙胺，对分离和保留时间虽然没有明显的影响，但可改善主峰的拖尾现象，流动相的pH值改为3.5时，峰形较理想。同时选定273 nm波长处检测，能保证三种检测成分的检测灵敏度。按本品的处方配制的空白溶液在该色谱条件下无吸收，不影响待测成分的测定。