几种植物组织提取液抑菌效率初报

崔东亚，滕红梅，杨美玲，贾秀芹，蒋继志

（1.运城学院 生命科学系，山西 运城 044000；2.河北大学 生命科学学院，河北 保定 071000）

几种植物组织提取液抑菌效率初报

崔东亚1，滕红梅1，杨美玲1，贾秀芹1，蒋继志2

（1.运城学院 生命科学系，山西 运城 044000；2.河北大学 生命科学学院，河北 保定 071000）

利用17种植物材料的组织提取液对大肠杆菌和酵母菌进行抑菌实验，发现韭菜提取液的抑菌效果最为明显，抑菌率平均达到78.6%。进一步研究发现，韭菜提取液的抑菌成分为水溶性，化学性质稳定性差，提高温度和稀释倍数、延长保存时间均影响最终的抑菌效果。

植物；组织提取液；抑菌效率

植物源抑菌剂是指利用植物根、茎、叶、花、果实等部分或提取到的具有抑菌活性的成分加工成的制剂。植物源抑菌剂是天然抑菌剂，具有无公害、可降解、对人畜安全、不污染环境且不易引起抗药性等优点。随着人们环境保护意识的不断加强，对植物源抑菌剂种类、抑菌成分、抑菌效果及其稳定性的研究也越来越关注，逐渐成为近年来的一个研究热点。世界上植物资源极其丰富，产生的次生代谢物质种类也相当繁多，目前已知的超过40万种[1]，其中很大一部分具有抑（杀）菌效果。沈灵犀等从西藏蒿属的6种植物的精油中就提取到69种化合物[2]。白雪等比较了水杨梅和水团花不同提取物的抑菌活性，从水团花醋酸乙酯萃取部位分离出的化合物中，槲皮素——3——Oβ——D——葡萄糖苷显示出了较好的抑菌作用[3]。本文试图从现有的常用植物材料中筛选到几种具有抑菌成分的植物，期望能够从中分离出抑菌物质，为植物源抑菌剂的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

鲜活植物材料均采自菜市场和运城市郊区的田间，包含韭菜、蒜、葱、姜、百合、芦苇、黄花菜、小麦、鸢尾等9种；中草药购自运城中药店，包含泽泻、白芨、莪术、黄精、玉竹、天麻、郁金、麦冬等8种中药材料。

菌种：大肠杆菌和酵母菌，由运城学院实验中心提供。

1.2 实验药品

培养真菌、细菌的培养基分为液体和固体两种类型培养基。真菌为马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）；细菌为牛肉膏蛋白胨培养基[4]，采用的试剂均为分析纯试剂。

1.3 实验方法

1.3.1 植物提取液的制备

鲜活植物提取液的制备：称取植物供试新鲜部分50 g，先用清水冲洗，再用无菌水洗净，无菌研钵研磨后，加入无菌水100ml，室温下提取24小时，无菌纱布、滤纸过滤，将滤液作为母液，4℃保存备用。

炮制中草药提取液的制备：按实验设计称取各供试中草药50 g，蒸馏水浸泡5 h，煎煮1 h。3000 r/min离心20min，取上清液作为母液，4℃保存备用。

1.3.2 抑菌试验

将两种待试菌用相应固体培养基活化，分别挑取单菌落接种到液体培养基，于恒温摇床培养箱培养，大肠杆菌37℃培养14 h，酵母菌25℃培养24 h。

将已灭菌融化的固体培养基倒入无菌培养皿中，水平放置待凝固。用无菌移液枪吸取0.2mL菌悬液加入到凝固的培养基上，用无菌三角涂棒涂布均匀，将已涂布好的培养皿用直径为6毫米的打孔器打2到5个孔，用移液枪吸取200 ul各种植物组织提取液分别置于打好的孔里。大肠杆菌于37℃培养箱中培养12 h，酵母菌于26℃培养箱中培养24 h左右，取出观察抑菌圈的大小，量出抑菌圈直径，根据下列公式计算抑菌率。

菌生长抑制率：c%=（抑菌圈半径-处理孔半径）/抑菌圈半径。

2 结果与分析

2.1 不同植物组织提取液的抑菌效果

实验共选用17种植物材料。表1为不同供试材料组织提取液的抑菌效果，其中4种鲜活材料的组织提取液对大肠杆菌的生长有抑制作用；炮制中药中仅1种材料的提取液对大肠杆菌的生长有抑制作用，而17种材料中只有韭菜的提取液对酵母菌的生长有抑制作用。图1和图2为韭菜与泽泻对大肠杆菌的抑菌效果图。

表1 不同供试材料组织提取液的抑菌效果

图1 韭菜抑菌效果

图2 泽泻抑菌效果

2.2 具有抑菌活性的植物组织提取液的抑菌强弱

对具有抑菌活性的供试植物组织提取液做3次重复抑菌实验，测量抑菌圈的半径，取实验结果的平均值，计算抑菌率，结果见表2。表2表明，韭菜组织提取液对供试菌抑菌作用最强，对大肠杆菌的抑菌率平均达到81.3%，对酵母菌的抑菌率达到66.7%；其次是大蒜的组织提取液，对大肠杆菌的抑菌率可达78.6%；葱的组织提取液的抑菌作用最小。抑菌效果由大到小分别为韭菜、大蒜、生姜、泽泻和葱。

表2 对大肠杆菌和酵母菌生长的抑制率

2.3 韭菜不同组织部位提取液的抑菌效果

对韭菜茎部和叶子部分的提取液分别进行抑菌实验，结果见表3。由表3可知，韭菜不同组织部位提取液抑菌率没有明显差异，韭菜茎提取液的抑菌率略高于韭菜叶提取液的抑菌率。

表3 韭菜不同组织部位提取液的抑菌效果

2.4 韭菜叶提取液离心后的上清液和沉淀物的抑菌效果

取韭菜叶的组织提取液0.2 ml，进行离心处理，得到上清夜和沉淀物，与提取液一起做抑菌实验，分别点样于同一培养皿的三个孔中。实验结果见表4。从表4可知上清液抑菌圈和原液的抑菌圈大小相近，差异不明显，沉淀物的抑菌圈则比原液的要小。表明韭菜叶组织提取液的抑菌成分主要存在于上清液中，为水溶性物质。图3为韭菜上清液、沉淀物和处理原液的抑菌效果图。

2.5 提取液浓度、保存时间和提取温度对提取液抑菌效果的影响

将韭菜和蒜2种抑菌效果较好的组织提取液进行不同浓度梯度处理，原液作对照，观察抑菌效果。结果表明：随着浓度下降，各浓度梯度的植物提取液的抑菌活性随之下降，两种提取液稀释3倍后，抑菌效果为0；提取液于4℃保存24 h后，抑菌效果下降70%；提取温度加热到100℃时，提取液的抑菌效果为0。可见，韭菜和蒜组织提取液的抑菌物质稳定性较差。

总之，通过采用研磨法制备植物组织提取液进行抑菌实验，共发现5种植物的提取液对大肠杆菌有抑菌活性，1种植物的提取液对酵母菌有抑菌活性。韭菜提取液的抑菌效果最为明显，其抑菌物质大量分布于上清液中，并对温度和保存时间较为敏感，化学性质不稳定，其化学成分不清楚，有待于进一步研究探讨。

表4 韭菜叶组织提取液离心后上清液和沉淀物的抑菌率

图3 韭菜叶离心物的抑制效果

［1］Swain T.Secondary compounds of protective agents［J］.Annual review of plant physiology，1997，（28）：479-501.

［2］沈灵犀,扎西次仁,耿宇鹏等.西藏蒿属六种植物精油化学成分分析及抑菌效果［J］.复旦学报（自然科学版），2010，49（1）：73-80.

［3］白雪，林晨，李药兰等.水杨梅和水团花提取物体外抑菌活性的实验研究［J］.中草药，2008，39（10）：1532-1535.

［4］范秀容，李广武，沈萍.微生物学实验（第2版）［M］.北京:高等教育出版社，1993，262.

Abstract：Inhibition experiments were studied about 17 kinds of plants'tissue extracts to E.coli and Yeast.Inhibition effect of the leek was the best and inhibition effectwas 78.6%.In the further experiments，the antibacterial componentwas dissolved in the water，and its chemical propertieswas not stable.The long storage period，high temperature and dilution can affect the inhibition effect.

Keywords：plant；tissue extracts；inhibition effect

（责任编辑 王璟琳）

A PreliMinary Report of Inhibition Effect on Tissue Extracts of Several Plants

CUIDong-ya1，TENG Hong-mei1，YANGMei-ling1，JIA Xiu-qin1，JIANG Ji-zhi2

（1. Department of Life Science Yuncheng University，Yuncheng Shanxi 044000；2. College of Life Science Hebei University，Baoding Hebei 071000）

Q946.887

A

1673-2014（2010）05-0013-03

2010—09—08

崔东亚（1978— ），男，河北满城人，讲师，主要从事分子生物学教学与科研工作研究。