重庆垫江牡丹皮HPLC指纹图谱研究（Ⅲ）——刮丹皮指纹图谱

张艳，范俊安，夏永鹏，邱宗荫，李隆云，王宾豪（.重庆市中药研究院重庆市中药良种选育与评价工程技术研究中心，重庆市 400065；.重庆市食品药品监督管理局，重庆市 40004；.重庆医科大学药学院，重庆市 40006）

牡丹皮又称丹皮，为毛莨科植物牡丹Paeonia suffruticosaAndr.的根皮[1]。重庆垫江县种植牡丹皮历史悠久[2]，是全国三大牡丹皮主产地之一。在秋季采挖牡丹根刮去表皮抽去木心晒干为刮丹皮，只抽去木心不刮表皮直接晒干为原丹皮。目前，牡丹皮质量分析与控制的主流指标是丹皮酚含量测定[3]。笔者对重庆垫江牡丹皮进行了系统的质量分析[4]，本文着重报告对刮丹皮的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱研究结果。

1 材料

1.1 仪器与试药

2695-2996型HPLC仪，包括PDA检测器等（美国Waters公司）；ZX98-1型旋转薄膜蒸发器（上海有机化学研究所）；KQ-600型超声清洗器（巩义市英峪予华仪器厂）；植物粉碎机（北京鑫环亚科技有限公司）。丹皮酚、芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为110708-200205、110736-200220）；提取用甲醇（分析纯，重庆川东化工（集团）有限公司化学试剂厂）；HPLC流动相用甲醇（色谱纯，美国默克公司）。

1.2 药材

从重庆垫江县牡丹皮种植基地采集主要栽培品种红花牡丹植物标本及刮丹皮样品10批（材料见表1），采样地点根据种植基地的实际分布情况[2]设计，采样点的土壤、海拔及采收时间等根据垫江牡丹皮最适宜的种植条件设计并相对固定（有关垫江牡丹皮最适种植条件的研究另文[5]发表），以确保样品具有代表性。样品及原植物经笔者鉴定为毛茛科芍药属植物牡丹P.suffruticosaAndr.。

2 方法与结果

2.1 方法

表1 垫江刮丹皮标准指纹图谱研究试验材料Tab 1 Test materials used for the study of fingerprints of shaved P.suffruticosa from Dianjiang county

检测及分析方法与重庆垫江原丹皮HPLC指纹图谱研究方法相同[5，6]。

2.2 结果

共测定10批样品，将所得原始数据经专用软件进行匹配分析（以刮丹1.cdf为参考模板，10个样品指纹图谱匹配后自动生成1个对照指纹图谱），得到共有峰12个。各色谱峰保留时间的RSD均＜1%，2个标志性成分峰面积的RSD分别为芍药苷21.52%、丹皮酚15.67%；以丹皮酚峰的峰面积为1计算各共有峰的相对峰面积即为各样品色谱图的指纹信息，样品间各共有峰相对保留时间的RSD均＜0.5%，芍药苷相对峰面积的RSD＝22.26%。垫江刮丹皮10批样品HPLC指纹图谱相似度分析结果见表2；共有峰数据见表3；匹配图谱见图1。

表2 垫江刮丹皮10批样品HPLC指纹图谱相似度分析结果Tab 2 Similarities of the HPLC fingerprints of 10 Patches of shaved P.suffruticosa from Dianjiang county

表3 垫江刮丹皮10批样品指纹图谱共有峰数据Tab 3 Chromatographic data of common peaks in HPLC fingerprints of 10 Patches of shaved P.suffruticosa from Dianjiang county

除少数样品之间的两两相似度小于但十分接近0.9外，其余各样品之间的两两相似度均＞0.9。10批刮丹皮样品的色谱峰出峰时间、顺序、整体峰形基本一致，各样品化学成分基本相同，质量相似度高，相互差异较小，指纹图谱共性特征明显；同时也表明10批刮丹皮样品具有很强的代表性，能够代表垫江刮丹皮的质量特征。生成的对照图谱（图中标识为R）与所有样品的相似度均＞0.9，而且除2个样品外其余均＞0.95，表明生成的对照图谱能够代表垫江刮丹皮10批样品的共同特征，可以作为垫江刮丹皮标准指纹图谱。

图1 垫江刮丹皮10批样品HPLC指纹图谱匹配图谱A.匹配前图谱；B.匹配后图谱Fig 1 Matched HPLC fingerprints of 10 batches of shavedP.suffruticosa cultivated in Dianjiang county A.Pre-matched fingerprints；B.matched fingerprints

各样品指纹图谱共有峰占总峰面积的比例为83.53%～96.28%，平均为90.61%，RSD＝5.32%，非共有峰面积占8.39%＜10%，表明匹配过程中特征峰提取较为充分，作为非共有峰省略的信息很少；相似度和共有峰面积比例均符合国家食品药品监督管理局和国家药典委员会关于中药注射剂指纹图谱研究的相关技术要求[7，8]，故匹配所得12个共有峰能够充分表达垫江刮丹皮的质量特征。其中，由于峰k的峰面积小，相对峰面积不到0.05，而且与10号峰时间间距很短，实际检测应用中峰k信息可并入10号峰。因此，将峰k之外的其它11个共有峰标定为垫江刮丹皮的标准指纹图谱特征峰，并以出峰时间顺序依次编号，其中4号峰为芍药苷，11号峰为丹皮酚。垫江刮丹皮标准HPLC指纹图谱色谱数据见表4；标准指纹图谱见图2。

3 讨论

以共有峰信息作为指纹图谱能够充分表达垫江刮丹皮的质量特征；10批样品共有峰面积的RSD和相对峰面积的RSD均较大，表明各样品的化学成分存在量上的明显差异，以单一成分的含量测定不能科学判断药材质量；但单峰面积超过20%的色谱峰只有丹皮酚和芍药苷峰，其它峰的单峰面积均未达到10%，而芍药苷峰相对峰面积的RSD＝22%，明显小于其它峰，表明芍药苷含量相对稳定。因此，建议在丹皮酚之外增加芍药苷作为牡丹皮质量控制的一个重要的定量指标。

从安徽、河南、湖北、山东等产地收集刮丹皮样品，另从重庆中药材市场收集产地标识为“重庆”的刮丹皮（样品A），在相同色谱条件下检测指纹图谱，并与本文建立的垫江刮丹皮标准指纹图谱进行对比分析。结果，各产地样品与垫江刮丹皮标准指纹图谱的相似度均＞0.9，但与标准指纹图谱相匹配后，缺失了3号、5号和6号3个特征峰，总峰面积和共有峰面积均显著减少；芍药苷峰的相对峰面积均明显低于标准指纹图谱，表明垫江刮丹皮与安徽、河南、湖北、山东等产地的刮丹皮相似度高，但仍存在区别。样品A具有垫江刮丹皮标准指纹图谱的所有特征峰，且与标准指纹图谱的相似度达0.958；而与安徽、河南、湖北、山东各产地样品间的相似度均＜0.9（各产地样品间两两相似度均＞0.9），其中最小的与湖北刮丹皮的相似度仅为0.754；总峰面积、芍药苷峰的相对峰面积与标准指纹图谱十分接近，表明样品A与各产地样品区别大而与重庆垫江刮丹皮标准指纹图谱相似度高；结合样品A外观性状与重庆垫江刮丹皮基本相同的情况，可以认定样品A就是重庆垫江产刮丹皮。这些试验进一步证明了指纹图谱可以作为牡丹皮质量控制和产地鉴别的重要参考依据。

表4 垫江刮丹皮标准HPLC指纹图谱色谱数据Tab 4 Chromatographic data of standard HPLC fingerprints of shaved P.suffruticosa cultivated in Dianjiang county

图2 垫江刮丹皮HPLC标准指纹图谱4.芍药苷；11.丹皮酚（参照峰）Fig 2Standard HPLC fingerprints of shaved P.suffruticosa cultivated in Dianjiang county4.paeoniflorin；11.paeono（lreference peak）

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：119.

[2]范俊安，张 艳，夏永鹏，等.重庆垫江牡丹皮历史考证与生产现状分析[J].中药材，2006，29（4）：401.

[3]范俊安，夏永鹏，申明亮，等.近15年牡丹皮研究文献分析[J].中国中医药信息杂志，2006，13（6）：103.

[4]范俊安.重庆垫江牡丹皮质量分析与控制研究[C].重庆：重庆医科大学，2006：58～80.

[5]范俊安，夏永鹏，邱宗荫，等.重庆垫江牡丹皮HPLC指纹图谱研究（Ⅰ）——不同因素的影响及牡丹皮最适宜种植条件选择[J].中国药房，2009，20（21）：1 667.

[6]张 艳，范俊安，夏永鹏，等.重庆垫江牡丹皮HPLC指纹图谱研究（Ⅱ）——原丹皮指纹图谱[J].中国药房，2009，20（33）：2 602.

[7]国家药品监督管理局.关于印发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》的通知[Z].国药管注[2000]348号，2000-08-15.

[8]国家药典委员会.关于印发《中药注射剂指纹图谱实验研究技术指南》的通知[Z].2002-04-27.