替硝唑螺内酯乳膏的制备及质量控制*

彭贤东，唐志立，龙 凤，曾友志，李 勇

（四川省南充市中心医院药剂科，四川 南充 637000）

替硝唑螺内酯乳膏的制备及质量控制*

彭贤东，唐志立，龙 凤，曾友志，李 勇

（四川省南充市中心医院药剂科，四川 南充 637000）

目的 制备替硝唑螺内酯乳膏并建立其质量控制方法。方法 以平平加O、十六醇、十八醇为混合乳化剂，替硝唑、螺内酯为主药制备乳膏；采用高效液相色谱法分别测定其主药替硝唑、螺内酯的含量，并考察制剂稳定性及刺激性。结果 制备的乳膏质地均匀、细腻、黏稠度适宜；替硝唑、螺内酯检测质量浓度的线性范围分别为 30.69 ～ 245.52 μg/mL（r=0.999 4，n=6)和 2.55 ～20.40 μg/mL（r=0.999 6，n=6）；平均回收率分别为99.96%（RSD=1.19%，n=9）和99.47%（RSD=1.27%，n=9）；离心试验和耐热、耐寒试验及留样观察中各项指标无明显变化，对皮肤刺激性小。结论 替硝唑螺内酯乳膏制备工艺简便可行，质量稳定可控。

替硝唑螺内酯乳膏；制备；质量控制；高效液相色谱法；稳定性

Abstract：Objective To prepare Tinidazole and Spironolactone Cream and to establish its quality control method.Methods The cream was prepared using peregol O，cetylalcohol and stearylalcohol as the mixed emulsifying agents and tinidazole and spironolactone as the main ingredients.The contents of the principal agents tinidazole and spironolactone were determined by HPLC and the stability and the stimulation of this preparation were also determined.Results The cream was well distributed and delicate with good suitable consistency and viscosity.The linear ranges of tinidazole and spironolactone were 30.69-245.52 μg/mL(r=0.999 4，n=6)and 2.55-20.40 μg/mL(r=0.999 6，n=6)respectively，with the average recovery rate of 99.96%(RSD=1.19% ，n=9)and 99.47%(RSD=1.27% ，n=9)，respectively.All the indexes showed no obvious change in the following tests including centrifugalization test，thermoresistant and cold-resistant tests as well as sample observation test.The preparation had slight stimulation to skin.Conclusion This preparative technology of Tinidazoleand Spironolactone Cream is simple and feasible，and its quality is stable and controllable.

Key words：Tinidazole and Spironolactone Cream；preparation；quality control；HPLC；stability

痤疮为临床常见皮肤病，发病率高，青春期男女约90%以上有程度不等的痤疮发生。为提高其治愈率，国内很多学者将替硝唑制成外用乳膏剂、涂膜剂、凝胶剂，研究其制备方法及临床应用[1-5]。笔者根据痤疮的发病机理，选择抑制皮脂腺分泌的药物螺内酯和杀灭痤疮丙酸杆菌的替硝唑，将二者联合制成乳膏外用，并对其制备工艺和质量控制标准进行了研究，现报道如下。

1 实验材料

仪器：高效液相色谱仪（法国Gilson公司），包括7125型六通阀定量进样器，303型高压泵，HM型紫外检测器，Gilson 714型色谱工作站；BP 211D型分析天平（德国赛多利斯股份公司）；柱温箱（成都恒业电子科研部研制）。

试药：替硝唑原料药（湖北省广济药业有限公司，批号为20080912）；螺内酯原料药（天津福兴达精细有机化工有限公司，批号为080814）；替硝唑对照品（含量测定用，含量为99.8%，批号为100336-200703）、螺内酯对照品（含量测定用，批号为100193-199601）均由中国药品生物制品检定所提供；氮酮（新乡高金药业有限公司，批号为20080302）；十六醇（批号为20080201）、十八醇（批号为20080502）、单硬脂酸甘油酯（批号为20080401）、甘油（批号为20080330）均由湖南尔康制药有限公司提供；白凡士林（南昌白云药业有限公司，批号为20080204）；液状石蜡（吉林市吉化江城油脂化工有限责任公司，批号为20080306）；平平加O（成都市科龙化工试剂厂，批号为20080328）；羟苯乙酯（台山市新宁制药有限公司，批号为20080701）；替硝唑螺内酯乳膏（本院自制，批号分别为090223，090224，090226）；原辅料均为药用级，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

动物：日本大耳兔，由川北医学院实验动物中心提供，体重（2.5 ± 0.5）kg，雌雄兼用，合格证号为 SCXK（川）2008-18。

2 方法与结果

2.1 处方与制备

处方：替硝唑20 g，螺内酯3 g，氮酮10 g，十六醇40 g，十八醇40 g，白凡士林100 g，液状石蜡40 g，单硬脂酸甘油酯20 g，平平加O 20 g，甘油50 g，羟苯乙酯1 g，纯化水加至1 000 g。

制备[6]：取平平加O、羟苯乙酯加入纯化水溶解；取替硝唑加入纯化水溶解；取螺内酯加入甘油中，水浴加热溶解。将上述3种溶液混合，保温约80℃，制得水相。取十六醇、十八醇、白凡士林、液状石蜡、单硬脂酸甘油酯加热熔融，保温约80℃，制得油相。不断搅拌下，将油相以细流形式缓缓加入水相中，搅拌至形成初乳时，取氮酮，加入上述乳膏中混合均匀，分装，即得。

2.2 一般质量控制

2.2.1 性状

本品为类白色或淡黄色乳膏。

2.2.2 pH

取本品5 g，加纯化水25 mL，溶解后测定，pH为5.5～6.5。

2.2.3 鉴别

替硝唑：取本品适量（约相当于替硝唑10 mg），加氢氧化钠试液2 mL，温热，溶液呈黄色，滴加稀盐酸使成酸性后，即变成白色，再滴加过量氢氧化钠试液，则变成淡黄色。

螺内酯：取本品3 g，加三氯甲烷5 mL，振摇，提取三氯甲烷层，置水浴上挥去三氯甲烷，放冷，残留物加硫酸2 mL，溶液显橙黄色，有强烈黄绿色荧光，缓缓加热，溶液即变为深红色，并有特殊臭味的气体产生，遇湿润的醋酸铅试纸显暗黑色。

色谱鉴别：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间分别与对照品溶液主峰的保留时间一致。

2.2.4 检查

细腻度：将样品置显微镜下观察并涂布于皮肤，结果该制剂分散均匀、细腻软滑、稠度适宜、涂展性好。

微生物限度：随机取3批样品，按2005年版《中国药典（二部）》[7]方法进行检验，结果细菌、霉菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均符合规定。

其他：均符合乳膏剂项下各有关规定[7]。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil ODS2 C18柱（200 mm ×4.6 mm，5!m）；流动相：替硝唑的含量测定中为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至3.5）-甲醇（80∶20），螺内酯的含量测定中为0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液（用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.5）-甲醇（40 ∶60)；流速：1.0 mL/min；检测波长：替硝唑为 310 nm；螺内酯为238 nm；柱温：40℃；进样量：20!L。在此色谱条件下，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，理论塔板数按替硝唑峰或螺内酯峰计算均应不低于2 000，替硝唑峰或螺内酯峰与相邻杂质峰的分离度均应大于1.5。

2.3.2 溶液制备

精密称取替硝唑对照品30.69 mg，置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为替硝唑对照品贮备液（613.80!g/mL）；精密吸取替硝唑对照品贮备液适量，加流动相稀释成每1 mL约含120!g替硝唑的溶液，即为替硝唑对照品溶液。精密称取105℃干燥至恒重的螺内酯对照品10.20 mg，置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为螺内酯对照品贮备液(204.00!g/mL)；精密吸取螺内酯对照品贮备液适量，加流动相稀释成每1 mL约含12!g螺内酯的溶液，即为螺内酯对照品溶液。精密称取样品适量，置100 mL量瓶中，加流动相适量，水浴中加热并时时振摇使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀。置冰浴中冷却1 h，取出后迅速滤过，放至室温，精密量取续滤液5 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密称取按处方比例制备的不含替硝唑的空白乳膏3.0 g，按供试品溶液制备方法制备溶液，即得替硝唑阴性对照品溶液。精密称取按处方比例制备的不含螺内酯的空白乳膏2.0 g，按供试品溶液制备方法制备溶液，即得螺内酯阴性对照品溶液。

2.3.3 方法学考察

干扰试验：精密量取替硝唑对照品溶液、供试品溶液、替硝唑阴性对照品溶液各20!L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。精密量取螺内酯对照品溶液、供试品溶液、螺内酯阴性对照品溶液各20!L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图（图2）。从图1中可见，供试品溶液在与替硝唑对照品溶液相应位置上有相同保留时间（6.87 min）的色谱峰，且与杂质峰分离良好，替硝唑阴性对照品溶液对测定无干扰。从图2中可见，供试品溶液在与螺内酯对照品溶液相应位置上有相同保留时间（10.64 min）的色谱峰，且与杂质峰分离良好，螺内酯阴性对照品溶液对测定无干扰。

图1 替硝唑高效液相色谱图

图2 螺内酯高效液相色谱图

线性关系考察：稀释替硝唑对照品贮备液至质量浓度分别为30.69，61.38，122.76，153.45，184.14，245.52!g/mL 的系列对照品溶液，精密吸取上述溶液各20!L，注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积。以峰面积 A对质量浓度 C（!g/mL）进行线性回归，得回归方程 A=1 123.2 C-2 559.6，r=0.999 4（n=6）。结果表明替硝唑质量浓度在30.69～245.52!g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。稀释螺内酯对照品贮备液至质量浓度分别为2.55，5.10，10.20，12.24，15.30，20.40!g/mL 的系列对照品溶液，精密吸取上述溶液各20!L，注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积。以峰面积 A对质量浓度 C（!g/mL）进行线性回归，得回归方程 A=14 035.8 C+2 383.3，r=0.999 6(n=6）。结果表明螺内酯质量浓度在2.55～20.40!g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密量取质量浓度分别为61.38，122.76，184.14!g/mL的系列替硝唑对照品溶液及质量浓度分别为10.20，12.24，15.30!g/mL的系列螺内酯对照品溶液，依法进样测定，分别于同日内测定5次，计算日内 RSD；每日测定1次，连续测定5 d，计算日间 RSD。结果3种质量浓度的替硝唑日内 RSD分别为1.01%，0.92%，1.17%，日间 RSD分别为1.12%，1.09%，1.35%；3种质量浓度的螺内酯日内 RSD分别为1.40%，1.16%，1.22%，日间 RSD分别为1.66%，1.35%，1.47%，表明方法精密度良好。

重现性试验：取同一批样品6份，依法测定。结果替硝唑、螺内酯含量的 RSD分别为0.97%和1.03%，表明方法重现性良好。

稳定性试验：精密吸取供试品溶液 20!L，分别在 0，2，4，6，8 h时进样，测定替硝唑和螺内酯的峰面积。结果替硝唑、螺内酯峰面积的 RSD分别为1.12%和1.27%，表明样品在8 h内稳定。

加样回收试验：分别精密称取替硝唑、螺内酯对照品适量，加入处方比例量的空白乳膏基质，配制标示含量为80%，100%，120%的样品，按供试品溶液制备方法配制高、中、低3种质量浓度的样品溶液，精密吸取上述溶液各20!L，注入液相色谱仪。分别按各自的回归方程计算出样品中替硝唑、螺内酯的回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=9）

2.3.4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别精密量取相应供试品溶液和对照品溶液20!L，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果批号为090223，090224，090226的3批样品中，替硝唑含量分别为标示量的102.9%，99.1%，97.8%，螺内酯含量分别为标示量的97.9%，100.5%，99.6%（n=3）。

2.4 稳定性考察

离心试验：取本品适量，置带刻度的离心管中，以2 500 r/min转速离心30 min。结果乳膏无分层现象。

耐热、耐寒试验：取本品适量，装于密闭小瓶中，置55℃恒温水浴箱中6 h，再置冰箱（-15℃）中放置24 h。结果均无分层现象。

留样观察：将3批样品各30 g装入聚丙烯乳膏盒中，密闭，室温（20±5）℃放置6个月。结果各项指标未见明显变化，符合乳膏剂的相关要求[7]。

2.5 刺激性试验

取日本大耳兔6只，剪去背部兔毛，面积约3 cm×3 cm。24 h后待因剪毛刺激引起的红肿消退，在去毛部位涂布样品，每日2次，每次2 g，连续7 d。7 d后观察均未发现皮肤红肿，表明该乳膏对皮肤几乎无刺激性。

3 讨论

本品为O/W型乳膏，是平平加O、十六醇、十八醇组成的复合乳化剂，稳定性较好，单硬脂酸甘油酯增加了基质的稳定性，且产品细腻润滑，氮酮作为透皮促进剂可使有效活性成分更好地渗透，增强疗效。替硝唑对痤疮丙酸杆菌有较强的抑制作用，可在较短时间内减少炎性皮损的数目，对丘疹、脓疱尤其有效；而螺内酯作为一种抗雄激素药物，可以减少皮脂分泌及局部皮脂的聚集，使非炎症损害如白头粉刺、黑头粉刺内的脂栓减小，皮损消退。二者联用，可产生协同作用。采用高效液相色谱法测定替硝唑、螺内酯的含量，空白基质对替硝唑和螺内酯的测定没有干扰，方法专属性强，操作简便，结果准确，具有较好的回收率和精密度，可完全满足本制剂质量控制的要求。该乳膏制备工艺简便可行，质量稳定可控，经本院临床应用观察，其疗效显著，值得临床推广。

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Preparation and Quality Control of Tinidazole and Spironolactone Cream

Peng Xiandong，Tang Zhili，Long Feng，Zeng Youzhi，Li Yong
(Department of Pharmacy，Nanchong Municipal Central Hospital，Nanchong，Sichuan，China 637000)

R944.2+1；R927

A

1006－4931(2010）05－0034－03

彭贤东，男，主管药师，研究方向为药物分析及制剂，（电话）0817-8184015(电子信箱)pxd0905@163.com；唐志立，男，主任药师，本文通讯作者，（电话）0817-2243048(电子信箱)1003955916@qq.com。

2009－10－20）

*南充市科技局应用技术研究与开发资金，项目编号：N2008-SF015。