头孢氨苄胶囊的人体生物等效性研究

魏 来，郑 永，赵春景

（重庆医科大学附属第二医院药剂科，重庆 400010）

头孢氨苄为半合成的第1代头孢菌素，抗菌作用较弱，与头孢拉定相似，适用于治疗敏感菌所致的急性扁桃体炎、咽峡炎、中耳炎、鼻窦炎、支气管炎、肺炎等呼吸道感染，以及尿路感染、皮肤软组织感染等，不宜用于重症感染。其对革兰阳性菌（包括对青霉素敏感或耐药的金黄色葡萄球菌）的抗菌作用较第2代、第3代头孢菌素强，且有口服吸收好、毒性小、抗菌谱广等优点，是临床抗感染治疗的主要药物之一。目前市售的剂型主要是片剂和胶囊剂，胶囊剂服用方便，生产工艺重现性好，质量容易控制。本试验对西南药业股份有限公司研制的头孢氨苄胶囊（受试制剂）和石药集团欧意药业有限公司生产的头孢氨苄胶囊（参比制剂）进行了生物等效性研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪、Waters 1525泵、Waters 2487紫外可变波长检测器；Waters Breeze工作站；WHX微型涡旋混合器（上海跃进机械厂）；KL512J型氮吹仪（北京康林科技有限责任公司）。头孢氨苄标准品（中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司，批号为20041006）；磷酸二氢钾（分析纯，重庆化学试剂厂，批号为20040205）；双蒸水（经0.45μm滤膜过滤）；试验制剂头孢氨苄胶囊（西南药业股份有限公司，规格为250 mg/粒，批号为20050102）；参比制剂头孢氨苄胶囊（石药集团欧意药业有限公司，规格为250 mg/粒，批号为051001）。

1.2 试验方法

选择健康男性志愿者18名，平均年龄（22.1±3.0）岁，身高（168.9±4.7）cm，体重（59.2 ±5.4）kg；身体健康，无心、肝、肾、消化道、神经系统疾病及代谢异常等病史，健康体格检查（心电图、血压、心率、肝功能、肾功能、脉搏、体温、血常规、尿常规等）无异常。所有志愿者充分了解试验内容后自愿受试，并签署知情同意书。

1.3 给药方法及血样采集

采用自身交叉单剂量口服给药。将18名受试者随机分为两组，每组9名，禁食12 h后，于次日晨空腹口服500 mg头孢氨苄胶囊受试制剂或参比制剂，均用200 mL温开水送服。给药后2 h限制饮水，给药后4 h统一进食低脂标准餐。于给药前及给药后15，30，45，60，90，120，150，180，210，240，300 min 时，抽取前臂静脉血 3 mL，5000 r/min离心5 min后分离血浆，将血浆样本于低温（-20℃）保存，待测。间隔1周后交换口服另一种制剂，再按上述方法采集、分离、保存血浆样本。

1.4 色谱条件

色谱柱为 Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5.4 μm），固定进样环20 μL；参考文献[1-4]及预试验选择，流动相为甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾（120∶320），流速为 1.0 mL/min；紫外检测波长为254 nm；柱温为25℃。

1.5 样品处理

精密取受试者血浆200 μL，加入10%三氯醋酸80 μL，涡旋振荡 2 min，5000 r/min 离心 5 min，取上清液 20 μL 进样。

1.6 统计学方法

采用3P97进算计软件（中国数学药理学会），根据血药浓度-时间数据模拟确定模型，选择最佳药代动力学模型，计算各个体药代动力学参数，峰浓度（Cmax）和达峰时间（Tmax）以实测值计算，药-时曲线下面积（AUC）按梯形面积法计算（时间范围为 0～300 min）。采用受试制剂和参比制剂的AUC0-300min计算相对生物利用度（F）。各项药代动力学参数和相对生物利用度参数采用方差分析和双单侧检验，用（1-2α）置信区间分析，实测的 Tmax用非参数统计Wilcoxo法进行检验，判断生物等效性。

图1 高效液相色谱图

2 结果

2.1 含量测定方法学考察结果

色谱行为：在拟订的色谱条件下测得的色谱见图1。可见，头孢氨苄与血中内源性杂峰分离良好，峰形尖锐，杂质和代谢物不干扰药物的测定。

标准曲线制备：在空白血浆中加入质量浓度为894.0 μg/mL的头孢氨苄标准品溶液，使血药浓度分别为44.70，22.35，11.18，5.59，2.79，1.40，0.70 μg/mL，按 1.5 项下方法处理并测定，以头孢氨苄峰面积（A）对血药浓度 C进行回归分析，得标准曲线方程 C=-0.00276+0.0000939188 A，线性范围为 44.700 ～0.699 μg/mL，r=0.9999（ n=7），最低检测质量浓度为 0.117 μg/mL。

精密度试验：在空白血浆中加入质量浓度为894.0 μg/mL的头孢氨苄标准品溶液，配制高、中、低质量浓度的标准血样，按1.5项下方法处理，于日内各测定5次并连续测定5 d。结果见表1。

回收率试验：在空白血浆中加入质量浓度为894.0 μg/mL的头孢氨苄标准品溶液，配制高、中、低质量浓度的标准血样，按1.5项下方法处理并测定，由标准曲线计算出血样中头孢氨苄的质量浓度，计算方法回收率。结果见表1。

表1 精密度与回收率试验结果（n=5）

2.2 药-时数据及药代动力学参数

试验结果表明，口服头孢氨苄胶囊后的药-时数据符合一室药代动力学模型，平均药-时曲线见图2，有关药代动力学参数及生物利用度见表2。

图2 平均药-时曲线图

表2 两种头孢氨苄胶囊在人体内的药代动力学参数

2.3 相对生物利用度及生物等效性分评价

方差分析结果显示，头孢氨苄胶囊受试制剂与标准参比制剂的 AUC0-300无显著性差异（P＞0.05）；单双侧 t检验，t1=6.932≥t1-a，t2=6.812≥t1-a，显示两者等效；90%置信区间为94.9% ～105.4%，显示两药等效。方差分析结果显示，两药 Cmax无显著性差异（P ＞ 0.05）；单双侧 t检验，t1=7.604≥t1-a，t2=8.155≥ t1-a=1.746，显示两者等效；90%置信区间为96.0% ～111.5%，显示两药等效。对实测的 Tmax用非参数统计Wilcoxo法进行检验，两药间无显著性差异。

3 讨论

采用高效液相色谱法测定人体血浆中的头孢氨苄质量浓度，方法简便可靠，能够满足头孢氨苄胶囊人体药代动力学及生物利用度研究的需要。本试验获得了头孢氨苄胶囊受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数，生物等效性评价显示两种制剂生物利用度相当，结果表明两厂家生产的头孢氨苄胶囊在体内的吸收、分布、消除过程一致，统计学分析证明两种头孢氨苄胶囊生物等效。

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