高效液相色谱法测定复方葛酮颗粒中葛根素含量*

杨冬梅，杨世友

（1.安徽医学高等专科学校附属医院，安徽 合肥 230022； 2.安徽省药物研究所，安徽 合肥 230022）

复方葛酮颗粒由黄芪、丹参、葛根3味中药组成，具有逆转心肌肥厚的功效。由于葛根主要有效成分葛根总黄酮中的葛根素比较稳定，2005年版《中国药典（一部）》中亦规定其有效成分以葛根素为检测指标[1]，相关文献报道较多[2-5]。因此，笔者选择高效液相色谱法测定葛根素的含量来控制复方葛酮颗粒的质量，报道如下。

1 仪器与试药

LC-10AT型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10A紫外检测器（日本岛津），Waters C18色谱柱，N2000色谱工作站（浙江大学）。葛根素对照品（含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号为752-200108）；复方葛酮颗粒（安徽省药物研究所，批号分别为060513，060515，060518）；甲醇、冰醋酸为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇 -水 -醋酸（25 ∶75 ∶1）；流速：1.0 mL/min；进样量：10μL；检测波长：250 nm。

2.2 溶液制备

取样品细粉3 g，精密称定，置100 mL烧瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，称定质量，回流30 min，放冷，再称定质量，用30%乙醇补足减失的质量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取葛根素对照品2.5 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 mL约含0.025 mg葛根素）。取不含葛根的阴性制剂，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：取2.2项下3种溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图。结果理论塔板数按葛根素峰计为9224，葛根素峰与相邻峰分离度为2.2，阴性对照品溶液不干扰测定（图1）。

线性关系考察：精密称取葛根素对照品4.8 mg，加30%乙醇配制成0.24 g/L的对照品母液，再精密量取1 mL稀释10倍，制成0.024 g/L的对照品溶液。精密量取0.024 g/L的对照品溶液2，4，8μL 和 0.24 g/L 的对照品母液 2，4，8μL，按上述色谱条件注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积 A为纵坐标、进样量（C）为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程A=2 ×106C+3722.6（r=0.9999，n=6）。结果表明，葛根素进样量在0.048～1.92μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取供试品溶液10μL，按上述色谱条件注入液相色谱仪，连续进样6次。结果峰面积积分值的 RSD=0.73%（n=6），表明方法精密度好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液 10μL，分别于 0，2，4，8，12，24 h时依法测定。结果峰面积积分值的 RSD=0.98%，表明供试品溶液在24 h内较稳定。

重现性试验：精密称取同一批（批号为060513）样品共6份，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果的 RSD=1.13%（n=6），表明方法重现性较好。

加样回收试验：精密称取已知含量（0.451 mg/g）的同一批（批号为060513）样品1.5 g共6份，分别精密加入0.68 g/L的对照品溶液0.8，1.0，1.2 mL各两份（相当于分别加入葛根素对照品0.544，0.680，0.816 mg），照供试品溶液制备方法制备溶液，按色谱条件注入液相色谱仪测定，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

2.4 样品含量测定

取 3 批样品（批号分别为 060513，060515，060518），按供试品溶液制备方法制备溶液，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μL注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算含量。结果3批样品的含量分别为 0.451，0.462，0.507 mg/g。

表1 葛根素加样回收试验结果（n=6）

3 讨论

曾采用甲醇-水（25∶75）及3种配比的甲醇-水-醋酸（25∶75 ∶0.1），（25 ∶75 ∶0.5），（25 ∶75 ∶1）等 4 种流动相综合评定保留时间、塔板数、最小分离度等指标，最终确定甲醇-水-醋酸（25∶75∶1）为流动相，配比简单，易于操作，分离效果良好。还考察了不同提取方法和时间对葛根素含量的影响，结果表明以30%乙醇为提取溶剂、回流处理30 min即可提取完全。

采用高效液相色谱法测定复方葛酮颗粒中葛根素含量，方法灵敏可靠，重现性好，回收率高，可用于产品的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：233.

[2]王志朝，覃 贝，刘祖雄.葛根芩连胶囊剂的制备与质量控制[J].中国药业，2008，17（19）：45-46.

[3]邢俊家，周 晖，冯婉玉.高效液相色谱法测定咽喉炎糖浆剂中葛根素的含量[J]. 中国医院药学杂志，2006，26（7）：903-904.

[4]颜素琴，宋晓琳，李祥勇.高效液相色谱法测定益气养阴降糖丸中葛根素的含量[J]. 时珍国医国药，2007，18（5）：1130.

[5]梁晓燕，邓杏好.渴消灵口服液质量标准研究[J].中国药业，2008，17（13）：15-16.