补骨脂正己烷提取物GC指纹图谱的研究

刘军凯，林贝

(北京化工大学北方学院，河北 廊坊 065201)

补骨脂正己烷提取物GC指纹图谱的研究

刘军凯，林贝

(北京化工大学北方学院，河北 廊坊 065201)

利用GC方法测定来自同一生产企业的10批不同批次补骨脂的提取物，获得了较为理想的包含特征信息的补骨脂GC指纹图谱，通过相似度分析，计算出各批样品相似度均在0.98以上。本论文确定的指纹图谱建立方法简单、快速，有较好的重现性，样品稳定性好，可为补骨脂药材的质量控制提供有效手段。

补骨脂；GC；指纹图谱

补骨脂为豆科植物补骨脂(Psoralea corylifoliaL.)的干燥成熟果实，性温，味辛，具温肾助阳、纳气、止泻之功效[1]。补骨脂化学成分复杂，其中补骨脂素和异补骨脂素已作为指标成分用于补骨脂及其相关制品的质量控制，但是，以一个或几个成分为指标的质量控制模式很难全面评价中药及其制剂的质量、疗效和稳定性。中药指纹图谱技术的诞生，为中药质量控制开辟了新途径。目前，对于补骨脂指纹图谱的研究大多为HPLC指纹图谱[2～3]。本文初步建立了补骨脂的气相色谱指纹图谱，为补骨脂药材质量的评价提供了快速、简便、可靠的分析方法。

1 实验仪器和材料

1.1 仪器

GC9790 IIA-2 气相色谱仪、氢离子化检测器,R201D型旋转蒸发仪四两装高速中药粉碎机，80-2型离心沉淀机。

1.2 实验试剂与药材

实验所使用的正己烷、二硫化碳皆为分析纯，来源于北京化工厂。安国市长安中药材有限公司所购10批补骨脂生品和盐品实验样品见表1。

表1 实验所购10批样品药材

2 实验方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

分别精密称取过0.84mm筛的补骨脂0.5g，加入10mL正己烷(60～90℃)，超声处理30min，3000r·min-1的转速离心5min，旋转蒸发挥干溶剂后用2mL二硫化碳溶解，作为样品溶液备用。

2.2 色谱条件

色谱柱采用OV-101色谱柱；柱压为44kPa，恒压方式；进样口温度为250℃，检测器温度为250℃；柱温采用程序升温，起始温度30℃，恒温5min，1℃·min-1升温至40℃，然后以7℃·min-1升温至250℃，保温15min；流速为5.0mL·min-1，不分流进样，进样体积为1µL。

2.3 方法学验证

2.3.1 仪器精密度及重现性实验

取同一批补骨脂供试品溶液连续进样5次，考察色谱峰相对保留时间，以保留时间来计算相对标准偏差RSD，本实验选择5个色谱峰来计算，RSD分别为0.79%、0.80%、0.61%、0.39%、0.07%。保留时间RSD值均小于1%，说明仪器稳定可靠，方法重现性良好。

2.3.2 稳定性实验

用同一批补骨脂供试品溶液，分别在0h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h时，在相同的色谱条件下进行分析。选取5个色谱峰，从保留时间来计算各色谱峰的RSD值， 分别为0.86%、0.85%、0.56%、0.51%、0.07%。可见，在24h内所得样品6个色谱峰保留时间RSD值均小于1%。说明供试品溶液在24h内稳定可靠。

2.3.3 重复性实验

取同一批补骨脂药材，按供试品制备方法，制备样品5份，每份样品分别进样，进行色谱分析。任意选取5个色谱峰，从保留时间来计算色谱峰的RSD值，分别为1.12%、1.09%、0.65%、0.62%、0.08%。数据显示，5个样品色谱峰保留时间 RSD值小于2%，说明供试品溶液制备方法稳定、可靠。

2.4 补骨脂气相指纹图谱的建立

在上述条件下测10批同一生产企业生产的不同批次补骨脂的供试品溶液，在相同的实验条件下进行分析，所得补骨脂生品和盐品典型的GC指纹图谱见图1、2。

图1 补骨脂生品1号正己烷提取部位GC色谱图

图2 补骨脂盐品1号正己烷提取部位GC色谱图

2.5 补骨脂生品和盐品GC指纹图谱及相似度评价

对同一厂家的 10批次不同批号的补骨脂生品和盐品的正己烷提取物，按照上述气相色谱条件进行实验，所得的指纹图谱叠加图和共有模式谱图见图3和图4。

运用Excel软件分别采用相关系数和夹角余弦为测度[4]，以共有模式作为对照指纹图谱，计算所有样品的相似度，结果见表2和表3。

图3 10批补骨脂生品正己烷提取部位GC指纹图谱叠加图与共有图谱

图4 10批补骨脂盐品正己烷提取部位GC指纹图谱叠加图与共有模式图谱

表2 10批补骨脂生品正己烷提取部位GC指纹图谱相似性评价结果

表3 10批补骨脂盐品正己烷提取部位GC指纹图谱相似性评价结果

3 结果与讨论

(1) 本论文对补骨脂生品和盐品的指纹图谱进行了初步研究，建立了气相色谱分析方法。该分析方法补骨脂生品重现性RSD＜1%、精密度RSD＜1%，补骨脂盐品RSD＜2%、精密度RSD＜3%，样品在24h内稳定，可用于补骨脂药材指纹图谱的测定。

(2) 本研究得出了10批补骨脂生品和盐品正己烷提取部位GC指纹图谱，并计算出相似度均在0.98以上，表明获得的指纹图谱具有指纹意义的特征组分，并能体现其整体性。该生产企业的补骨脂药材来源的化学成分一致性很好，补骨脂生品和盐品都有很高的相似度，可作为标准药材入药。

(3) 比较补骨脂生品和盐品的指纹图谱，发现谱图中所含峰的相对保留时间基本一致，在其峰面积和峰高方面存在一定差异。在保留时间5min之前的各峰，生品的相应各峰在峰高和峰面积上明显大于盐品，但是在保留时间为42～47min之间的峰，又出现了相反的现象，即盐品谱图中的峰高和峰面积明显大于生品谱图的相应峰。如能进一步对指纹图谱与药效关联进行研究，可对饮片厂正确加工炮制补骨脂提供依据。

[1] 中国中医药管理局.中国药典一部[S].北京：人民卫生出版社,2005.157.

[2] 张海秋,丁家欣,张玲,等.补骨脂HPLC指纹图谱研究[J].中国中医基础药学杂志,2005, 11(12):923.

[3] 杨荣平,涂永勤,寿清耀,等.合川补骨脂药材HPLC指纹图谱研究[J].中药材,2006,29(12): 1292.

[4] 苗爱东, 孙殿甲. Excel 2002在中药指纹相似度计算中的应用[J].药学进展,2003,27(1):51-54.

Study on GC Fingerprint of Fructus Psoraleae Extracts

LIU Jun-kai, LIN Bei
(North College of Beijing University of Chemical Technology, Langfang 065201, China)

Ten different batches of fructus psoraleae extracts from the same manufacturer were analyzed by GC.A preferable GC fingerprint of the fructus psoraleae was obtained, and through similarity analysis, the similarity of all batches of simples were above 0.98. The method established for GC fingerprint in the paper was simple, quick, and it was provided with good reproducibility and good stability.It could be used scientifically to evaluate and identify the quality of fructus psoraleae.

fructus psoraleae; GC; fingerprint

O 657.3

A

1671-9905(2010)09-0029-03

刘军凯，男，助教，京东燕郊经济技术开发区迎宾北路45号北京化工大学北方学院化工教研室,邮编：065201，xyzljk@163.com,15810190250

2010-06-09