免疫透射比浊法对ASO及RF试剂的应用性能评价

钟 兰，蔡玉玲

（海南省人民医院医学检验部，海南 海口 570311）

为了解该试剂的质量是否达标、与罗氏诊断试剂比较如何，我们对德赛诊断系统（DiaSys）公司生产的ASO和RF液体双试剂进行了应用性能评价。

1 材料与方法

1.1 仪器 OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪，COBASC 501模块化生化分析仪。

1.2 标本 均收集海南省人民医院门诊体检40例病人新鲜血清，男27例，女13例，年龄12-67岁。

1.3 试剂 德赛诊断系统公司的ASO和RF定量试剂盒，试剂批号分别为60060322、60063016；罗氏诊断公司生产的ASO和RF定量试剂盒，试剂批号分别为627428-01、623168-01；特定蛋白校准品批号分别为 DiaSys(60061186)、罗氏(155449-01)。

1.4 检测系统和实验系统 使用COBAS C 501模块化生化分析仪、罗氏诊断相关试剂和配套校准品组成的检测系统；使用OLYMPUSAU5400全自动生化分析仪、德赛诊断系统公司相关试剂和配套校准品组成的实验方法系统。

1.5 评估方法 测定过程及参数设置均按试剂盒说明进行。统计学处理采用SPSS10.0 for Windows软件进行数据处理。

1.5.1 精密度评估 批内精密度：各取高、中、低值3个不同水平的ASO和RF样品。在校准的当天每隔1 h测定一次，共20次，计算出均值、标准差和变异系数。批间精密度：单次校准后，每天一次测定高、中、低值3个不同水平的ASO和RF样品，共20 d，计算出均值、标准差和变异系数。

1.5.2 线性分析 参照NCCLS文件EP6-P[1]各取一低值标本(ASO 25 IU/ml、RF 1.4 IU/ml)、高值标本(ASO 288.0 IU/ml、RF 296.9 IU/ml)等量混匀后制备中值标本(ASO 156.5 IU/ml、RF 149.1 IU/ml)中值标本再分别和低、高值标本等量混匀，各制备产生两个水平标本(ASO 90.7 IU/ml、222.2 IU/ml；RF 75.2 IU/ml、223.0 IU/ml)。5个不同水平标本分别(ASO：25 IU/ml、90.7 IU/ml、156.5 IU/ml、222.2 IU/ml、288.0 IU/m；RF：1.4 IU/m、75.2 IU/m、149.1 IU/m、223 IU/m、288.0 IU/m)测定4次，参照NCCLS文件EP6-P[1]进行线性分析。

1.5.3 准确度评估 参照NCCLS文件EP9-A[2]使用病人新鲜血清对比实验方法系统及检测系统，评估实验方法系统的准确性。按照生产厂商提供的测定试剂盒(校准品)、测定参数和测定方法在OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪上进行校准，与罗氏诊断公司的同类试剂进行比对，观察结果相关程度。(1)将40个病人样本分5 d进行测定，每天测定8个样本，每个样本进行平行管测定。做双份第2次测定时，标本顺序全部倒过来。两种方法都按此实验。采集标本2 h内两台仪器对同批标本分别开始实验。(2)根据EP9-A[2]要求评估筛选数据(筛除离群点)。(3)对实验方法系统及比较方法系统结果进行相关性分析。

1.5.4 干扰实验 混合血清分成两份，一份加入1/10体积的含胆红素684 μmol/L的高总胆红素血清(ASO和RF分别为9 IU/ml和5 IU/ml)，一份不加，然后将两标本按4:0、3:1、2:2、1:3、0：4比例混合成5个不同浓度的液体，每份标本重复测定10次，计算平均干扰值。用同样方法加入含血红蛋白为5 g/L的溶血物和甘油三酯为22.6 mmol/L的脂肪乳，重复测定10次，并计算各自的干扰值。干扰值=各组均值-未加干扰物相应的均值。按NCCLS EP07-A文件进行干扰试验评价。

1.5.5 试剂的稳定性 将开启的ASO和RF(R1、R2)工作试剂置于2℃-8℃AU5400全自动生化分析仪试剂箱中，每2 d在AU5400上各测定空白吸光度和200 IU/ml ASO、125 IU/ml RF的标准品吸光度，连续测定15次，观察吸光度的变化。

2 结果

2.1 精密度 免疫透射比浊法在全自动生化分析仪中定量测定血清ASO和RF都有良好的精密度(批内、批间变异系数均小于5%)。见表1、表2。

表1 免疫透射比浊法测定血清ASO和RF的批内精密度

表2 免疫透射比浊法测定血清ASO和RF的批间精密度

2.2 线性分析 评价线性至少需要5个不同稀释度的分析物和做至少两次重复的测量。ASO测定的线性回归分析方程为：y=0.9741x+0.020，r=0.995；RF的线性回归分析方程为y=0.9741x+0.020，r=0.987。表明ASO在288.0 IU/ml浓度、RF在296.9 IU/ml浓度以内线性关系良好。

2.3 准确性 使用DiaSys试剂为主的实验方法系统与使用罗氏诊断试剂为主的检测系统分别对40份无明显溶血、黄疸或脂血的新鲜血清样品进行两项目测定，结果两法ASO的r2=0.95(y=1.25x-33)，两法RF的r2=0.94(y=0.77x-5.43)，说明Diasy试剂为主的实验方法系统与罗氏诊断试剂为主的检测系统结果相关性较好，即相关度较高。

2.4 干扰试验 当样品中胆红素≤684 μmol/L、血红蛋白浓度≤5 g/L、甘油三酯浓度≤22.6 mmol/L时，ASO和RF结果未受到干扰。

2.5 试剂的稳定性 经以上“1.5.5”项试验观察，30 d内试剂空白吸光度和标准品吸光度保持不变，ASO的试剂空白吸光度为0.0003，标准品吸光度为0.1947；RF的试剂空白吸光度为0.0002，标准品吸光度为0.0608。

3 讨论

ASO是实验室常用的项目，ASO可为链球菌感染诊断和监控下列疾病提供有用的信息：扁桃体炎、耳炎、丹毒、猩红热、风湿热、肾小球肾炎[3]。ASO可在感染后1-3周检测出来，且在3-6周达到峰值。RF是一类自身抗体，包括所有类型的免疫球蛋白，它们是抗菌素变性或聚合IgG分子FC片段的抗体，诊断所检测的RF主要是IgM类RF，用来检出各种类风湿疾病，检测RF可为鉴别诊断风湿疾病提供重要的信息。

免疫透射比浊法在全自动生化分析仪中定量测定血清ASO和RF都有良好的精密度(批内、批间变异系数均小于5%)；定量检测具有满意的线性响应(ASO r=0.995，RF r=0.987)，线性验证显示 ASO(25-288 IU/ml)、RF(1.4-296.9 IU/ml)中线性良好。DiaSys公司生产的ASO、RF试剂与罗氏诊断同类试剂相关性较好，相关系数r2分别为0.95和0.94。当样品中胆红素≤684 μmol/L、血红蛋白浓度≤5 g/L、甘油三酯浓度≤22.6 mmol/L时，ASO和RF结果未受到干扰；试剂保存时间长。综上结果，采用免疫透射比浊法在全自动生化分析仪中定量测定血清ASO及RF所用的德赛诊断系统公司生产的试剂稳定，线性范围宽，抗干扰能力强，具有良好的精密度与准确性，应用性能良好，评估合格。

[1]NCCLS.EP6-A:Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:A statistical approach;Approved guideline．Wayne PA．2003:NCCLS．

[2]NCCLS.EP9-A2:Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline—Second Edition Wayne PA.2002:NCCLS.

[3]Steven DL.lnvasive Group A streptococcus infections[J].Clin lnfect Dis,1992,14:2-11.