肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎患者中性粒细胞吞噬功能的研究

郭春辉，翁锡定

（江阴市人民医院感染科，江苏 江阴 214400）

自发性细菌性腹膜炎(Spontaneous bacterial peritonitis，SBP)是肝硬化合并腹水患者常见的严重并发症[1]，而中性粒细胞（Poly-morphonuclear leukocytes，PMNs）的吞噬作用可能是防御腹水感染的主要屏障。为此，我们采用酵母吞噬法检测50例失代偿期肝硬化患者PMNs的吞噬功能水平，以探讨肝硬化合并SBP免疫状况。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取本院2008年3月至2010年3月住院的失代偿期肝硬化患者50例，其中男36例，女14例，年龄最大65岁，最小32岁，平均48岁。所有病例均符合2000年西安会议制定的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[2]，且经腹部超音波确定均有腹水产生，其中合并SBP23例。SBP诊断依据：(1)典型的腹膜炎症状、体征，如发热、腹痛、反跳痛及腹肌紧张等腹膜刺激征；(2)腹水常规检查PMNs＞0.25×109/L；(3)腹水细菌培养阳性。具备上述标准中的两项或两项以上者，并排除结核性、癌性腹水即可诊断。正常人组30例，其中男22例，女8例，年龄最大62岁，最小30岁，平均47岁。均为我院体检中心经健康体检合格的健康人。所有受检者在取血前均未使用激素或免疫抑制剂等药物。

1.2 方法

1.2.1 PMNs吞噬功能检测 酵母吞噬法的主要过程是：①先将酵母菌置于37℃，培养18-24 h，然后用Hanks平衡盐水溶液洗涤两次，再计算酵母菌数，涂片后作姬母萨染色，测定其活力；②抽血2.5 ml置于无菌肝素抗凝管内，测定白细胞总数及中性粒细胞数；③取0.2 ml酵母菌Hanks平衡盐水溶液加到0.8 ml肝素抗凝全血中(使酵母菌数与中性粒细胞数之比为2：1，置37℃下孵育1 h)，吸取自然沉淀的白细胞层涂片，姬母萨染色。④计数200个PMNs中吞噬的酵母菌数(包括死菌与活菌)，活菌染成蓝色，死菌不着色或中心和(或)两端出现不着色区。

1.2.2 判定标准 (1)吞噬百分率：每100个PMNs中吞噬有酵母菌的中性粒细胞数；(2)吞噬指数：每100个PMNs吞噬的酵母菌数。

1.3 统计学分析 使用SPSS11.5软件进行统计分析，数据以均数±标准差（x±s）表示，均数比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

从表1可见，失代偿期肝硬化组PMNs吞噬百分率和吞噬指数分别为（20±6）%、（23±3）%，正常人组分别为（39±8）%、（43±1）%，失代偿期肝硬化患者PMNs吞噬功能显著低于正常人（P＜0.01)。此外，肝硬化患者中SBP组PMNs吞噬百分率和吞噬指数分别为（17±4）%、（19±5）%，明显低于非SBP组[23±8)%、（27±2）%，P＜0.01]，提示肝硬化合并SBP患者中性粒细胞吞噬功能水平明显减退。

表1 正常人和失代偿期肝硬化患者中性粒细胞吞噬功能水平比较

3 讨论

尽管在肝硬化并发SBP发病机制方面，国内外许多学者做了积极的研究，但是对其机制仍不十分清楚，目前认为自发性菌血症加上易感染的腹水”是形成自发性细菌性腹膜炎的原因。自发性菌血症发生基础是肠道细菌分布异常及肝硬化独特的血液动力学改变，更为重要的是肝硬化患者机体防御能力下降，主要见以下两类改变：其一是肝硬化患者单核-巨噬细胞系统功能低下[3]，加之肝内血液分流，很多血液通过解剖性或功能性肝内短路进行循环，使位于肝窦的单核-巨噬细胞系统不能发挥吞噬血液内细菌的作用。其二是PMNs数量及功能异常。Aref等[4]通过检测PMNs凋亡证明，肝硬化患者PMNs寿命缩短，加之肝硬化时由于脾机能亢进和骨髓造血功能受抑制，致使其外周血PMNs数量减少。功能异常最常见的变化是PMNs趋化性显著降低[5]，本组研究发现失代偿期肝硬化患者PMNs吞噬功能显著低于正常人，此与Nakamura等[6]报告的结果相一致。由此笔者认为可能因为单核-巨噬细胞、中性粒细胞的吞噬作用下降，细菌不能被清除，而在血循环中持续存在，最终可以定植于腹水，导致SBP发生。

此外，我们亦发现肝硬化患者中SBP组PMNs吞噬百分率和吞噬指数较非SBP组降低更显著，虽然其PMNs绝对数或相对数增高，因此，与PMNs数量相比，中性粒细胞吞噬功能更准确反映PMNs状态。结合临床发现PMNs吞噬功能降低程度常标志着患者已发生感染，或易于发生感染，且预后不良。据此分析，PMNs吞噬功能下降可作为肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎临床早期预警指标。

[1]汪长生,杨 进,孙 都,等.乙肝肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎危险因素分析[J].临床内科杂志,2010,27(1):31-33.

[2]中华医学会传染病与寄生虫学分会及肝病分会.病毒性肝炎防治方案[J].中华肝脏病杂志,2000,8(6):324-329.

[3]丁明权.肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎诊治进展[J].实用医药杂志,2008,25(8):1006-1007.

[4]Aref SE,Mahmoud LA,El Retie MF,et al.Assessment of neutrophil apoptosis ex vivo in hepatosplenic patients with neutropenia pre and post splenectomy[J].Hematology,2003,8(4):265-272.

[5]何浩明,田小平.肝硬化患者中性粒细胞趋化性测定[J].蚌埠医学院学报,1999,24(3):192.

[6]Nakamura I,Ochiai K,Imawari M.Phagocytic function of neutrophils of patients with decompensated liver cirrhosis is restored by oral supplementation of branched-chain amino acids[J].Hepatol Res,2004,29(4):207-211.