金匮肾气丸对“恐伤肾”模型小鼠醛固酮水平的调节作用

叶菁 邱丽瑛

（江西中医学院附属医院 南昌 330006）

恐惧作为一种不良精神刺激，对肾气和肾精的直接损伤，扰乱肾脏及其它脏腑多种功能活动，影响机体正常的生理秩序，是“恐伤肾”的关键所在。笔者应用小站台水环境实验建立“恐伤肾”小鼠模型，并给予金匮肾气丸进行干预，以此研究金匮肾气丸对心理应激小鼠免疫功能的调节作用，并分析其抗心理应激损伤的作用机制，为临床防治心身疾病奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 动物分组与处理 雄性昆明种小鼠120只，体重（20±1）g，年龄均为10月龄，将实验小鼠置于空气控制级别为SPF（Specific Pathogen Free）二级、室温（24±1）℃、湿度（55±5）%、明暗条件12h转换（6点开灯，18点熄灯）的环境下进行实验。依据实验设计，将动物按体重随机分为24h应激组、24h应激+给金匮肾气丸组、18h应激组、18h应激+给金匮肾气丸组、12h应激组、12h应激+给金匮肾气丸组、8h应激组、8h应激+给金匮肾气丸组、4h应激组、4h应激+给金匮肾气丸组、正常对照组、正常对照给药组，每组10只。动物称重后，按组放置不同的实验间。实验开始后，前十组动物站台应激，应激期间每天豆奶粉流质食物灌胃（4h组小鼠不给予食物灌胃），每4小时1次，每次灌胃量为0.8mL。正常对照组和正常对照给药组不参与应激实验，但同样灌胃给食、给药。

1.2 血清醛固酮水平的检测 醛固酮含量的测定采用放免法。采集全血，尽快分离血清，将标本存放于2～8℃并于24h内测定；或置-20℃以下冷冻，至使用前于室温平衡，若有沉淀物形成，在平衡并混匀后4℃离心去除。测试试剂盒为天津九鼎医学生物工程有限公司生产的专用试剂盒，仪器为科大创新股份有限公司中佳分公司生产的GC-911γ放射免疫计数仪。

1.3 组织醛固酮水平的检测 将各组小鼠处死，用75%酒精消毒后进入超净工作台，剖开胸腹腔，在冰面上完整地迅速取出肾上腺，滤纸吸干血后，将肾上腺加5mL DMEM培养液用细胞匀浆器匀浆，并置于-70℃冰箱保存备用。组织醛固酮含量的测定仍采用放免法。测试试剂盒为天津九鼎医学生物工程有限公司生产的专用试剂盒，仪器为科大创新股份有限公司中佳分公司生产的GC-911γ放射免疫计数仪。

1.4 统计学方法 所有实验结果用SPSS11.5软件包进行统计，样品的显著性检验用方差分析和t检验，百分比值数用卡方检验。

2 结果

2.1 应激不同时间对小鼠血清醛固酮的影响及中药调节 见表1。

表1 各组小鼠血清醛固酮水平及中药调节作用 （±S）mg/mL

表1 各组小鼠血清醛固酮水平及中药调节作用 （±S）mg/mL

注：与正常对照组相比，#P＜0.05；##P＜0.01；与对应应激组相比，*P＜0.05，**P ＞0.05。

组别 n 血清醛固酮含量正常对照组 10 128.56±50.83正常对照给药组 10 140.60±31.25 4h应激组 10 287.19±121.54#4h应激给药组 10 244.28±132.00**8h应激组 10 476.48±149.73##8h应激给药组 10 457.84±256.02**12h应激组 10 630.77±212.66##12h应激给药组 10 558.39±170.40**18h应激组 10 741.22±228.80##18h应激给药组 10 709.32±305.35**24h应激组 10 917.84±478.92##24h应激给药组 10 542.36±296.71*

2.2 应激不同时间对小鼠肾上腺组织醛固酮的影响及中药调节 见表2。

表2 各组小鼠肾上腺组织醛固酮水平及中药调节作用 （±S） mg/mL

表2 各组小鼠肾上腺组织醛固酮水平及中药调节作用 （±S） mg/mL

注：与正常对照组相比，#P ＜0.05，##P ＜0.01；与对应应激组相比，*P ＜0.05，**P ＞0.05。

组别 n 组织醛固酮含量正常对照组 10 164.90±42.51正常对照给药组 10 199.86±35.74 4h应激组 10 199.40±29.87 4h应激给药组 10 167.87±57.94**8h应激组 10 231.92±72.43#8h应激给药组 10 221.12±53.96**12h应激组 10 426.94±84.41##12h应激给药组 10 350.26±73.26**18h应激组 10 485.34±89.13##18h应激给药组 10 365.82±91.46**24h应激组 10 594.17±113.99##24h应激给药组 10 420.59±79.62*

3 讨论

心理应激是机体通过认识、评价而察觉到应激原（Stressor）的威胁时引起的心理、生理机能改变的过程。情志内伤是中医病因学之一，心理应激理论是西医学的基本病理过程之一，两种理论框架上具有一定的共通之处。由于神经-内分泌系统的变化，进而影响到机体蛋白质、糖、脂肪的代谢变化，以及心血管系统、消化系统、免疫系统、血液系统、泌尿生殖系统的病理变化[1]。应激反应是一种全身性的综合反应，它除了激活下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）和交感神经系统-肾上腺髓质释放糖皮质激素和儿茶酚胺类物质外，还引起多种其它激素、肽类物质、细胞因子等神经内分泌介质的分泌增多，从各个方面调整机体的适应能力，以保持应激状态下内环境的稳定[2]。

醛固酮（aldosterone，ALD）是肾上腺盐皮质激素的主要成分，是肾上腺皮质球状带细胞合成分泌的一种甾体激素，是电解质排泄的重要调节因子，在维持机体内环境的稳定中起着重要作用。传统理论认为其由肾上腺皮质束状带分泌，作用于肾脏集合管增加钠水重吸收和钾的排泄，主要受血管肾张素Ⅱ（AngⅡ）和血浆Na+、K+浓度调控。束状带分泌糖皮质激素，网状带分泌性激素，两带主要受垂体分泌的促肾上腺皮质激素（ACTH）调控。ACTH不但促进糖皮质激素的合成与分泌，而且是维持束状带和网状带正常结构的决定因素。ALD通过对血流动力学的影响以及直接细胞作用两种主要机制参与肾脏损伤。心理应激后可引起水盐代谢紊乱，应激和应激适应的产生通过HPA轴的不同位点产生神经内分泌效应，参与应激反应。在应激反应中，肾素-血管紧张素-醛固酮系统起到了重要作用。万瑜等[3]的研究显示，肾素-血管紧张素系统与经典的应激激素反应系统 （下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统及交感-肾上腺髓质系统）之间存在密切关系。陈新等[4]发现，在心理应激时，循环血中的血管紧张素Ⅱ及醛固酮水平可明显升高。心理应激刺激了下丘脑-腺垂体系统，释放出更多的ACTH，ACTH对ALD的分泌有促进作用。小站台水环境作为应激原使多种激素水平升高，如肾上腺素、去甲肾上腺素、促肾上腺皮质激素、β-内啡肽、β-促脂素、血管紧张素等。这些激素均为刺激ALD分泌的激素，应激原持续存在，ALD等激素水平亦持续升高。ALD分泌调节比较复杂，它既受垂体ACTH的调控，又受血钠、血钾、细胞外容积的影响。在机体处于应激状态下，血浆和脑脊液中AngⅡ含量增高，大量的AngⅡ促使ALD分泌增加，且直接收缩血管，使患者血管强烈收缩，水钠潴留，进一步加重血液动力的障碍。如此反复，使血浆中ALD浓度持续上升。

中医学认为，肾主纳气，最为首要的是调节气机。从中医学角度而言，不良情志刺激首先是影响了机体正常的气机，进而气血津液及脏腑功能失调，阴阳失衡，机体的正气受到损害，这与现代应激学说的应激原理有许多相似之处，而肾主气的功能对机体的应激反应具有重要的调节作用。恐惧应激可致机体下丘脑-垂体-靶腺轴的损伤，而这又是中医肾的功能基础，这些器官的损伤必然导致“肾”的功能减退，这既证明了恐会伤肾，又初步表明了“恐伤肾”的病理机制，本研究亦为进一步研究中医学肾脏与慢性心理应激的关系提供了一定的实验依据，对中医“恐伤肾”理论的研究等都具有良好的理论价值和现实意义。

本实验研究表明，金匮肾气丸抑制慢性心理应激小鼠HPA轴的兴奋性，可以有效地改善小鼠的心理应激反应。本方为一首治疗肾虚证的方剂，其组方以及药物的配伍特点为补阴药与助阳药相互为用，以阴生阳长，阴阳互根；其作用为温补肾阳，能调节肾的生理功能，肾主气化，为生命之本，本方具有滋阴助阳的作用，使肾阳振奋，气化复常。金匮肾气丸通过补益肾气、强壮精髓，能有效降低心理应激小鼠血清ALD水平，起到了改善患病机体免疫功能状态的治疗效果。该药的改善作用可能与其对各种神经递质和激素的代谢调节有关，通过抑制肾上腺糖皮质激素的合成可能是其作用机理之一。同时也说明补肾法及其方药具有良好的抗心理应激损伤作用。

[1]金惠铭.病理生理学[M].北京：人民卫生出版社,2009.136-138

[2]邵枫,林文娟,王玮雯.心理应激的免疫抑制作用及神经内分泌反应的相关性[J].心理学报,2001,33（1）：43-47

[3]万瑜,杨钢,万曙霞,等.肾素-血管紧张素系统-应激激素反应系统[J].生理学报,1996,48（6）：521-522

[4]陈新,赵英,何爱桃,等.心理应激前后血液中部分血管活性物质浓度的变化[J].中国行为医学科学,2003,12（2）：148-149