CD44v6和MMP9在子宫内膜癌中表达的研究

付秋风 熊勇 孙丽萍 秦贇娜 于晓红

（江西省妇幼保健院 南昌 330006）

子宫内膜癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，其发病率在世界范围内呈上升趋势，严重威胁妇女的健康。而肿瘤的浸润和转移与临床的治疗有着很大的关系。近年来研究表明，肿瘤基膜的完整与否和细胞外基质的降解情况是影响肿瘤细胞移动的关键环节，CD44（粘附分子）及其变异体与MMP9（基质金属蛋白酶）在肿瘤的浸润和转移中起着重要作用。本文通过联合检测MMP9、CD44v6在子宫内膜癌中的表达，探讨其与子宫内膜癌临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2004年1月～2005年8月在本院手术治疗的患者，从中选取子宫内膜癌组织78例（根据FIGO分期标准，Ⅰ期48例，Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期17例），其中子宫内膜腺癌59例、非子宫内膜腺癌19例。对每例的手术病理分期、组织学分级、肌层浸润和淋巴结转移予以登记。同时选取子宫内膜不典型增生组织30例、正常子宫内膜组织30例（增生期子宫内膜10例、分泌期子宫内膜10例、绝经期子宫内膜10例）作为对照组。所有患者术前均未行放、化疗或激素治疗。

1.2 染色方法 免疫组化采用Elivision plus试剂盒将多个抗鼠和抗兔的IgG分子与辣根过氧化物酶聚合，所形成的聚合物直接与一抗结合，从而放大了抗原抗体结合的信号。

1.3 结果判定 采用双向评分：CD44v6和MMP-9均定位于细胞膜或细胞浆，按染色强度及阳性细胞所占百分比打分。癌细胞＜10%阳性0分，11%～40%1分，40%～70%2分，＞70%3分；显色度计分：细胞无显色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。将两分相加，0分为-，1～2分为+、3～4分为 ++，5～6分为 +++。

1.4 统计学处理 采用SPSS 10.0软件分析系统，设计的两样本比较用秩和检验和χ2检验，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 CD44v6、MMP9在正常内膜、不典型增生内膜及子宫内膜癌中的表达 不典型增生内膜与正常内膜相比，CD44v6与MMP9阳性率有上升趋势，但无统计意义（P＞0.05），正常内膜、不典型增生内膜与子宫内膜癌相比有显著差异（P＜0.01）。见表1。

表1 CD44v6、MMP9在正常内膜、不典型增生内膜及子宫内膜癌中的表达 例

2.2 子宫内膜癌CD44v6、MMP9表达的临床病理意义 CD44v6、MMP9的表达与子宫内膜癌病理分级、临床分期、组织类型无关，与淋巴结转移有关。见表2。

表2 子宫内膜癌MMP9、CD44v6表达的临床病理意义 例（%）

2.3 CD44v6、MMP9的表达在子宫内膜癌中关系CD44v6、MMP9表达有明显相关性，二者共同表达即显示有较高的淋巴结转移发生。见表3。

表3 MMP9、CD44v6的表达在子宫内膜癌中关系 例

3讨论

子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，浸润和转移是影响其预后的重要因素。近年来研究表明，表面粘附分子（CD44）和基质金属蛋白酶（MMP）在浸润和转移中起着重要作用。CD44是肿瘤转移中一个重要的粘附分子，是一种高度异质性跨膜单链糖蛋白，广泛存在于淋巴细胞、成纤维细胞和上皮细胞中，由结缔组织、内皮细胞、巨噬细胞、粒细胞、胶原细胞合成，参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性粘附[1]，调节细胞的增殖与移动，参与淋巴细胞分化，活化成熟及“归巢”以及促进血管生成。人类CD44基因定位于11号染色体短臂上，包含至少20个外显子，外显子按其转录片段是否参与拼接分为两种：一种为标准CD44型（即CD44s），另一种为变异型 CD44（即 CD44v）。多种研究表明，CD44变异体的不同表达方式在多种肿瘤的转移中起着重要作用，其中以CD44v6在肿瘤的侵袭转移中关系密切，甚至认为CD44v6可作为肿瘤独立的预后指标[2]。目前关于CD44v6定量与子宫内膜癌的关系尚存在争议，Ayhan等[3]认为CD44v6表达与肌层浸润深度、淋巴结转移等不良预后因素呈负相关，CD44v6表达阴性患者有较高的复发率及较短的无瘤生存期。曲群等[4]则报道CD44v6在子宫内膜癌中表达率高达74%，与临床分期和病理分级呈正相关，并随肿瘤细胞侵袭肌层深度增加，阳性表达率增高。而Hoshimoto等[5]却认为CD44v6的表达与临床病理参数无相关性，肿瘤的浸润转移是个复杂的过程。

MMP则是降解细胞外基质和基底膜的主要酶类，是由结缔组织、内皮细胞、巨噬细胞、粒细胞、胶原细胞合成和分泌，能分解纤维类胶原；同时也调控细胞外基质相关生长因子和细胞因子的分泌。哺乳动物中，迄今为止鉴定出24种MMP，各自降解不同的底物，MMP9是基质金属蛋白酶家族成员之一，可降解细胞外多种基质成分，其中包括基底膜的主要成分Ⅳ型胶原。肿瘤细胞表达MMP9与其侵袭转移能力有关，其过度表达与人类许多恶性肿瘤的浸润转移密切相关。Larlaro[6]甚至认为MMP9是子宫内膜中的主要金属蛋白酶，其过度表达随子宫内膜癌的手术病理分期的升高、肌层浸润程度的加深、淋巴结的转移而增强，但其高表达机制不清。YU等[7]在乳腺癌的实验中发现CD44和MMP9有协同作用，认为CD44是MMP9在细胞表面的附着点，确保了CD44介导的肿瘤浸润转移的机制。

本研究结果显示：MMP9、CD44v6的阳性表达与病理分级、临床分期、肌层浸润程度、组织型类别虽呈上升趋势但无统计学意义，但在淋巴结转移组中明显高于无淋巴结转移组，二者之间有显著差义。表明通过联合检测MMP9、CD44v6在子宫内膜癌中的表达，可以预测转移潜能判断预后，为临床进一步积极治疗提供理论依据。

[1]Goodison S,Tarin D.Current status of CD44 variant isoforms as cancer diagnostic markers[J].Histopathology,1998,32（1）:1

[2]Amaguchi A,Goi T,Seki K,et al.Clinical significance of combined immunohistochemical detection of CD44v6 and sialyller expression for colorectal cancer patients undergoing carative resection[J].Oncologg,1998,55（5）:400-403

[3]Ayhan A,Tok EC,Bildiricil,et al.Over expression of CD44 Variant 6 in human endometrial cancer and its prognostic significance[J].Gynecol Oncol,2001,80（3）:355-358

[4]曲群,梁睿.CD44v6和Cd15s抗原在子宫内膜癌中的表达及临床相关性研究[J].肿瘤防治杂志,2003,10（9）：940-942

[5]Hoshimoto K,Yanauchi N,Takazawa Y,et al.CD44 Variant 6 in endometrioid carcinoma ofthe uterus:its expression in the adenocarcinoma component is on independent prognostic marker[J].Pathol Res Pract,2003,199（2）:71-77

[6]Larlaro M,Loverro G,Vacca A,etal.Angiogenesisextentand expression of matrix metalloproteinase-2 and-9 correlate with upgrading and myometrial invasion in endometrial carcinoma[J].Eur J Clin lnvest,1999,29（9）:793-801

[7]Yu Q,Stamenkovic I.Localization of matrix mwtallo proteinase 9 to the cell surface provides a mechanism for CD44-mediated tumor invasion[J].Cenes,1999,13（1）:35