HPLC法测定佳乐静液中阿普唑仑的含量

周慧 高剑锋

HPLC法测定佳乐静液中阿普唑仑的含量

周慧 高剑锋

目的建立高效液相色谱法测定佳乐静液中阿普唑仑的含量的方法。方法采用高效液相色谱法测定佳乐静液中阿普唑仑的含量，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为磷酸盐缓冲液:乙腈:甲醇(65:35:5);流速:1 ml/min;进样:20 μl;阿普唑仑紫外检测波长:220nm［1］。以外标法计算样品中阿普唑仑的含量。结果阿普唑仑浓度在9.318～31.06 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999(n=5)。阿普唑仑精密度RSD(%)=0.98;重复性RSD(%)=0.28;稳定性RSD(%)=0.85。样品的平均回收率为100.0%，RSD(%)=0.34。三批样品含量测定的平均值分别为97.18%、97.73%、98.60%。结论方法简便、迅速、灵敏、准确，并获得了满意的测定结果，可以推广使用。

反相高效液相色谱法;阿普唑仑;佳乐静液

佳乐静液为口服液，溶液呈灰褐色，气微香，味苦后涩。是临床常用的治疗精神忧郁药物，应用非常广泛。佳乐静液由阿普唑仑、甘草、小麦、大枣等药物组成，主要用于治疗精神忧郁，也用于养心、健脑、安神、易惊失眠、烦躁不安。原标准仅对佳乐静液处方中做了鉴别、检查等常规项目，而处方中主药阿普唑仑却没有含量控制标准，显然不能有效的控制药品的质量和疗效。本课题采用高效液相色谱法、紫外分光光度法等现代分析手段，对佳乐静液中的阿普唑仑含量测定方法进行研究，本方法科学、方便，为药品质量标准的修订提供了科学依据。

1 实验

1.1 实验仪器与试药 P680A LPG-4型高效液相色谱仪(美国戴安公司)，四元梯度泵;色谱柱:KromasiL C18(250 mm×4.6 mm，5μm);TU-1800 spc型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);BS21S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司);乙腈与甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾和磷酸氢二钾为分析纯，阿普唑仑对照品(1218-9702)购于中国药品生物制品检定所;佳乐静液(济宁市精神病防治院制剂批号:Z0820030114;Z0820030320;Z0820031060)。

图1 空白溶液

图2 对照品

图3 样品

1.2 实验条件

1.2.1 阿普唑仑紫外检测波长的选择［1］:取阿普唑仑对照品适量，用流动相溶解，配制阿普唑仑对照品的标准溶液4 μg/ml，在200 nm～350 nm的波长范围内测定。在220 nm处有最大吸收，所以选择220 nm为阿普唑仑检测波长。

1.2.2 流动相的选择 根据阿普唑仑的化学性质，按磷酸盐缓冲溶液-乙腈-甲醇(65:35:5)的比例进行测定［1］。

1.2.3 阿普唑仑对照品溶液的制备 精密称取阿普唑仑对照品(1218-9702)0.01564 g，置于100 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，从中精密量取1 ml置于100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，得对照品溶液。

1.2.4 供试品溶液的制备 精密量取佳乐静液15 ml，置于分液漏斗中，加乙醚提取5次各20 ml，合并上层清夜，将合并液水浴蒸干，用流动相将其溶解到10 ml容量瓶中，摇匀，用微孔滤膜将其过滤，取续滤液进样。

1.2.5 空白干扰实验 精密量取不含阿普唑仑而含佳乐静液中其他成分的空白溶液15 ml，按供试品溶液的制备方法操作取续滤液进样。见图1、图2、图3。

1.2.6 线性关系考察 精密称取阿普唑仑对照品(1218-9702)0.01553 g，置于100 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。分别精密量取阿普唑仑对照品贮备溶液3.0 ml、5.0 ml、6.5 ml、8.0 ml、10 ml置 50 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μl。

以阿普唑仑浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标作图，阿普唑仑线性回归方程为:Y=-37830.2+162660.8X，r=0.9999(n=5);阿普唑仑进样量在9.318～31.06μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

1.2.7 精密度实验 取1.2.4项下的续滤液连续进样5次，进样 20 μl，阿普唑仑 RSD(%)=0.38。

1.2.8 重复性实验 精密量取佳乐静液15 ml 5份，置于分液漏斗中，加乙醚提取5次各20 ml，合并上层清夜，将合并液水浴蒸干，用流动相将其溶解到10 ml容量瓶中，摇匀，用微孔滤膜将其过滤，各取续滤液进样，进样20 μl，阿普唑仑RSD(%)=1.38。

1.2.9 稳定性实验 取2.3.1项下的续滤液作为供试品溶液，分别于0，1，2，3，6，12，24 h，进样20 μl，测得峰面积值，计算得阿普唑仑的RSD(%)=0.85。

1.2.10 回收实验 阿普唑仑回收率测定:精密量取不含阿普唑仑而含佳乐静液中其他成分的空白溶液15 ml 9份，置于分液漏斗中，精密加入2.4.1项下阿普唑仑对照品贮备溶液 0.8 ml、1 ml、1.2 ml各 3 份，再用乙醚提取 5 次各 20 ml，取上层清夜，合并，水浴蒸干，用流动相溶解到10 ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。进样20 μl，结果见表1。

表1 阿普唑仑的回收率测定结果

2 样品含量测定

精密量取佳乐静液15 ml置于分液漏斗中，加乙醚提取5次各20 ml，合并上层清夜，水浴蒸干，置于10 ml容量瓶中，用流动相溶解，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，进样20 μl。同法制备不含阿普唑仑而含佳乐静液中其他成分的空白溶液进样20ul。精密量取1.2.5项下阿普唑仑对照品贮备溶液1 ml置于10 ml容量瓶中，用流动相稀释，摇匀，进样20ul。样品含量测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果(例，%)

3 结果讨论

3.1 佳乐静液为中药，由于中药成分复杂，不能直接进样，须选择溶剂进行提取。佳乐静液药物提取过程中选择乙醚作提取溶剂提取阿普唑仑，比用氯仿的提取效果好，并且乙醚比氯仿易挥发，对人体的危害程度小，操作简单。在操作过程中比较得出结论，选择乙醚作提取溶剂提取阿普唑仑是最佳选择。

3.2 佳乐静液中阿普唑仑的提取有一定的难度，经过多次的尝试和比较，得出结论要用乙醚提取5次才能把阿普唑仑从口服液中完全提取出来，其含量测定才能达到要求。

3.3 根据阿普唑仑的化学性质，采用磷酸盐缓冲液:乙腈:甲醇(65:35:5)的比例进行采集高效液相图谱得到的分离度、理论塔板数均符合要求［1］。

3.4 本课题制定的高效液相色谱法测定佳乐静液中阿普唑仑含量的方法，专属性强，重现性高，回收率高，适于作为质量控制标准推广应用。

3.5 通过对3个批号的佳乐静液中阿普唑仑含量的测定，我们发现药物中阿普唑仑含量均符合要求，但由于阿普唑仑的毒副作用比较大，有较强镇静催眠作用。因此，有必要在佳乐静液质量标准中加入阿普唑仑含量的测定项目，以确保药品监督管理部门更全面的监管佳乐静液的药品内在质量，进而更有力的保障广大人民群众的用药安全、有效。

［1］国家药典委员会编.中华人民共和国药典.二部.2005年版.北京:化学工业出版社，2005.

Objective To establish a Determination of in Alprazolam Jiale hydrostatic.MethodsDetermination of Jiale hydrostatic in the content of Alprazolam，18 alkyl silane bonded silica filler for the mobile phase for PBS:acetonitrile:methanol(65:35:5);velocity:1 ml/min;sampling:20 μl;Alprazolam detection wavelength:220 nm.Samples outside the standard method of calculating the content of Alprazolam.Resultsalprazolam concentration in the 9.318 ～31.06 μg/ml and the peak area within the framework of a good linear relationship，r=0.9999(n=5).Alprazolam precision RSD(%)=0.98;repetitive RSD(%)=0.28;stability RSD(%)=0.85.Samples of the average recovery was 100.0percent，RSD(%)=0.34.Three batches of samples of the average of 97.18 percent，respectively，97.73 percent，98.60 percent.ConclusionThe method is simple，rapid，sensitive and accurate，and was satisfied with the results of，you can use.

RP-HPLC;Alprazolam;Jialejing hydrostatic

272100 济宁市药品检验所(周慧);山东省安康医院(高剑锋)