ROC曲线评价甲胎蛋白异质体对原发性肝癌的诊断价值

曹 立 ，孙华宝，敖琴芳 ，梁 青 ，叶德强 ，吕定英，罗 芳

(南昌市第九医院，1、检验科；2、质控科；3、感染科，江西 南昌 330002)

原发性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)为全球第5大常见恶性肿瘤，我国肝癌的死亡居恶性肿瘤死亡率的第2位，占全世界肝癌死亡人数的45%。PHC病程发展快、预后差、死亡率高，及时准确的诊断和治疗是提高生存率的关键，而早期PHC多无明显的临床症状和体征，且病灶直径小于5cm，一般不易被发现。甲胎蛋白(AFP)是一种具有特征性的寡糖链蛋白，由于其癌胚性作为原发性肝癌(PHC)的辅助诊断及疗效观察指标应用多年，但临床上仍有30～40%的PHC患者血清AFP含量在正常范围内[1]。根据糖链类型不同的AFP与植物凝集素亲和性不同的特性，可将其分为几种不同类型的AFP异质体[2]。我们对150例肝病患者和25例健康体检者进行了小扁豆凝集素亲和性甲胎蛋白异质体和AFP等8种肿瘤肿瘤标志物检测，采用ROC曲线以评价其对PHC的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 病例选择 150例各型肝病患者均为2007年5月至2009年5月我院住院患者，临床诊断均符合2000年第十次全国病毒性肝炎与肝病学术会议修订的“病毒性肝炎防治方案”的标准[3]，男122例，女28例，年龄25～70岁。其中急性肝炎(AH)25例，慢性肝炎 (CHB)25例，肝硬化 (LC)25例，原发性肝癌(PHC)50例，重型肝炎(SH)25例，原发性肝癌患者均经病理学或影像学检查证实。正常对照组(NC)25例，男17例，女8例，年龄20～66岁，均为同期我院体检正常并排除其他慢性疾病的健康者作为对照。

1.2 试剂 AFP-L3试剂由北京热景生物技术有限公司提供，AFP、CEA、SF、CA199 试剂盒为罗氏公司产品，GGT、ALP、AFU的试剂盒为维坊三维公司产品。

1.3 检测方法

1.3.1 AFP、CEA、SF、CA199 检测采用电化学发光免疫法，操作严格按说明书，使用仪器为罗氏E2010电化学发光仪。

1.3.2 AFP-L3的分离采用微量离心柱法，离心柱内装有耦联了小扁豆凝集素(LCA)的琼脂糖，可以特异结合AFP-L3，当血清流过离心柱时，与LCA结合力强的甲胎蛋白异质体就结合于柱中，经过清洗洗去不结合的甲胎蛋白，再经过离心洗脱后获得AFP-L3，其后检测方法同AFP。

1.3.3 GGT、ALP、AFU检测采用酶速率法，操作严格按说明书，使用仪器为OLYMPUS AU640全自动生化分析仪。

1.4 统计学处理 用SPSS 16.0软件进行ROC分析及单因素方差分析，组间均数两两比较用S-N-K法；率的比较用χ2检验；用四格表法计算灵敏度(Se)、特异度(Sp)、Youden 指数、阳性预测值(PV+)、阴性预测值(PV-)、准确度(AC)特征参数。

2 结果

2.1 肝病组与正常对照组8种肿瘤标志物检测结果，见表1。组间均数两两比较结果是AFP、AFPL3、CEA、AFU、GGT 指标，PHC 组与其它各组间差异有统计学意义；CA199指标，PHC组、SH组与NC组，PHC组与AH组、CHB组差异有统计学意义；SF指标，NC 组与 PHC、AH、CHB、LC、SH 组，PHC 组与CHB组间差异有统计学意义；ALP指标，PHC组与其它各组间差异有统计学意义，AH组与NC组间差异有统计学意义。

表1 肝病组与正常对照组8种肿瘤标志物检测结果

2.2 8种肿瘤标志物ROC分析结果及特征参数中，AFP-L3 的 AUCROC最大，Youden 指数、PV-、AC最高；SF 的 AUCROC最小，Youden 指数、PV+最低；Se指标中GGT的最高，CEA最低，Sp指标中ALP-L3最高，CA199最低，AC指标中AFP-L3最高，AFU最低，见表2。

表2 8种肿瘤标志物ROC分析结果及特征参数

2.3 PHC组8种肿瘤标志物的ROC曲线，见图1。

图1 PHC组8种肿瘤标志物的ROC曲线

2.4 PHC组不同AFP浓度患者AFP-L3的检测结果，见表3。

3 讨论

受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)是一种以信息检出理论为基础，广泛应用的数理统计方法，ROC曲线描述了诊断试验区分患者与非患者的固有能力，不受患病率的影响，综合了灵敏度、特异度两个指标，而且考虑了所有可能的诊断界值的影响，因而能更客观全面地评价诊断试验的准确性，可用于诊断临界点的正确选择，对临床实验室工作尤为重要[4]。本研究结果显示，用于鉴别诊断PHC肿瘤标志物中，AUC≥O.7的指标有AFP、AFP-L3、CA199、CEA、AFU、GGT、ALP，表明其有一定的准确性，可作为预测PHC的单项指标[5-7]。

表3 不同AFP浓度AFP-L3测定结果

3.1 AFP-L3在8种原发性肝癌标志物中诊断价值

1970年Purves[8]等首次应用淀粉凝胶电泳分离人AFP异质体，因AFP分子存在异质性，尤其是糖链的差异较大，导致一些PHC患者AFP检测阴性或持续低浓度阳性。在本研究中PHC组AFP-L3百分比均数为 (18.2±10.1)显著高于非PHC肝病组(6.7±3.2)(P=0.00)，也显著高于慢性肝炎组(5.8±2.2)(P=0.00)与肝硬化组(8.2±3.6)(P=0.00)；慢性肝炎组、肝硬化组及PHC组AFP-L3的阳性率分别为0%、12%、76%，差异有统计学意义(P＜0.01)，从表 2可见，AFP-L3的 AUCROC最大， 其 Sp、Youden指数、PV-、AC也最大，AFP-L3检测提高了PHC诊断检出率和正确率，在8种PHC标志物中单项诊断价值最高。

3.2 AFP-L3在PHC诊断中早期预警作用

据文献报道，AFP-L3阳性对PHC正确预警率达94%[9]，而且与影像学相比较,AFP-L3在早期PHC的诊断可提前3～28个月[10]。本研究中，在临床诊断、B超诊断均为阴性，AFP-L3为阳性的13例患者中，3～18个月后11例被诊断为肝癌。可见，在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位性病变时，对AFP低浓度阳性病例进行AFP-L3检测可以早期预警肝癌发生。

3.3 AFP-L3在低浓度AFP阳性良、恶性肝病的鉴别作用

AFP、AFP-L3对PHC的敏感性分别为84%和76%，差异无统计学意义(F=1.0，P=0.317)，由表 3可见，AFP＜400ng/ml时，AFP-L3 阳性率为 30%，AFP＞400ng/ml时，AFP-L3阳性率为100%，两者差异有统计学意义(F=31.52，P=0.00)，而不同AFP浓度患者的AFP-L3浓度差异无统计学意义 (P＞0.05)，AFPL3与AFP浓度无相关性。因此,AFP-L3更适用于AFP低浓度阳性良、恶性肝病的鉴别诊断，与郑颖[11]等报道一致，适合向临床广泛推广。

我国是肝炎病毒感染较重的国家之一，尤其HBV、HCV感染与PHC的发生关系密切。在高危人群中，早期监测和发现PHC，可赢得手术治疗时间，提高生存率。但因PHC细胞生物学特性具有复杂性及多态性，不同时期的癌细胞在生长速率、表面受体、免疫特性、浸润性、转移性、对药物毒性方面均可能不同。临床上现有的PHC标志物众多，尚无单一标志物能够诊断所有PHC，随着生物科学技术的不断发展，正确合理使用血清标志物，有很大临床价值，每一种血清肿瘤标志物在诊断价值上都有其独特的优势，也有它的局限性。因此，联合检测几种血清PHC血清标志物可以优势互补，提高诊断效率，这也是近年原发性肝癌实验诊断的发展趋势。

[1]汤钊猷.现代肿瘤学[M].第2版,上海:上海医科大学出版社,2001:553.

[2]Philip JJ,Stephen H,Phil M,et al.Germ cell tumors express a specific alpha-fetoprotein variant detectable by isoelectric focusing[J].Cancer,1995,75(7):1663-1668.

[3]中华医学会传染病与寄生虫病学分会,肝病学分会.病毒性肝炎防治方案[J].中华传染病杂志,2001,19(1):56-62.

[4]刘萃红.应用ROC曲线评价5项生化指标对肝炎的诊断价值[J].郑州大学学报(医学版),2008,43(6):1236-1238.

[5]王永忠,罗立波,吴国祥,等.微量离心柱法分离检测甲胎蛋白异质体及其临床意义[J].中华实验和病毒学杂志,2007,21(2):135-137.

[6]商志远,卢永刚,张 洁,等.多肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌诊断的应用价值分析[J].昆明医学院学报,2008,29(4):157-159.

[7]洪锡田,张瑞丽,王 丹.血清AFP、CA19-9、SF检测在原发性肝癌诊断中的应用[J].临床肝胆病杂志,2007,23(1):57.

[8]Domingue GJ.Cell wall-deficient bacteria[M].Massachusetts:Addison-Wesley,1982,121.

[9]Tu ZX,Yin ZF,Wu MC.Prospective study on the diagnosis of hepatocellular carcinoma by using alpha fetoprotein reactive to Lentil lectin[J].Chin Med Sci J,1992,7(4):191-195.

[10]殷正丰.甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用[J].实用肿瘤杂志,2004,19(1):1-4.

[11]郑 颖,单晓洁,任茗睿,等.微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体对原发性肝癌诊断的意义[J].浙汀实用医学,2009,14(1):3-4.