复方兽药的药敏试验(药敏片法)与药物选择

马述臣 （青岛康地恩药业有限公司 266111）

随着家禽疾病的发展和兽医临床诊治水平的提高，兽医临床上愈来愈越多地通过药敏试验来进行药物的选择。由于目前市场上复方兽药的成分不透明，给药敏试验带来了许多困难。为了更好地利用药敏试验来选择药物，根据多年的临床经验以及制药工作经验，介绍一下兽医临床上如何利用药敏试验来选择复方兽药。

1 材料准备

1.1 培养基

按试验要求选用不同的培养基。若做禽大肠杆菌药敏试验宜选择普通琼脂或麦康凯培养基；若做沙门氏菌药敏试验宜选择SS培养基；若做禽巴氏杆菌药敏试验可选择鲜血琼脂平板培养基；另外使用磺胺药物做药敏试验则应选用无蛋白胨肉汤琼脂平板培养基等。

1.2 药敏试纸

选择质量好的定量滤纸以备制作药敏纸片。

1.3 细菌

选自具有典型症状病鸡的病变部位提取病料。如肝脏、心脏、脾脏等脏器。

1.4 其它设备

接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头等。

2 试验准备

2.1 药敏片的准备

2.1.1 药敏片的制备 取定量滤纸，用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片，取50～100片圆纸片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，经15磅15～20min高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使之完全干燥，并在60℃的条件下烘干备用。

2.2.2 药液的制备 根据经验，按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10～20倍比例配制药液。如某药品100g兑水100kg，表明该药治疗量为1g兑水1L，配制药液时就是1g加50～100ml水或1L水加10～20g药品，即为配制药敏片所用的药液浓度。

2.2 药敏片的制作 将含有50～100片纸片的青霉素瓶内加入配制好的药液适量，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，轻轻翻动纸片以免将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密封，切勿受潮，置阴暗干燥处存放备用(一般有效期3～6个月)。

3 试验操作方法

3.1 药敏片法

3.1.1 涂布 在超净台或自制无菌操作台中，用经火焰灭菌(酒精灯)的接种环从病料中挑取适量细菌培养物，分别在平皿边缘相对4点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2，然后找到第2点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。(另:可将待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，将少量混悬液倒入平皿培养基上，轻晃平皿使铺匀，放置5～10min)。

3.1.2 贴片 将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取已制好的干燥药敏片分别贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。若使观察结果更准确，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上，一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片。一般9cm直径的平皿可同时贴6～9片，同时标明各种药敏片的名称。最后将平皿培养基底部向上(倒置)放于37℃温箱中培养12～24h。

4 结果观察与判断

取出培养12～24h后的培养皿进行观察。在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准，抑菌圈直径20mm以上敏感度为极敏、15～20mm敏感度为高敏、10～14mm敏感度为中敏、10mm以下敏感度为低敏、0mm敏感度为不敏。

5 药物的选择与应用

5.1 影响药敏结果的因素

5.1.1 培养基 应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适(约5～6mm)，不可太薄，一般直径为9cm的培养皿，倾注培养基以18～20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。

5.1.2 细菌接种量 细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

5.1.3 药物浓度 药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。药液配制时特别注意：目前兽药厂家生产的兽药多为复方药物，其用量实际上是该药中实际主要成分的治疗量(说明书或标签中一般未标出)，有时不是说明书(或标签)中标明的药物成分，要特别注意区分。另外，按按《中华人民共和国兽药典》规定：说明书(或标签)中的用量即为治疗量，说明书(或标签)中一般不能写预防量。

5.1.4 培养温度和时间 一般培养温度和时间为37℃12～24h，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2～4h，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。

5.2 药物选择

兽医临床上药物的选择至少应具备以下条件：

5.2.1 敏感性要高 敏感性越高的药物杀菌作用也越强。因此，药物敏感试验后，首先应考虑选择高敏药物，也可考虑选用两种药物协助使用，以减少耐药菌株。

5.2.2 药物在体内吸收状况与所治疗疾病的发病机制相符 在选择高敏药物的同时还要考虑药物的吸收途径以及在体内的吸收、转化状况。因为药敏试验是药液直接和细菌接触，而在给禽用药的时候，必须通过机体的吸收并达到感染部位才能使药物达到一定的效果。譬如禽大肠杆菌病，如果是败血性型禽大肠杆菌病，那么选择的药物就应该既敏感性高又易于吸收才适合，如果敏感性高但吸收不佳，其治疗效果是不会好的。

因此，在选择药物时，要同时考虑以上因素才会达到较好的治疗效果。如果达不到上述要求，宁可选择敏感性不是特高但药物却能很快到达感染部位的药物，这一点非常重要。