高效液相色谱法测定复方石韦薄膜衣片中苦参碱的含量

刘振华，李忠思，商春丽，米学敏

（1.承德医学院附属医院药剂科，河北承德 067000；2.承德医学院中药研究所；3.承德颈复康药业集团有限公司）

复方石韦片处方由石韦、扁蓄、苦参、黄芪四味药材组成，方由《证治汇补》中石韦散化裁而来，由承德颈复康药业集团有限公司独立开发研制，1991年收载于河北省药品标准（1991年版），现收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，是国家中药保护品种[1]。复方石韦片具有清热燥湿、利尿通淋之功效，用于小便不利、尿频、尿急、尿痛、下肢浮肿等症；也可用于急慢性肾小球肾炎、肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎，疗效显著，临床应用前景广阔。复方石韦片原为半浸膏糖衣片，由于糖衣片存在包衣时间长、成品易吸潮褪色等缺陷，现已改为薄膜衣片；原质量标准采用薄层扫描法测定苦参碱的含量，为更有效地控制产品质量，本实验采用高效液相色谱法测定苦参碱的含量。

1 仪器与试药

Agilent HP 1100高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；苦参碱标准品，中国药品生物制品检定所（110805-200306）；复方石韦薄膜衣片，承德颈复康药业集团有限公司；甲醇、乙腈，色谱纯；其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Kromasil KR100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：乙腈-0.025M磷酸（1:24）；流速：1ml/min；检测波长：220nm；理论塔板数按苦参碱计算不低于2000。

2.2 供试品溶液的制备 取复方石韦薄膜衣片10片，研细、混匀，精密称取粉末0.5g，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入氯仿40ml，浓氨水0.5ml，浸泡过夜后用脱脂棉滤过，精密吸取续滤液10ml，过中性氧化铝柱（内径1.5cm，内装中性氧化铝8g），用氯仿30ml洗脱，洗脱液40℃水浴蒸干，用甲醇定容至5ml，摇匀，即为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备

2.3.1 对照样品：精密称取苦参碱对照品1.6mg至10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。

2.3.2 阴性对照：称取复方石韦片处方中除去苦参以外的药材，与样品相同工艺制备空白样片，依2.2的方法制备阴性对照液。取阴性对照液，按照2.1色谱条件进行HPLC分析。结果表明，阴性对照液在苦参碱相应的保留时间无吸收峰，因此认为空白无干扰。

2.4 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇定容，分别取上述溶液5μl进样，按2.1色谱条件进行HPLC分析。以苦参碱的峰面积Y为纵坐标，苦参碱的浓度X为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=1.3851+2919.9X，r=0.9999（n=6）。结果表明，苦参碱在16.01μg/ml-320.40μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 对照品的精密度 精密吸取苦参碱对照品溶液5μl，连续进样6次，记录峰面积。结果表明，苦参碱峰面积的RSD为0.37%（n=6），对照品具有良好的精密度。2.6 供试品的精密度 精密吸取复方石韦片供试品溶液5μl，连续进样6次，记录峰面积。结果表明，苦参碱峰面积的RSD为0.40%（n=6），供试品具有良好的精密度。2.7 对照品的稳定性 精密吸取苦参碱对照品溶液5μl，每隔1h进样一次，连续进样8次，记录峰面积。结果表明，苦参碱峰面积的RSD为0.85%（n=8），对照品在8小时内稳定。

2.8 供试品的稳定性 精密吸取复方石韦衣片供试品溶液5μl，每隔1h进样一次，连续进样8次，记录峰面积。结果表明，苦参碱峰面积的RSD为0.76%，供试品在8小时内稳定。

2.9 加样回收率试验 配制浓度为0.1490mg/ml的对照品溶液（精密称取苦参碱对照品14.90mg至100ml容量瓶中，用氯仿溶解定容，摇匀）。精密称取已知含量（每片含苦参碱1.73mg）的复方石韦薄膜衣片粉末9份，每份0.25g；1-3份，每份精密加入对照品溶液8ml；4-6份每份精密加对照品溶液10ml；7-9份，每份精密加入对照品溶液12ml；然后分别精密加入氯仿至40ml、再精密加入浓氨水0.5ml，按2.2的方法制成供试品液，进行HPLC分析，计算回收率。结果表明苦参碱的平均加样回收率为100.64%，RSD为0.87%。

2.10 重复性试验 精密称取同一批复方石韦薄膜衣片粉末9份,1-3份每份0.4g，4-6份每份0.5g，7-9份每份0.6g，按2.2的方法制成供试品液，按2.1色谱条件进行HPLC分析，测定苦参碱峰面积，计算含量，RSD为0.54%。

2.11 苦参碱含量测定 取10批复方石韦薄膜衣片，按2.2的方法制成供试品液，进行HPLC分析，苦参碱含量分别为2.11、2.12、1.95、2.46、2.08、2.30、1.89、2.53、2.23、2.22mg/片，平均含量2.19mg/片，均符合成品质量标准规定（苦参碱含量1mg/片）。

3 讨论

复方石韦片原质量标准中苦参碱的含量测定方法采用薄层扫描法[2]。此方法虽然具有快速、简便的特点，但准确度、精密度不甚理想，测定误差一般在±2-±5%的范围内。薄层扫描法的误差主要由薄层性质及操作方法引起，同时也与扫描定量方法的选择、扫描参数的设定等因素有关。此外，苦参碱薄层扫描法的提取方法较繁琐，薄层色谱斑点与显色剂反应结果的重现性差。高效液相色谱法具有灵敏度高、分离性能好、适用范围广等特点，为更有效地控制产品质量，采用高效液相色谱法替代原薄层色谱扫描法测定复方石韦薄膜衣片中苦参碱的含量。本研究通过提取溶剂、不同流动相的选择，得到了满意的分离效果；通过加样回收率、精密度实验等方法学的考察，表明HPLC测定复方石韦薄膜衣片中苦参碱含量的方法简便易行、结果准确、稳定性好，可用于测定复方石韦薄膜衣片中苦参碱的含量。

[1]李云章.山庄牌复方石韦片[J].中草药，1997，28（3）：190.

[2]董海荣，杨颖.薄层扫描法测定复方石韦片中苦参碱的含量[J].中草药，1999，30（1）：22-23.