毛细管气相色谱法测定盐酸美金刚原料药中三氯甲烷的残留量

宋更申，郭毅，付焱，闫凯（.河北省药品检验所，石家庄市0500；.河北医科大学药学院，石家庄市 05007）

盐酸美金刚（Memantine hydrocloride），化学名称为1-氨基-3，5-二甲基三环癸烷盐酸盐，临床上主要用于治疗帕金森病。盐酸美金刚原料药在合成过程中，使用了乙醇、乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等有机溶剂，前3种有机溶剂均可在氢火焰离子化检测器（FID）上得到良好的灵敏度；而三氯甲烷在上述检测器上灵敏度低，无法准确定量。因为其结构上含有卤原子，选用电子捕获检测器（ECD）后灵敏度可显著提高。人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）[1]和《中国药典》2005年版[2]均规定，三氯甲烷属第二类残留溶剂，限度均为0.006%，属于在药品中应限制残留量的溶剂，控制其残留量对保证药品质量和用药安全有重要意义。本文根据ICH的指导原则和《中国药典》2005年版的相关规定，并参考有关文献[3]，采用ECD，以N，N-二甲基甲酰胺为溶解介质，测定盐酸美金刚中三氯甲烷的残留量。结果表明，本方法简单、准确、灵敏度高、重复性好，可用于盐酸美金刚原料药中三氯甲烷残留量的测定。

1 仪器与试药

6890型气相色谱仪（美国安捷伦公司）；AB304-S型电子天平（瑞士梅特勒公司）。

盐酸美金刚（国内M公司，批号：20060818、20060819、20060820，含量：均为100.0%）；三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-1701毛细管柱（30 m×320 μm×0.25 μm）；柱温：80℃维持5 min，以35℃·min－1的速率升至210℃，维持10 min；分流进样方式，分流比：10∶1，进样口温度：200 ℃；采用ECD，检测器温度：250 ℃；载气：氮气，流速：1.0 mL·min－1；进样量：1µL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液。精密称取三氯甲烷12 mg，置于200 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液。精密量取对照品贮备液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液。精密称取本品约0.5 g，置于5 mL容量瓶

中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适用性试验

照“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，记录色谱。结果，三氯甲烷的理论板数为26 852，N，N-二甲基甲酰胺在ECD上没有响应，不干扰三氯甲烷的测定，详见图1。

2.4 线性关系

分别精密量取“2.2.1”项下的对照品贮备液5、10、5、5、5、1 mL，分别置于5、25、25、50、100、50 mL容量瓶中，均加入N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件测定，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归。结果，线性方程为A＝1 023.59C+898.21（r＝0.999 9），三氯甲烷检测浓度线性范围为1.2～60µg·mL－1。

图1 气相色谱图A.对照品溶液；B.供试品溶液；1.三氯甲烷Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substance solution；B.sample solution；1.chloroform

2.5 精密度试验

2.5.1 日内精密度试验。精密量取“2.2.2”项下的对照品溶液1µL，按“2.1”项下的色谱条件，连续测定6次，计算三氯甲烷的峰面积的RSD＝1.1%。

2.5.2 日间精密度试验。精密量取“2.2.2”项下的对照品溶液1µL，按“2.1”项下的色谱条件，连续3 d分别连续测定6次，计算三氯甲烷的峰面积的RSD＝1.2%。

2.6 重复性试验

精密称取本品（批号：20060818）约0.5 g，置于5 mL容量瓶中，共6份，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件测定，检出本品中三氯甲烷为0.000 4%，RSD＝1.0%。

2.7 回收率试验

精密称取已知三氯甲烷含量的样品（批号：20060818）约0.5 g，置于5 mL容量瓶中，共9份，分别加入“2.2.1”项下的对照品贮备液0.400、0.500、0.600 mL，各3份，再分别用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件测定，按外标法计算，三氯甲烷的平均回收率为99.6%，RSD＝0.8%。

2.8 检测限与定量限试验

采用逐步稀释法测得，以S/N＝2～3时计算三氯甲烷的检测限，以S/N＝10时计算三氯甲烷的定量限，结果检测限为0.32 pg，定量限为1.02 pg。

2.9 样品中三氯甲烷的含量测定

取三氯甲烷和3批样品，按“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，按外标法计算三氯甲烷的残留量，结果3批样品中三氯甲烷的残留量均为0.000 4%。

3 讨论

盐酸美金刚在合成过程中使用的4种有机溶剂中，乙醇、乙醚、乙酸乙酯在FID上有良好的灵敏度，而在ECD上响应很弱；三氯甲烷在ECD上灵敏度高，而在FID上灵敏度很低。这种情况下，很难用1种检测器同时测定上述4种有机溶剂，可以用1根色谱柱分离上述4种溶剂，用FID测定前3种溶剂，用ECD测定三氯甲烷。关于同时测定上述4种溶剂的方法，还有待进一步研究。

三氯甲烷的沸点为61.7℃，N，N-二甲基甲酰胺的沸点为152.8℃，两者相差较大，采用程序升温可以更有效地使两者分离，并缩短分析时间。

本文还采用标准加入法对样品（批号：20060818）的残留溶剂的含量进行验证，结果与外标法一致，表明该方法的基质效应不明显。由于本方法的分离度、精密度、准确度均达到了《中国药典》2005年版的相关要求，故此法适用于盐酸美金刚原料药中三氯甲烷残留量的检测。

[1]周海钧主译.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京：人民卫生出版社，2001：343.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：54～57.

[3]李珂珂，谭丰苹.毛细管气相色谱法测定拉米夫定中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2007，18（19）：1 502.