HPLC法测定妇科泡腾栓中蛇床子素的含量

2010-08-01陈惠红吕建伟廖玉香柳州市中医院药剂科广西柳州54500江西中医学院江西南昌330004

中国药物应用与监测 2010年1期

陈惠红，吕建伟，廖玉香（.柳州市中医院药剂科，广西柳州 54500； .江西中医学院，江西南昌 330004）

妇科泡腾栓是医院传统经验方妇科洗剂改进的制剂，由黄柏、苦参、蛇床子、鱼腥草、野菊花、忍冬藤等中药组成，具有清热燥湿、泻火解毒、杀虫止痒等功效，临床用于治疗妇科各种阴道炎。原制剂质量标准已研究了薄层色谱定性鉴别和黄柏中盐酸小檗碱的含量测定方法[1]，为进一步控制该制剂质量，对方中另一主药蛇床子的主要有效成分蛇床子素进行含量测定研究。目前蛇床子素的含量测定方法有分光光度法[2]、薄层扫描法[3]、气相色谱法[4]和高效液相色谱法[5]等。本文采用高效液相色谱法测定蛇床子素的含量。

1 仪器与试药

LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司），包括SPD-20A紫外检测器、LC-20AT输液泵、LCsolution工作站；AL204电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV-1601紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。

妇科泡腾栓（规格：每粒2.7 g，柳州市中医院制剂室制备）；蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110822-200305）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Shimpack VP-ODS C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相为乙腈-水（60∶40）；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；检测波长为323 nm。理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。

2.2 测定波长选择

取蛇床子素对照品适量，加乙醇使溶解，用紫外分光光度计于200～400 nm范围内扫描，结果表明，蛇床子素对照品在323 nm波长处有最大吸收峰，因此选择323 nm作为测定波长。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1 mL含0.072 mg的溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备取本品10粒，称定重量，切碎，混匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇20 mL，精密称定重量，超声提取15 min，再精密称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，置0 ℃以下放置30 min，取出，微溶后迅速滤取上清液，放至室温，即得。

2.3.3 阴性对照溶液的制备取不含蛇床子的处方药材，按妇科泡腾栓的制备方法制备阴性样品，取阴性样品10粒，照供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液。

2.4 阴性干扰试验

按“2.1”项下的色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL进样测定，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液无干扰，见图1。

图1 典型的高效液相色谱图A-蛇床子素对照品；B-样品；C-阴性对照； 1-蛇床子素Fig 1 Typical HPLC chromatogramsA-reference substance of osthole; B-sample; C-negative control;1-osthole

2.5 线性关系考察

精密吸取对照品溶液0.50，1.00，2.00，4.00，6.00 mL于10 mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20 μL进样，按“2.1”项下的色谱条件，以浓度C（μg·mL-1）为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归分析，得回归方程：A= 84 987C+ 5276，r= 0.999 9，结果表明：蛇床子素在3.6～43.2 μg·mL-1范围内线性关系良好。