HPLC测定“网脱Ⅰ号”口服液中芍药苷的含量

2010-07-30解放军第474医院乌鲁木齐市830013

中国医院用药评价与分析 2010年3期

胡辉，彭燕，李冬(解放军第474医院，乌鲁木齐市 830013)

“网脱Ⅰ号”口服液由党参、当归、白芍等药材提取精制而成，用于缓解、辅助治疗视网膜脱离。方中白芍性味苦、酸、凉，入肝脾二经，有养血敛阴之功效，其主要有效成分之一为芍药苷，因此我们采用高效液相色谱法对芍药苷含量进行测定，为“网脱Ⅰ号”口服液内在质量的控制提供可参考的依据。

1 实验部分

1.1 仪器与药品

7 000高效液相色谱仪(日本日立公司);CQ－250超声波清洗器(上海医用光学器械厂);AA－200电子天平(美国丹佛仪器公司)。“网脱Ⅰ号”口服液(解放军第474医院，批号:081216－1、081216 －2、081216－3、081216－4、081216 －5、081216 －6);芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110736－200731);乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯;水为二次重蒸馏水。

1.2 方法与结果

1.2.1 色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈－1%冰醋酸(10∶90)，检测波长为300 nm，流速为 1.0 mL·min－1，柱温为25℃，进样量20 μL，理论塔板数按芍药苷计不低于2 000。芍药苷对照品、样品与样品阴性对照溶液的HPLC图谱见图1、图2、图3。

图1 芍药苷对照品色谱图Fig 1 Peoniflorin control

图2 样品色谱图Fig 2 Sample

1.2.2 溶液的制备:(1)对照品溶液制备:精密称取适量芍药苷对照品，加甲醇制成60 μg· mL－1的对照品溶液[3]。(2)供试品溶液制备:取口服液1 mL，置25 mL量瓶中，加乙醇定容，超声处理30 min，放冷，摇匀，滤过。滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得供试品溶液。(3)阴性对照溶液制备:取缺少白芍的阴性对照口服液，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。

1.2.3 线性关系考察:精密量取一定量对照品溶液，用甲醇稀释成浓度梯度为 12、24、36、48、60 μg· mL－1的对照品溶液，各进样20 μL，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为:Y=240.20+1.16×105X，r=0.999 96。结果表明，芍药苷浓度在12～60 μg·mL－1与峰面积线性关系良好。

1.2.4 精密度试验:精密吸取20 μL“1.2.2”项的对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，计算。芍药苷峰面积的RSD=0.90%(n=6)，表明精密度良好。

图3 样品阴性对照溶液色谱图Fig 3 Negative sample solution

1.2.5 重复性试验:按“1.2.2”项的方法制备同批号供试品溶液6份，分别进样，记录峰面积，计算。芍药苷峰面积RSD为0.85%(n=6)，表明重复性良好。

1.2.6 稳定性试验:取供试品溶液，于室温下放置，分别在0、2、4、8、12、16、24 h 时进样测定。芍药苷峰面积的 RSD 为1.05%(n=7)，表明供试品溶液中芍药苷在24 h内基本稳定。

1.2.7 加样回收率试验:精密量取已知含量的供试品溶液6份，分别加入1 mL芍药苷对照品溶液，按“1.2.2”项方法制备供试品溶液，依次进样测定，计算回收率。芍药苷平均回收率为99.81%，RSD=1.16%(n=6)，结果见表1。

表1 加样回收率测定结果(n=6)Tab 1 Results of recovery test(n=6)

1.2.8 样品的测定:取6份不同批号样品，按“1.2.2”项下的方法制备供试品溶液，结果见表2。

2 讨论

“网脱Ⅰ号”口服液含十几味中药材，成分复杂，以乙腈－0.01%磷酸溶液(13:87)，检测波长为230 nm[1];乙腈－0.2 mol·L－1磷酸(18∶82)，检测波长 230 nm[2];甲醇－0.5%醋酸(28:72)，检测波长230 nm[3]等流动相体系进行试验，口服液中的其他组分与芍药苷不能有效分离选择合适波长时，在200～400 nm之间扫描，发现200～280 nm之间在8～16 min这段时间干扰峰众多，无法明确识别芍药苷峰。采用流动相为乙腈－1%冰醋酸(10∶90)，检测波长为300 nm，芍药苷与其他组分可完全分离，达到较佳的结果。通过实验，确定了HPLC测定“网脱Ⅰ号”口服液中芍药苷含量的方法。该法简便快捷，测定结果稳定可靠，且重现性好，可作为“网脱Ⅰ号”口服液质量控制指标。