血管紧张素原基因M235T多态性和抑郁症的关联分析

王 佳 谢 健 陈岳明

血管紧张素原基因M235T多态性和抑郁症的关联分析

王 佳 谢 健 陈岳明

抑郁症的病因和发病机制复杂，至今尚未明确。在肾素-血管紧张素系统(RAS）中，文献［1］报道血管紧张素原(ATG）M235T基因多态性和抑郁症无明显相关。基因多态性因种族不同而会产生明显差异。本研究采用病例-对照研究来探讨中国汉族人ATG基因M235T多态性和抑郁症是否关联。

1 对象与方法

1.1 研究对象

1.1.1 患者组 共150例，为杭州市第一人民医院、浙江省立同德医院、湖州市第三人民医院2008年12月-2009年10月门诊及住院患者。入组标准：①符合美国精神疾病诊断与统计手册第4版抑郁发作的诊断标准；②汉密尔顿抑郁量表(24项）评分≥21分；③无其他精神疾病、无神经系统和躯体疾病。150例患者中男性64例，女性86例，年龄(37±12）岁，病程1～5年。

1.1.2 对照组 选择和患者年龄、性别相当的健康体检者共180名，无精神疾病家族史且均排除精神、神经疾病及其他重大躯体疾病。180名对照中男性75名，女性105名，年龄(36±13）岁。

两组性别、年龄差异均无统计学意义(均P＞0.05）。研究对象均对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 基因组DNA提取 抽取患者和健康体检者外周静脉血各2 ml，用EDTA-K3抗凝，用于提取基因组DNA。采用全血基因组DNA提取试剂盒(北京天根生物技术有限公司）进行操作，提取后-80℃保存备用。

1.2.2 ATG基因M235T多态性检测 采用PCR-RFLP法［2］。

PCR扩增引物按如下序列合成。正向：5'-GAT GCG CAC AAG GTC CTG TC-3'，反向：5'-GGT GCT GTC CAC ACT GGA CCC C-3'(上海生物工程有限公司合成）。PCR扩增体系共25 μl(试剂购于TaKaRa生物工程有限公司）：灭菌去离子水18.75 μl，10×PCR缓冲液2.5 μl，dNTP混合物(2.5mM）2 μl，上、下游引物(50 nM）各0.25 μl，基因组DNA 1.0 μl(含量200～500 ng），TaqDNA聚合酶(5U/μl）0.25 μl。PCR扩增条件：95℃3 min；94℃45 s，71℃30 s，72℃45 s，40个循环；72℃10 min。扩增片段长度预期303 bp。取5 μl扩增产物在含溴化乙锭(EB）的2%琼脂糖凝胶进行电泳，通过凝胶成像仪观察结果。

取PCR产物15 μl，加2 μl酶切缓冲液，用10 U限制性内切酶PsyⅠ(购于TaKaRa生物工程有限公司）37℃消化过夜。终止反应后，产物经含EB的5%琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像仪下判断结果。根据酶切产生片段情况，基因型有3种：MM(303 bp）、TT(279 bp和24 bp）和MT(303 bp，279 bp和24 bp）。

1.3 统计方法

Hardy–Weinberg平衡吻合度采用卡方检验。患者组和对照组间性别、年龄以及基因型和等位基因频率比较采用2×2表χ2检验。统计学分析均以α=0.05为水准进行双侧检验，以P＜0.05为统计学意义。

2 结果

AGT基因M235T基因型和等位基因频率在两组中的分布情况见表1，其分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.146，P＞0.05）。基因型和等位基因频率在两组间的分布均无统计学差异。

3 讨论

AGT基因组DNA全长12 kb，包括5个外显子和4个内含子。AGT基因的某些突变可以直接影响AGT水平，进而影响血管紧张素Ⅱ(AngⅡ）的生成［3］。AngⅡ与抑郁、焦虑和认知功能有着密切的关系，并可能参与情感障碍和老年性痴呆的病理生理过程［4］。

表1 AGT基因M235T基因型和等位基因频率在健康对照和抑郁症患者中的分布 n（%）

本研究为了避免基因多态性检测可能由于不同种族和地域的差异而导致的偏差，选择的研究对象均为浙江地区汉族。研究结果显示AGT M235T基因型和等位基因频率在健康人群中分布与蔡思宇等［5］报道的结果相近，然而AGT M235T多态性和抑郁症未显示出关联，这和国外研究［1］结论一致。由于在AngⅡ形成过程中，血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE）起到关键的限速酶作用。因此我们推测，与AGT M235T基因多态性相比ACE基因多态性可能和高水平AngⅡ更为相关。

尽管本研究结果提示AGT M235T基因多态性可能与抑郁症无关，但有研究［6］表明其与男性抑郁症状有关。因此，我们还需进一步收集临床资料，分析AGT M235T基因多态性与抑郁症状以及药物疗效之间的关系。

1 Saab YB，Gard PR，Yeoman MS，et al.Renin-angiotensin-system gene polymorphisms and depression.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2007，31(5）：1113-1118.

2 Jenkins LD，Powers RW，Cooper M，et al.Preeclampsia risk and angiotensinogen polymorphisms M235T and-217 in African American and Caucasian women.Reprod Sci，2008，15(7）：696-701.

3 Miller JA，Scholey JW.The impact of renin-angiotensin system polymorphisms on physiological and pathophysiological processes in humans.Curr Opin Nephrol Hypertens，2004，13(1）：101-106.

4 Gard PR.Angiotensin as a target for the treatment of Alzheimer's disease，anxiety and depression.Expert Opin Ther Targets，2004，8(1）：7-14.

5 蔡思宇，徐耕，施育平，等.血管紧张素转换酶及血管紧张素原基因多态性与高血压左室肥厚的相关研究.中华急诊医学杂志，2005，14(4）：323-327.

6 López-León S，Janssens AC，Tiemeier H，et al.Angiotensinogen M235T polymorphism and symptoms of depression in a populationbased study and a family-based study.Psychiatr Genet，2008，18 (4）：162-166.

2010-01-12）

(本文编辑：武春艳）

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