活血化瘀膏对小鼠臀部急性软组织损伤抗炎作用的研究*

王 平，戚天臣

（1.天津中医药大学第一附属医院骨伤科，天津 300193；2.天津中医药大学，天津 300193）

急性软组织损伤是骨伤科临床常见病、多发病，属于中医“筋伤”的范畴。活血化瘀膏为本院院内制剂，临床用于治疗各种软组织损伤，通过长期的临床观察，活血化瘀膏具有明显的活血化瘀、消肿止痛及抗炎作用，实验用于观察活血化瘀膏对急性软组织损伤的抗炎作用及相关机制研究。

1 实验材料

1.1 实验动物 选用昆明种（SPF级）小鼠45只（由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供），体质量25～30 g，雌雄兼用，分笼饲养，自然光照，自由饮水，实验前适应性喂养1周。

1.2 实验药物 活血化瘀膏：本院院内制剂（津药制字（2003）Z第0815号），主要成份为乳香（醋炙）、没药（醋炙）、透骨草、细辛、伸筋草、红花等；扶他林乳胶剂（北京诺华制药有限公司生产，国药准字：H19990291）

2 实验模型建立

采用文献报道[1]改良自制软组织损伤打击器(打击锤法码50 g)，小鼠左侧臀部剃毛，侧卧式固定于软组织打击器平台上，将打击锤拉至5 cm高度松开，自由落下，连续打击5下，每只动物只打击左侧臀部。采用随机数字表法将45只小鼠分为空白对照组（A组），扶他林对照组（B组）和活血化瘀膏治疗组（C组），每组各15只。造模后A组不做处理，B组外用扶他林乳胶剂（扶他林1 g/kg），C组外敷活血化瘀膏（活血化瘀膏1 g/kg），B、C组均在损伤处1 cm2外用药物，并用特制胶布固定、包扎。每天换药1次，共给药6 d。

3 实验方法

3.1 损伤证候指数[2]自造模后每天观察伤处肿胀和瘀斑等证候表现，并分级评分并记录。1）皮下瘀血：多量块状计2分，少量点状计1分，无瘀血者计0分。2）肌肉肿胀：明显肿胀计2分，稍有肿胀计1分，无肿胀者计0分。3）肌肉颜色：紫暗色深计2分，暗红色浅计1分，色泽正常计0分。

3.2 组织形态学检查 造模后第1天开始治疗，分别在第2天，第4天，第6天，每组各取5只小鼠，处死后取材，常规石蜡包埋切片，分别作苏木精-伊红（HE）染色，磷钨酸苏木素染色，醛复红橙黄G法染色。光镜观察：1）创伤局部皮下组织、肌肉组织和创伤性无菌性炎症反应等病理表现。2）创伤病灶中嗜中性粒细胞，肥大细胞分类、计数及脱颗粒率评定。

3.3 统计方法 使用SPSS 11.5软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为有显著性差异。

4 实验结果

4.1 活血化瘀膏对软组织损伤模型小鼠损伤证候指数的影响 见表1。造模后小鼠伤处迅速出现肿胀、皮肤瘀斑及皮下出血现象，伤后24 h最明显，随后逐渐减轻，至第5天肿胀基本消退，局部残留皮肤瘀斑。C组与B组比较，伤处肿胀程度低，消退速度快，在伤后第3天已见明显消退，瘀斑的消散情况C组亦优于B组。损伤证候指数评分（见表1）C组低于B组；C组与A组相比第1～6天均有显著性差异（P＜0.05），B组与A组相比也有显著性差异；但C组在第 3天以后明显优于 B 组（P＜0.05）。

表1 不同观察时间（d）的损伤证候指数(±s)Tab.1 The injury symptom index at different time points(d)(±s)

表1 不同观察时间（d）的损伤证候指数(±s)Tab.1 The injury symptom index at different time points(d)(±s)

注：B、C组与A组比，*P<0.05；C组与B组比，△P<0.05。

组别A组B组C组1 d 5.87±0.355.47±0.52*5.20±0.41*2 d 5.20±0.564.67±0.49*4.53±0.52*3 d 4.70±0.483.60±0.52*3.10±0.57*△4 d 4.10±0.582.70±0.48*2.00±0.47*△5 d 3.20±0.452.00±0.71*1.20±0.45*△6 d 2.60±0.551.60±0.55*0.80±0.45*△

4.2 组织学观察结果 伤后第2天，A组有局部皮下组织水肿，出血以及中性粒细胞浸润较高，可见单核细胞浸润，被损伤横纹肌纤维肿胀明显，部分可见肌纤维变性坏死。B、C组与A组比较，可见真皮和皮下组织水肿减轻，中性粒细胞和嗜酸粒细胞的密度减低，单核细胞数量增多，可见纤维母细胞增生。伤后第4天，A组局部皮下组织水肿减轻，嗜中性粒细胞浸润密度降低，单核细胞较多，胶原纤维增生，毛细血管增生（见图1）。B组、C组与A组比较，可见皮下组织水肿以及肌纤维肿胀明显减退，中性粒细胞和嗜酸粒细胞少见，胶原纤维增生，肉芽组织开始形成纤维结缔组织。伤后第6天，A组皮下水肿基本消失，可见皮下毛细血管增生，在血管内及血管周围可见少量炎性细胞，纤维结缔组织增生较明显，有部分纤维结缔组织形成。B组、C组基本恢复正常，但C组纤维结缔组织形成较B组少。

图1 小鼠软组织损伤后第4天局部组织病理学改变Fig.1 The histopathologic change of soft tissue injury on the fourth day in mice

4.3 肥大细胞脱颗粒率评定结果 见表2。创伤后，局部组织中肥大细胞脱颗粒率增高。C组、B组与A组比较在伤后第2天开始即有显著性差异（P＜0.01），C 组与 B组比较无明显差异（P＞0.05）。

表2 不同时间肥大细胞脱颗粒率比较(±s)Tab.2 Comparison of the degranulation in the mast cells at different time points(±s)%

表2 不同时间肥大细胞脱颗粒率比较(±s)Tab.2 Comparison of the degranulation in the mast cells at different time points(±s)%

注：B、C 组与 A 组比，*P<0.01；C 组与 B 组比，＃P>0.05。

组别A组B组C组2 d 49.25±7.5931.07±9.35*30.44±8.27*＃4 d 43.07±9.0526.46±9.29*27.66±9.84*＃6 d 40.35±7.1322.95±6.40*22.64±6.63*＃

5 讨论

活血化瘀膏具有活血化瘀、消肿止痛的功效，其中乳香为伤科要药，既能活血行气止痛，又能消肿生肌，没药同具此功效，但乳香偏于行气、伸筋，而没药善于散血化瘀，两者合用能增强行气活血止痛之功；红花具有活血通经，祛瘀止痛的作用，而伸筋草具有舒筋活络之功效，据现代药理学研究，细辛挥发油、水及醇提取物具有解热、抗炎之功，故其有止痛之效，故而活血化瘀膏综合各药之功效，有利于急性软组织修复。

从实验结果可以看出，B组、C组的皮下水肿，肌肉肿胀较A组消退明显（P<0.05），C组在第3天以后损伤症候指数的改善明显优于B组 (P<0.05)。从病理片上可以明显地看出，活血化瘀膏组早期肥大细胞脱颗粒率较低，与空白组比较，差异有统计学意义（P<0.05），局部炎症水肿消散迅速，提示局部炎症反应被抑制，后期局部可见小血管增多、普遍扩张充血、结缔组织形成较少、横纹肌纤维再生等，而肥大细胞脱颗粒率则反映了局部组织创伤和炎症反应的程度。通过本实验研究，可以看出活血化瘀膏具有明显的消除创伤性无菌性炎症反应和消除局部水肿的作用，减轻细胞组织缺氧，减少嗜中性粒细胞、肥大细胞的损害，并减少白细胞的炎性渗出，达到促进组织修复的目的[3]。故活血化瘀膏具有改变急性软组织损伤证候作用，对于急性软组织损伤具有抗炎作用，从而为活血化瘀膏的临床应用提供了理论依据。

[1] 周国林,姚全胜,潘玉英.一种动物软组织损伤的实验方法[J].中国药理学通报,1991,7(5):396-398.

[2] 何朝勇,李 楠,陈丽华，等.奇正消痛贴治疗急性软组织损伤实验研究[J].中医正骨,2008,20(11):9-12.

[3] 张爱平,林燕萍,王和鸣，等.纳米相陶瓷远红外线治疗急性软组织损伤动物模型实验研究[J].福建中医学院学报,2001,11(1):20-21.