经前三剂止痛方治疗实验性痛经模型大鼠作用机制研究*

方 玲 ，朱新冰 ，尹 菊 ，郭 虹 ，高 岚 ，张艳军

（1.天津中医药大学中药学院，天津市中药药理重点实验室，天津 300193；2.天津市中心妇产科医院，天津 300193）

原发性痛经（PD）是一种多病因疾病，常表现为月经前及行经期间，下腹及腰部痉挛性疼痛，严重时伴有恶心、呕吐、肢冷，尤其多见于未婚青年女性。中医药在治疗和预防痛经方面得到了越来越广泛的认可。经前三剂止痛方（JQF）是临床上治疗PD的有效方药，连续服用3个月经周期，每个月经期之前服用3剂，临床原发性痛经治愈率可达96%。子宫内膜合成和释放前列腺素增加，是原发性痛经的重要原因，本研究系统考察了JQF对实验性痛经模型大鼠子宫前列腺素和激素水平的影响，探讨其治疗痛经的作用机制，为临床上更好地使用该方提供实验依据，并为进一步研发奠定基础。

1 实验材料

1.1 实验动物 健康SD大白鼠，雌性，30只未孕，体质量180～220 g，由中国医学科学院放射医学研究所动物室提供（合格证号：SCXK（京）2007－0001）。天津中医药大学实验动物中心二级动物实验室条件下饲养。

1.2 药物与试剂 经前三剂止痛方（JQF）制剂由天津中医药大学中药制剂实验室制备（2100 g生药材得浸膏干粉520 g，其出膏率为24.7%，本文所指中药给药均为浸膏干粉，灌胃给药时用生理盐水溶解）；苯甲酸雌二醇注射液，天津金耀氨基酸有限公司生产，批号0701041；缩宫素注射液，蚌埠市宏业生化制药厂生产，批号070310；阿司匹林片，广东百澳药业有限公司生产，批号20070501；大鼠前列腺素 F2α（PGF2α）酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒，购自上海西唐生物科技有限公司。6-酮-前列腺素1α（6-keto-PGF1α）、血栓素B2（TXB2）放免药盒和雌激素（E2）、孕激素（P）试剂盒，天津市南开医院同位素室提供。前列腺素E2（PGE2）放免试剂盒盒，购自北京总医院科技开发中心放免所。

1.3 仪器 DL28R冷冻离心机(上海离心机械研究所）；FlexStation3多功能微孔分析仪（美国Molecular Devices）；XH6020r免疫计数器（西安262厂）。

2 实验方法

2.1 模型复制与分组给药 采用注射雌二醇和催产素的方法复制大鼠痛经模型，连续10 d给大鼠皮下注射雌二醇[第1、10天皮下注给0.5 mg/（只·d），余日均为0.2 mg/（只·d）]，间隔40 h后，腹腔注射催产素2 U/只。将30只大鼠分为正常对照组、模型组、JQF高剂量组、JQF低剂量组、阿司匹林对照组，每组各6只。JQF低剂量组、JQF高剂量组每天每只大鼠分别灌胃给予JQF浸膏干粉2 kg/L，阿司匹林对照组每天每只大鼠灌胃给予阿司匹林片5 g/L，正常对照组、模型组每天灌胃等体积生理盐水，各组均连续灌胃10 d。

2.2 子宫组织 PGF2α、PGE2、TXB2、6-keto-PGF1α含量测定 复制大鼠痛经模型并给予药物干预后，取各组动物同侧同位段新鲜子宫0.25 g，用生理盐水冲洗1～2次，置微型匀浆器中匀浆，匀浆物加入子宫重 10 倍量的无水乙醇：氯化钾溶液（1∶9），3500r/min离心20 min，取上清液,用ELISA法测定PGF2α；放免法测定 PGE2、6-keto-PGF1α、TXB2含量。

2.3 JQF对模型大鼠子宫组织雌激素、孕激素水平的影响 取子宫匀浆物上清液，放免法测定E2、P含量。

2.4 统计学方法 应用SPSS 11.5统计软件进行数据处理，实验数据以均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析，方差齐时组间两两比较样用LSD方法，方差不齐时组间两两比较用Dunnett T3法。P<0.05为有统计学差异。

3 实验结果

3.1 JQF对痛经模型大鼠子宫组织PGF2α、PGE2含量及比值变化的影响 子宫内膜合成和释放前列腺素增加，是原发性痛经的重要原因，本研究检测了JQF对痛经模型大鼠子宫中前列腺素的影响。结果表明，模型组大鼠子宫组织PGF2α含量明显高于正常对照组。与模型组比较，阿司匹林阳性对照组子宫组织PGF2α含量可明显降低，JQF不同剂量均可不同程度的降低子宫组织 PGF2α水平（P＜0.05 或 P＜0.01），其中JQF高剂量组与正常对照组比较无统计学差异；模型组大鼠子宫组织中PGE2含量与正常对照组比较明显降低（P<0.01）；与模型组比较，大鼠子宫组织中PGE2含量JQF高剂量组、阿司匹林阳性对照组均明显升高（P＜0.05），结果见表 1。

表1 各组动物子宫组织中PGF2α、PGE2含量比较(±s)Tab.1 Comparison of PGF2α and PGE2 in the rats of each group(±s)μg/L

表1 各组动物子宫组织中PGF2α、PGE2含量比较(±s)Tab.1 Comparison of PGF2α and PGE2 in the rats of each group(±s)μg/L

注：与正常对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P<0.01。

组别正常对照组模型对照组JQF低剂量组JQF高剂量组阿司匹林组n66666 PGF2α 209.65±77.51802.79±153.69**505.65±98.02##221.42±140.67##488.78±134.22##PGE2 801.12±111.32594.88±137.15**619.65±187.78810.35±208.62#875.62±244.11#PGF2α/PGE2 0.27±0.111.50±0.56**0.99±0.390.27±0.16##0.59±0.12##

3.2 JQF对痛经模型大鼠子宫TXB2、6-keto-PGF1α含量及比值变化的影响 本研究考察了JQF对痛经模型大鼠子宫6-keto-PGF1α、TXB2含量的影响。结果表明，模型组与对照组比较，TXB2显著升高（P<0.05），结果具有统计学差异。与模型组比较，用药各组TXB2水平显著降低（P<0.01或P<0.05）、6-keto-PGF1α水平 JQF 高剂量组升高 （P＜0.05），JQF低剂量组无统计学差异。用药各组T/K比值较模型组高剂量组显著降低（P＜0.01）、西药组有所降低（P＜0.05）。见表 2。

表2 各组动物子宫组织中TXB2、6-keto-PGF1α含量比较±s)Tab.2 Comparison of TXB2 and 6-keto-PGF1α in the rats of each group(±s)μg/L

表2 各组动物子宫组织中TXB2、6-keto-PGF1α含量比较±s)Tab.2 Comparison of TXB2 and 6-keto-PGF1α in the rats of each group(±s)μg/L

注：与正常对照组比较，*P<0.05,**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05,##P<0.01。

组别正常对照组模型对照组JQF低剂量组JQF高剂量组阿司匹林组n66666 TXB2 542.73±53.01722.42±90.54*582.63±64.11#520.87±66.27#398.18±25.38##6-keto-PGF1α 914.81±100.641023.63±75.551018.74±59.791288.60±207.00#779.40±65.30##TXB2/6-keto-PGF1α 0.55±0.080.67±0.090.57±0.050.40±0.08##0.52±0.04#

3.3 JQF对痛经模型大鼠子宫雌激素、孕激素水平的影响 本研究考察了JQF对痛经模型大鼠子宫匀浆组织雌激素和孕激素含量的影响。结果表明，与对照组比较，模型组雌激素水平显著升高（P<0.01），孕激素水平降低（P<0.05），结果具有统计学差异。与模型组比较，西药组雌激素水平降低（P<0.05），孕激素水平升高（P<0.05）。JQF低剂量组、JQF高剂量组均可显著降低模型大鼠雌激素水平（P<0.01），JQF高剂量组可升高模型大鼠孕激素水平（P<0.05）。结果见表3。

表3 JQF对痛经模型大鼠子宫雌激素、孕激素水平的影响(±s)Tab.3 The effects of JQF on estrin and progestogen in the rats with dysmenorrhea μg/L

表3 JQF对痛经模型大鼠子宫雌激素、孕激素水平的影响(±s)Tab.3 The effects of JQF on estrin and progestogen in the rats with dysmenorrhea μg/L

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较 ＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

组别正常对照组模型对照组JQF低剂量组JQF高剂量组阿司匹林组n66666 E2P 19.07±3.3238.75±10.57**25.82±3.23##23.63±3.09##25.72±4.70#20.69±4.8710.44±5.37*15.54±9.1420.11±7.52#21.59±8.78#

4 讨论

女性内分泌失调引起的痛经是当今世界医学尚未攻克的难题之一。据英国一家医学权威机构调查报告指出，全球女性中80%有不同程度的痛经。JQF为自拟方，方中以当归、川芎、赤芍、益母草为主要组成，是临床治疗原发性痛经的有效方药，只需月经前使用3 d，本次月经无疼痛，连续使用3个月即可停药，均获满意疗效，因此，有必要对其药效机制进行深入探讨。现代医学普遍认为，原发性痛经发生的主要原因是由于神经内分泌失调引起的子宫张力增加和过度痉挛性收缩，激素水平失调、催产素、加压素以及某些自主神经系统递质如内皮素等与痛经的发病直接相关[1-2]。

大量研究表明，痛经患者血中 PGF2α含量及PGF2α/PGE2比值增高是造成痛经的直接原因[3-4]，降低PGF2α水平可在一定程度上缓解疼痛。子宫内膜细胞是合成PGs的功能细胞和靶细胞[5]，在激素和某些介质的特定作用下，产生各种不同的前列腺素物质，调节子宫肌细胞的收缩和舒张。子宫合成和释放前列腺素的增加是原发性痛经的重要原因，尤其是PGF2α增高，PGF2下降时会导致两者比值过度升高。PGF2α作用于螺旋小动脉壁上的PGF2α受体，引起子宫过度收缩，子宫血流不足，子宫肌肉组织缺血，刺激子宫自主神经疼痛纤维而发生痛经。本研究结果表明，JQF均可显著降低实验性大鼠子宫组织的PGF2α的含量以及PGF2α/PGE2比值，可能是其治疗痛经作用的重要机制之一。

正常情况下，血栓素（TXA2）、前列腺环素（PGI2），TXA2/PGI2处于平衡状态，维持适当的血管张力及血小板内环境稳定，TXA2/PGI2失衡将引起血小板与血管壁相互作用即痛经患者存在异常激活的高凝状态，引发血管痉挛、血栓形成、缺血等,导致痛经的发生和加重[6]。由于TXA2、PGI2在体内极不稳定，短时间内水解成稳定的TXB2和6-Keto-PGF1α，所以检测TXB2、6-Keto-PGF1α的含量即可反映TXA2、PGI2的水平。本研究结果表明，JQF可显著降低痛经大鼠子宫组织的TXB2和升高6-Keto-PGF1α含量，调节两者的比例，使其达到适宜的有效浓度，以抑制血小板聚集和血栓形成，改善子宫微循环，恢复子宫平滑肌的正常舒缩状态，是治疗痛经病证的有效方剂。

参与调节月经的卵巢激素主要是雌激素和孕激素，卵巢激素的不平衡可影响前列腺素合成与释放，PGF2α可刺激子宫平滑肌收缩，PGE能抑制子宫收缩。E2水平升高，可以刺激PGF2α的合成、释放，从而使子宫血管收缩，子宫缺血而发生痛经。高孕酮水平可抑制产生PGF2α则不使发生痛经。JQF能够降低大鼠子宫中E2的水平，提高P的水平，起到抑制子宫平滑肌过度收缩的作用；从生理学角度看，β-EP（内源性阿片肽）具有内源性镇痛作用，子宫是β-EP的靶器官。β-EP受性激素制约，孕酮能显著提高β-EP的分泌，而雌二醇却抑制孕酮对β-EP的作用，JQF能够降低大鼠子宫中E2的含量，增加P的含量，从而可能提高β-EP的分泌，起到治疗痛经的作用；血液中血管加压素水平的增高是原发性痛经发生的重要因素[7]，雌激素能刺激垂体后叶释放血管加压素，此作用可被孕激素抵消。原发性痛经妇女晚黄体期雌激素水平异常升高，在月经期第1天血管加压素水平高于正常人2～5倍，造成子宫过度收缩及缺血。JQF能够降低大鼠子宫中E2的含量，增加P的含量，可能降低血管加压素水平，缓解子宫过度收缩及缺血起到治疗痛经的作用；青春期痛经多发，与体内雌激素/孕激素的比值升高有关，体内雌激素过多或相对过多，致使体内水钠潴留，局部出现水肿也是痛经发生的原因之一。

综上所述，JQF抗痛经作用并非是某方面单一作用的结果，而是多方面共同作用的综合效应。抑制子宫 PGF2α的产生，降低 PGF2α/PGE2比值，稳定实验性大鼠子宫组织TXB2/6-Keto-PGF1α比值，缓解缩宫反应以及对大鼠体内性激素（E2、P）的调节等均为JQF治疗痛经的药理学基础。

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