槲皮素对 IN H诱导的大鼠肝脏氧化损伤的影响

卢春凤,陈廷玉,王丽敏,白 雪,商 宇,王淑湘,谭 宏

(佳木斯大学基础医学院,黑龙江 佳木斯 154007)

异烟肼(Isoniazid,IN H)是常用的抗结核治疗一线药物[1],因其具有明显的肝毒性[2,3],故严重限制了它的临床应用。为此,从中草药中寻找安全有效的保护肝损伤药物,显然具有重要的现实意义。槲皮素(Quercetin)是广泛存在于植物中的类黄酮化合物,具有较强的抗氧化、清除自由基、抗炎、抗肝纤维化、抗肿瘤等作用[4～7]。本实验室前期研究已观察到槲皮素对 INH所致肝损伤有明确的保护作用,本研究将在以往工作的基础上进一步研究槲皮素对 IN H诱导的肝脏氧化损伤的影响,探讨其对IN H致肝损伤的保护作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康 SD大鼠40只,雌雄各半,体重(180～ 200)g,由佳木斯大学实验动物中心提供 ,动物合格证号:SYXK(黑)2006-004。

1.2 药品与试剂

异烟肼购自西南药业有限公司;槲皮素购自北京华美生科生物技术有限公司。2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,TBA)、福林酚试剂、四乙氧基丙烷 (1,1,3,3-tetraethoxypropane,TEP)购自 Sigma公司;谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 动物分组及处理

动物经适应性饲养7 d后,按体重随机分为正常对照组(给予等体积生理盐水)、IN H组(100mg/kg)、槲皮素低剂量组(槲皮素 50mg/kg+INH100mg/kg)和槲皮素高剂量组(槲皮素 100mg/kg+ IN H 100mg/kg),每组10只 ,每天灌胃 1次,连续 14d。动物自由摄食饮水,饲养室光照 12h,黑暗 12h,室温 (22± 2)°C,相对湿度 (50± 10)% 。

1.3.2 观察指标与方法

实验过程中观察大鼠饮食、活动、皮毛及体重变化等一般状况。连续用药14d,末次给药后禁食过夜,将大鼠麻醉,股静脉取血,分离红细胞,制备红细胞悬液。剖开腹腔取适量肝脏立即置于液氮中冻存,于测试前取出,制备 10%组织匀浆。采用 TBA法测定血和肝组织中脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,M DA)含量;采用 DTNB直接法测定血和肝组织中 GSH-Px活性;采用黄嘌呤氧化酶法测定血和肝组织中 SOD活性。肝组织匀浆中蛋白含量采用Lowry’s法测定。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 各组大鼠一般状况

与正常对照组比较,IN H损伤组在用药后有不同程度的精神萎靡,活动迟缓,毛发蓬乱,体重减少等;槲皮素各剂量组大鼠的一般状况明显优于 IN H损伤组,但较正常对照组稍差。

2.2 槲皮素对大鼠血中 M DA含量和 SOD、GSH-Px活性的影响

与正常对照组比较,IN H损伤组M DA的含量显著增高(P ＜ 0.01),而 SOD和 GSH- Px活性显著下降(P ＜0.01)。与 IN H损伤组比较,高剂量槲皮素能使 MDA含量显著下降 (P＜0.01),而使SOD和 GSH-Px活性明显增高 (P ＜ 0.05),见表1。

表1 槲皮素对大鼠血中 MDA含量和 SOD、GSH-Px活性的影响 ±s,n=10)

表1 槲皮素对大鼠血中 MDA含量和 SOD、GSH-Px活性的影响 ±s,n=10)

注:与正常对照组比较:**P＜0.01;与IN H损伤组比较:ΔP＜0.05,Δ Δ P＜0.01。

2.3 槲皮素对大鼠肝组织中 MDA含量和 SOD、GSH-Px活性的影响

与正常对照组比较,IN H损伤组M DA的含量明显升高(P ＜ 0.01),而 SOD和 GSH- Px活性明显降低(P ＜0.01)。与 IN H损伤组比较,高剂量槲皮素能使 MDA含量降低 (P＜0.05),并使 SOD和 GSH-Px活性明显升高(P ＜ 0.05),见表2。

表2 槲皮素对大鼠肝组织中 M DA含量和SOD、GSH-Px活性的影响 ±s,n=10)

表2 槲皮素对大鼠肝组织中 M DA含量和SOD、GSH-Px活性的影响 ±s,n=10)

注:与正常对照组比较:** P＜0.01;与 IN H损伤组比较:ΔP ＜0.05。

3 讨论

IN H在肝脏中可被代谢为乙酰肼,其代谢物具有脂质过氧化作用,可使细胞膜及线粒体膜发生脂质过氧化反应,引起肝脏损伤[8]。MDA是脂质过氧化反应的产物之一,通过测定其在血与肝组织中的含量,可反映机体和肝脏发生脂质过氧化反应的情况,间接反映出肝脏毒性损伤程度。 SOD和GSH-Px是机体内重要的抗氧化酶,对机体氧化系统与抗氧化系统平衡起着至关重要的作用,测定血和肝组织中 SOD和 GSH-Px活性变化在一定程度上可间接反映机体抗氧化的能力。本实验中,INH损伤组大鼠血和肝组织中MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低 ,表明IN H可造成大鼠肝脏氧化损伤。

槲皮素属类黄酮化合物中的黄酮醇,富含酚羟基,对各种自由基 (超氧阴离子、羟自由基等)有直接清除作用。研究表明,槲皮素在体外可通过直接清除各种活性氧自由基、抑制 DNA氧化损伤、鳌合金属离子等发挥明显的抗氧化作用。此外,Lee等研究发现槲皮素能明显抑制 DMN导致大鼠血清 ALT和 AST活性的升高,增加血清 GSH含量,并能明显降低肝组织中M DA水平,表明槲皮素对 DMN诱导的肝氧化损伤具有保护作用。Molina等也证实槲皮素可通过降低M DA水平、增加 GSH含量及提高 SOD和 GSH-Px等抗氧化酶活性来预防小鼠酒精性肝氧化损伤。在本研究中,槲皮素可使大鼠血和肝组织中 MDA含量明显降低,SOD和 GSH-Px的活性明显增高,提示槲皮素可以通过提高机体抗氧化酶的活性来拮抗INH引起的肝脏氧化损伤。表明槲皮素能够明显提高大鼠抗氧化系统的功能,从而抑制 IN H所致大鼠肝脏脂质过氧化反应,发挥肝脏保护作用。

[1] Ayles H and M uyoyeta M.Isoniazid to prevent first and recurrent episodes of TB[J].Trop Doct,2006,36:83-86

[2] Fernandez-Villar A,Leiro V,Botana M,et al.Hepatitis C Virus Infection and Isoniazid Hepatotoxicity[J].Chest,2007,132:736-737

[3] Menzies D,Long R,Trajman A,et al.Adverse Events with 4 Months of Rifampin Therapy or 9 Months of Isoniazid Therapy for Latent Tuberculosis Infection: A Randomized Trial[J].Ann Intern M ed,2008,149(10):689-697

[4] Lee JC,Kim J,Park JK,et al.The antioxidant,rather than prooxidant,activities of quercetin on normal cells: quercetin protects mouse thymocy tes from glucose oxidase- mediated apoptosis[J].Exp Cell Res,2003,291(2):386-397

[5] 卢春凤,陈廷玉,王淑秋,等.桷皮素抑制离体大鼠肝星状细胞增殖[J].中国病理生理杂志,2005,21(6):1154-1166

[6] Lopez- Revuelta A, Sanchez- GallegoJI, Hernandez-Hernandez A,et al.Membrane cholesterol contents influence the pro tective effects of quercetin and rutin in erythrocytes damaged by oxidative stress[J].Chem Biol Interact,2006,161(1):79-91

[7] Egert S,Wolffram S,Bosy-Westphal A,et al.Daily Quercetin Supplementation Dose-Dependently Increases Plasma Quercetin Concentrations in Healthy Humans[J].J Nutr,2008,138(9):1615-1621

[8] Walubo A,Smith P,and Folb PI.The role of oxygen free radicals in isoniazid-induced hepatotoxicity[J].Methods Find Exp Clin Pharmacol,1998,20(8):649-655