157例深部真菌感染和药敏结果分析

马凤莲,杨铁生

(北京大学人民医院检验科,北京100044)

近年来,随着广谱抗生素、免疫抑制剂的应用以及器官移植和各种侵入性诊疗技术的开展和一些严重疾病,如糖尿病、肿瘤、艾滋病等发病率的不断升高,条件治病性真菌感染日益增多[1]。加强深部真菌感染的控制及耐药检测,有效防治深部真菌感染及提高治愈率已成为目前医学领域中的重要问题。为了解我院深部真菌的分布及耐药情况,本文对我院2009年上半年分离的157例深部真菌进行分析。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来源 我院2009年1月至6月住院患者发生深部真菌感染的真菌菌侏157株(去除重复病例标本),痰96例占61.1%,尿32例占20.4%,血9例占5.7%,咽拭子7例占4.4%,便标本3例点1.8%,分泌物2例占1.3%,其它8例占5.0%。

1.1.2分离培养基及MIC药敏板 分离培养基为CHROM Magar念珠菌显色培养基,郑州博赛公司生产。MIC药敏板为梅里埃的ATBTMFUNGUS3试条进行药敏试验。

1.1.3仪器 VITEK-TWO全自动鉴定系统,温盘、35℃孵育箱。

1.2方法

1.2.1培养及鉴定 标本接种于CHRO Magar培养基,35℃培养24-48 h,观察生长情况:用VITEKTWO全自动鉴定系统。

1.2.2菌液制备 挑取培养基上的若干纯菌落,用无菌生理盐水稀释制备成混悬液,震荡摇匀,用光电比浊仪将浓度调至2.0麦氏单位。

1.2.3接种 将制备好的菌悬液用无菌微量移液器及20 μ l加入ATB F2培养基中,反复混匀后,用200 μ l无菌可调移液器在每个反应孔内加入 135 μ l含有菌液的ATB F2培养基(已经预先取出放在室温下恢复至室温的反应试条中)。最终反应浓度为3.0×104酵母菌/ml或4×103酵母菌/反应孔。

1.2.4孵育 接种完毕后,将反应板置于垫有湿纱布的瓷方盘内,然后将瓷方盘置于35℃孵育箱内孵育24-48小时观察结果。

1.2.5结果判断 除新型隐球菌需48±6小时观察结果外,其余酵母菌在24±2小时观察结果,以不含药生长对照孔明显生长为标准。观察结果前应将96孔振荡摇匀,然后观察比较。a.两性霉素BMIC值为生长被完全抑制的药物最低浓度。b.氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑可能会出现拖尾现象,判定时以不含药生长对照孔为准,将不生长或生长不明显或明显低于生长对照孔的孔的药物浓度定为MIC值。c.观察结果时,将药敏试条底部对准日光灯,肉眼观察真菌生长情况。

2 结果

2.1在157株深部真菌中,白色念珠菌101株,占64.3%;光滑念珠菌42株,占26.8%;热带念珠菌 6株,占3.8%,近平滑念珠菌5株,占3.2%;克柔念珠菌3株,占1.9%。157例深部真菌中,未培养出新型隐球菌。

2.2157例深部真菌的抗真菌药物体外MIC检测结果见表1。

表1 157株深部真菌的抗真菌药物体外MIC检测结果

2.3除光滑念珠菌及克柔念菌外,真菌(共112株)对各药的敏感率分别为:5-氟胞嘧啶为95.5%;伏立康唑为77.7%;伊曲康唑为75%;氟康唑为78.6%。对于光滑念珠菌及克柔念珠菌,除氟康唑外的敏感率分别为:5-氟胞嘧啶 为91.1%;伏立康唑为73.3%;伊曲康唑为22.2%。

2.4对伏立康唑、伊曲康唑及氟康唑全耐药的菌株总数为16株,占总数的10.2%。

3 讨论

3.1在157例深部真菌中,白色念珠菌最多,其次为光滑念珠菌,而热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌相对较少。这与国内其它文献报道的主要真菌感染类型相同[2,3]。

3.2由表1可见,5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑均对念珠菌有不同程度的杀灭作用,但临床应用较广泛的氟康唑耐药率已达40.1%,可能因为氟康唑对光滑念珠菌、克柔念珠菌存在天然耐药现象[4];伊曲康唑耐药率次之,其耐药率为31.8%,其耐药率与文献报道基本相符[5]。在本次调查中发现,5-氟胞嘧啶是敏感率最高的抗真菌药,其次为伏立康唑较为敏感。两性霉素B虽然CLSI没有给判断标准,但本院157例深部真菌中所检测的MIC值均为最低药物浓度(0.5 μ g/ml),故两性霉素B对所有157例念珠菌均敏感,应为目前本院抗真菌治疗的首选药物[6]。但由于两性霉素B的毒副作用较大,患者不能耐爱,用药过程须监护,用药前后须检测肝肾功能,因此在临床实际工作中往往不首选两性霉素B,5-氟胞嘧啶虽然后敏试验中显示敏感率较高,但由于其单独使用时真菌易对其产生耐药性,在所有指南中不作为首选抗真菌药而建议与其它药物联合使用。伏立康唑无文化从药物敏感性方面还是副作用或耐药性方面,为本院较好的抗真菌药物。

3.3由于光滑念珠菌及克柔念菌对氟康唑天然耐药,因此CLSI文件中建议无论药敏试验结果显示是否耐药或中介,均报告为耐药,但在表1中未排除光滑念珠菌及克柔念珠菌,因此氟康唑耐药率显示较高(表1中的敏感及中介数据中同时也包含了对氟康唑敏感或中介的数据)。将检测数据中的光滑念珠菌及克柔珠菌不作为统计数据重新计算,除5-氟胞嘧啶外其余三种唑类药物敏感率基本一致(75-78.6%);对于光滑念珠菌及克柔珠菌,除天然耐药的氟康唑外,其它两种唑类药物中伊曲康唑敏感率仅为22.2%,而伏立康唑敏感率则为73.3%,显示出伏立康唑对光滑念珠菌及克柔念珠菌的强大抗菌作用。在157株分离的真菌中,对三种唑类全耐药的菌株占10.2%,显示出目前念珠菌对唑类耐药的严重现奖,揭示临床必须及时进行真菌培养和药敏试验,以指导临床合理使用抗真菌药物。

[1]杨继勇,赵 慧,张军民.酵母菌引起学问感染的病原学特征[J].中华医院感染学杂志,2003,13(3):284.

[2]彭敬红,赵均秀,周有利,等.136株念珠菌的临床颁及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2002,12(11):863.

[3]刘 华,周中华,喻 化,等.260株念珠菌分离鉴定及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2004,11(3):347.

[4]姚正国,黄宪章,范秋莲,等.酵母菌对氟康唑的药物物敏感染试验分析[J].中华医院感染学杂志,2004,14(4):44.

[5]陈谐捷,蔡卫平,等.HIV/AIDS合并深部真菌感染的调查与研究.中国艾滋病性病[J].2003,9(4):205.

[6]戴自英.临床抗菌药物学[M].第2版,上海:上海科学技术出版社,1999,246-253.