健脾消癌方防止裸鼠大肠癌术后肝转移的实验研究*

蒋益兰，朱克俭，李勇敏，蔡 美，荆 珍

(湖南省中医药研究院附属医院肿瘤科，湖南长沙 410006)

本研究以裸鼠人大肠癌细胞肝转移模型为研究对象，探索中药健脾消癌方防止大肠癌术后肝转移的作用机理，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 药物制备

健脾消癌方由党参、薏苡仁、莪术、石见穿、七叶一枝花等组成，按有关工艺流程制成浓度为2.1∶1(即1ml水煎剂含2.1g生药)的水煎剂备用。

1.2 动物及瘤株

BALB/C-nu/nu裸鼠40只，雌雄各半，4～6周龄，在SPF条件下饲养。瘤株采用人结肠癌细胞株LoVo。

1.3 模型制备

于无菌条件下将裸鼠置于保温床上，用2.5%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉裸鼠。从腹部左侧2.0cm～2.5cm切口进腹，切断脾胃韧带，将脾脏完全显露于腹腔外。用100μl微量注射器从脾脏上极进针，深度 1.0cm以上，每只裸鼠注入105HCCC(LoVo 细胞)悬液 50μl，注射时间 1min，出针后即用95%酒精稍浸湿的棉球轻压止血，并杀死可能外渗的肿瘤细胞，5min后结扎并切断脾蒂，移除脾脏，3～0丝线单层间断缝合腹壁。

1.4 分组给药

随机选取8只裸鼠按手术常规操作，打开腹腔后再缝合，作为假手术组;其余裸鼠按以上方法制成大肠癌模型，将造模后裸鼠随机分成模型组、西药组(5-fu+CF)、中药组(健脾消癌方)3组，每组8只，雌雄各半。各组于造模后第3天开始给药，健脾消癌方按42.8g/kg的剂量给药，灌胃体积为20m1/kg，每天1次，每6d后停1d，共8周;西药组动物腹腔注射5-Fu和 CF，剂量给药分别为 0.13g/kg、0.026g/kg。用生理盐水配制5-Fu和CF的给药浓度分别为13mg/ml和2.6mg/ml，给药体积为10ml/kg，每天1次，共5d，第29天再重复1次。

1.5 指标测定

1.5.1 肝转移情况 肉眼观察:动物死亡后或存活超过60d处死后，迅速打开腹腔，仔细观察肝脏有无转移结节、转移结节分布状况、数量、大小等，挖出各个转移癌结节并称癌结节和肝脏重量，同时观察胃、肠、胰、肺等脏器有无转移。形态学检查:动物死亡后或处死后，将每只小鼠的部分肝脏和大肠标本以10%福尔马林固定、石腊包埋切片、HE染色和光镜观察。

1.5.2 血清VEGF测定 各组于第4周时，眼眶采血约1ml，采用双抗体夹心ELISA法，测定血清VEFG浓度。

1.6 统计分析

2 结果与分析

2.1 肝转移情况的观察

2.1.1 肉眼观察

表1 各组肝转移发生情况

经脾内接种HCCC细胞后，模型组及中药、西药组裸鼠肝脏表面多数有多发性转移结节，中药、西药组肝转移结节较模型组少，转移癌结节数、癌重和癌重/肝重，中药组与模型组比较组间差异均有统计学意义(<0.05)，西药组与模型组及西药组与中药组组间比较无统计学意义。肝表面转移结节主要位于肝叶边缘和肝叶脏面，胃、大肠、小肠、肠系膜、肺等脏器均未见转移结节，提示健脾消癌方能抑制裸鼠大肠癌术后肝转移。

2.1.2 组织学检查 光镜观察发现，模型组及中药、西药组肝转移瘤为高、中分化腺癌，癌与肝组织境界清楚，癌巢内大片坏死并可见虫卵钙化沉积。有癌转移灶的肝脏坏死不明显，间质可见少量炎细胞浸润。未见癌转移肝脏标本，也可见不同程度的肝组织坏死和肝细胞变性，间质内见炎细胞浸润，部分肝胆管周围重度炎症，小胆管增生、扩张，纤维组织增生，血管扩张充血，表现为较严重的炎症。

2.2 对裸鼠血清VEGF浓度的影响

由表2可见，造模各组裸鼠血清VEGF浓度均高于假手术组，但中药组及西药组裸鼠血清VEGF浓度均低于模型组，提示健脾消癌方能降低大肠癌术后肝转移模型裸鼠血清VEGF水平。

表2 健脾消癌方对大肠癌术后肝转移模型裸鼠血清VEGF浓度的影响

3 讨论

大肠癌是人类最常见的消化道恶性肿瘤之一。据有关资料统计，大肠癌近5年生存率始终在50%左右，有近一半患者术后出现复发和转移，肝转移是大肠癌最常见的严重并发症。多年来，我们运用健脾消癌方治疗大肠癌术后及中晚期大肠癌患者，均取得较好疗效。临床观察提示，中药健脾消癌方配合化疗能降低大肠癌术后的复发转移，延长生存期，同时改善临床症状，提高生活质量，增强患者的免疫功能，并降低癌胚抗原的含量，具有良好的临床运用前景。

肿瘤持续性生长和转移需要新生血管的形成。在肿瘤新生血管形成的影响因素中，最有效和特异的因子就是血管内皮细胞生长因子(VEGF)。研究表明，VEGF除可诱导血管内皮细胞产生蛋白水解酶、间质胶原酶等促进血管生成外，还可提高血管通透性，促进血浆蛋白、纤维蛋白原外渗导致肿瘤间质水肿，为肿瘤浸润及转移提供条件。许多类型肿瘤患者血液和尿液中存在VEGF，且其水平增加与肿瘤转移率增高和患者预后不良有密切关系。

本实验结果显示，在组织形态学方面，各用药组未见显著差异。中药组、西药组肝转移结节较模型组减少，转移癌结节数目、癌重和癌重/肝重，中药组与模型组比较，组间差异均有统计学意义，提示健脾消癌方能抑制裸鼠大肠癌术后肝转移。中药组裸鼠血清VEGF表达低于模型组血清VEGF表达，其差异具有显著性，可能是健脾消癌方抑制大肠癌术后肝转移的原因之一。

我国的中药资源丰富，进一步筛选开发高效、低毒广谱的抗转移药大有可为。肿瘤转移的机制颇为复杂，中药抗转移的研究还需要从不同方面、不同层次、多个靶点来进行。相信在今后的研究中，中药抗肿瘤转移的研究将会取得较大的进展。