华蟾素分散片的溶出度测定

2010-06-02吴宏富

中国药业 2010年24期

李霞，刘放，吴宏富

(1.浙江省庆元县中医院，浙江庆元 323800; 2.浙江省医学科学院药物研究所，浙江杭州 310013)

华蟾素(cinobufocalin)系蟾蜍科动物中华大蟾蜍 Bufobufo gargarizans Cantar或黑眶蟾蜍 Bufo melanostictus Schneider等的全皮经科学方法提取加工制成的水溶性物质，是我国自行研制的二类新药，其主要成分为吲哚生物碱、还原糖、氨基酸、蟾蜍毒素及蟾蜍色胺等。近年来已证实其具有清热解毒、活血化瘀、抗肿瘤、抗病毒、强心、麻醉、止痛、促进骨髓增生、增强机体免疫功能等多种药理作用，其制剂在临床上广泛用于原发性肝癌、中晚期肺癌、乙型病毒性肝炎、慢性喉炎、牛皮癣、顽固性逆呃等疾病的治疗，效果显著，现已成功开发出注射液、口服液及片剂，并被列为国家级中药保护品种[1-2]。华蟾素片现行药品标准质量控制方法为用紫外分光光度(UV)法测定5-羟色胺的含量，以含吲哚类总生物碱计不得少于0.50%(g/L)[3]。文献报道华蟾素及其制剂的含量测定方法，目前主要有UV法[4-6]和高效液相色谱(HPLC)法[7-9]。笔者对自制的华蟾素分散片溶出度进行了研究，并采用UV法测定华蟾素分散片的溶出度，报道如下。

1 仪器与试药

RCZ-8A型智能溶出仪(天津大学精密仪器厂);TU-1800型紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);Sartorus 2024MP型电子天平(德国);SB2200型出超声波仪(上海超声波仪器厂)。5-羟色胺盐酸盐对照品(供含量测定用，批号为111456-200401，中国药品生物制品检定所);华蟾素分散片(规格为 0.3 g，批号分别为 20081210，200851212，20081214，浙江省医学科学院药物研究所);对-二甲氨基苯甲醛(AR，上海三爱思试剂有限公司)，盐酸(AR，浙江巨州化学试剂有限公司)，水为去离子水(自制)。

2 方法与结果

2.1 显色剂配制

取对-二甲氨基苯甲醛15 g，置100 mL棕色量瓶中，加盐酸溶液(2→3)溶解并稀释至刻度，摇匀即得15%对-二甲氨基苯甲醛盐酸溶液(显色剂)。

2.2 5－羟色胺紫外吸收光谱

取5-羟色胺对照品4 mg，精密称定，共2份，分置2只100 mL棕色量瓶中，分别加水和0.1 mol/L盐酸溶液，溶解并稀释至刻度，摇匀，分别以相应的试剂空白为参比，1 cm比色杯，在300～700 nm波长处进行全扫描，紫外吸收光谱图见图1。

图1 5-羟色胺在不同溶剂中的紫外吸收光谱

2.3 溶出方法及条件选择

溶出方法:由于本品规格较小(0.3 g/片)，主药含量较低，故采用2005年版《中国药典(二部)》附录ⅩC溶出度试验第三法(桨法)，溶出介质体积为100 mL。

溶出介质:取本品4片，分别以水和0.1 mol/L盐酸溶液100 mL为溶剂，转速为 50 r/min，依法操作，经 2，5，10，20，30，45 min 时取溶液10 mL，并立即补加10 mL溶剂于溶出杯中，溶出液用0.8 μm微孔滤膜滤过，取续滤液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加显色剂至10 mL，摇匀，放置30 min，作为供试品溶液;另取5-羟色胺对照品4 mg(平行2份)，分置100 mL棕色量瓶中，分别用水和0.1 mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3 mL，置10 mL棕色量瓶中，分别加水和0.1 mol/L盐酸溶液至5 mL，加显色剂至刻度，摇匀，放置30 min，作为对照品溶液。取上述两种溶液，分别以水和0.1 mol/L盐酸溶液为参比，1 cm比色杯，在555 nm波长处分别测定吸光度，计算出每片的溶出量，结果显示华蟾素分散片在0.1 mol/L盐酸溶液中的溶出度较水中大。45 min时在水中的溶出度为60.23%，在0.1 mol/L盐酸溶液中的溶出度为81.54%。按药典一般规定45 min时溶出度应大于70%[15]，故选择0.1 mol/L盐酸溶液为溶出介质。

转速选择:取本品4片，以0.1 mol/L盐酸溶液100 mL为溶剂，转速分别为50 r/min和100 r/min，依法操作。结果样品溶出度随转速的增加而增加，转速为50 r/min和100 r/min时45 min的溶出度分别为81.54%和86.92%，均大于80%，故按常规选择转速为100 r/min。

2.4 溶出度测定方法学考察

线性关系考察:取5-羟色胺对照品约4 mg，精密称定，置100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取 0.1，0.25，0.5，1.0，2.0，2.5，3.0 mL，分别置 7 只 10 mL 棕色量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液至5 mL，加显色剂至刻度，在555 nm波长处分别测定吸光度，以吸光度(X)对质量浓度(Y)进行线性回归，回归方程为 Y=0.045 9 X-0.001 5，r=0.999 7(n=7)。结果表明，5-羟色胺质量浓度在0.409～12.276 μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。

回收率试验:分别称取5-羟色胺对照品约0.50，1.30，1.84 mg(约相当于溶出量的30%，60%，100%)和处方量的混合辅料适量(每个质量浓度平行操作3份)，精密称定，分置9只100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液80 mL，超声处理15 min，放冷，加0.1 mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液至5 mL，加显色剂至刻度，放置30 min，作为供试品溶液;另取5-羟色胺对照品4 mg，置100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3 mL，置10 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液至5 mL，加显色剂至10 mL，摇匀，放置30 min，作为对照品溶液。取上述两种溶液，在555 nm波长处分别测定吸光度，并计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

稳定性试验:取本品(批号为20081210)4片，以0.1 mol/L盐酸100 mL为溶剂，转速为100 r/min，依法操作，经30 min时取溶液10 mL，滤过，取续滤液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加显色剂至刻度，摇匀，放置 10，20，30，40，50，60 min 时，分别测定吸光度。结果不同放置时间的溶出液吸光度依次为0.175，0.184，0.194，0.194，0.190，0.185，表明溶出液加显色剂后，放置30～40 min内稳定。

2.5 均一性试验

取本品(批号为20081210)4片，以0.1 mol/L盐酸溶液100 mL为溶剂，转速为 100 r/min，依法操作，经 2，5，10，20，30，45 min 时取溶液10 mL，并立即补加10 mL溶剂于溶出杯中，溶出液用0.8 μm微孔滤膜滤过，取续滤液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加显色剂至刻度，摇匀，放置30 min，作为供试品溶液;按2.4项下回收率试验操作，依法测定。结果见表2和图2。