肝康颗粒的醇提工艺研究

2010-04-09叶卯祥严雪黎

中国药业 2010年24期

叶卯祥，严雪黎

（湖北省中医院，湖北武汉 430074）

肝康颗粒是由丹参、郁金等5味常用中药组成的纯中药制剂，处方来源于临床应用多年的民间验方，具有活血止痛、凉血舒肝、益年补虚的功效，主要用于治疗肝纤维化、慢性肝炎所致的瘀热症。方中丹参和郁金所含与处方功能主治相关的成分多为脂溶性，为保证制剂质量，笔者进行了两者的乙醇提取工艺研究，报道如下。

1 仪器与试药

Agileng－1100型高效液相色谱仪；超声波提取器（北京医用设备厂）；Mettler－Toledo AG285型天平（Mettler－toledo Gmbh，Laboratory＆Weighing Technologies，Switzerland）。丹参酮ⅡA与姜黄素对照品均为中国药品生物制品检定所提供；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 药材吸醇量测定

按处方比例称取丹参、郁金等药材，加适量80％乙醇浸泡，每隔30min观察1次，共冷浸1.5h，直至药材不再吸收为止。将吸醇饱和后的药材加热回流1h，求得药材的吸醇量为药材量的2倍。2.2 乙醇体积分数考察

为考察不同体积分数乙醇对提取效果的影响，根据有效成分性质并参阅文献[1－2]，按处方比例称取丹参和郁金药材数份，分别以70％，80％，90％的乙醇进行回流提取2次，第1次加8倍量乙醇，第2次加6倍量，合并所得药液，用350目滤布滤过，滤液在同等条件下减压回收乙醇，以蒸馏水定容至250 mL，备用。结果见表1。可见，采用80％和90％的乙醇提取时，丹参酮ⅡA和姜黄素的提取率较高。为了节约乙醇、降低成本、保证安全生产，确定采用80％乙醇回流提取丹参和郁金药材。

2.3 评价指标测定

2.3.1 丹参酮ⅡA[3]

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－水（75∶25）为流动相；检测波长270 nm，柱温35℃，流速1mL/min。理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2 000。

表1 不同体积分数的乙醇提取效果考察（n=3）

溶液制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为40μg/mL的对照品溶液。精密量取提取液5 mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

测定方法：精密量取对照品溶液1，3，5，7，9，11μL，注入色谱仪中，记录色谱图和峰面积值，以进样量（μg）对峰面积值（A）进行线性回归，得回归方程 C=1.818 9×10－4A+4.191 7×10－3，r=0.999 7（n=6）。取供试品溶液10μL，同法测定，记录色谱图，计算即得。

2.3.2 姜黄素[3]

色谱条件与系统适用性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－水－磷酸（75∶25∶0.002）为流动相，检测波长424 nm，柱温30℃，流速1mL/min。理论板数按姜黄素峰计应不低于2 000。

溶液制备：精密称取姜黄素对照品5 mg，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为20μg/mL的对照品溶液。精密量取提取液5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

测定方法：精密量取对照品溶液1，3，5，7，9，11μL，注入色谱仪，记录色谱图，以进样量（μg）对峰面积值（A）进行线性回归，得回归方程 C=1.272 8×10－4A－2.039 6×10－3，r=0.999 2（n=6）。取供试品溶液10μL，同法测定，记录色谱图，计算即得。

2.4 乙醇提取条件筛选

选定乙醇的体积分数后，乙醇用量（因素A）、提取时间（因素B）、提取次数（因素C）则为影响提取效果的主要因素，各取3个水平，按照L9（34）正交表安排试验，其中首次提取时另加2倍量乙醇以补充药材的吸附量。因素水平见表2。因丹参为方中君药，丹参酮ⅡA是其主要有效成分，也是本方重要的活性成分之一，姜黄素也是明确的抗肝纤维化活性成分，故以丹参酮ⅡA和姜黄素含量为指标进行综合评分，根据实际情况并参照常用比例将二者权重系数分别定为0.6和0.4，从而筛选得出最佳工艺条件。正交试验结果见表3，方差分析结果见表4。由直观分析可知，提取效果的影响因素大小顺序为提取次数、提取时间、乙醇用量。方差分析结果表明，提取次数为影响提取效果的主要因素，乙醇用量和提取时间对提取效果的影响不大，且提取工艺A2B2C2为佳，即分别加5倍量的80％乙醇，加热回流提取2次，每次1h。