复方牛蒡子含片体外抑菌作用研究＊

2010-06-02王丽萍段晓颖孙广科

中国药业 2010年24期

王丽萍，段晓颖，孙广科

(河南中医学院第一附属医院药学部，河南郑州 450000)

复方牛蒡子含片由牛蒡子、金银花、牡丹皮等组方，具有疏风散热、解毒散结、消肿利咽等功效，主治急、慢性咽喉炎所致咽部疼痛、咽干、咽部异物感。笔者根据其功能主治，对其体外抑菌作用进行了研究，现报道如下。

1 材料

SXK-103型超净工作台(安徽省蚌埠净化设备厂);RCO-3000TVBB型CO2培养箱(美国热电)。复方牛蒡子含片(由河南中医学院第一附属医院提供，批号为070621，每g含原生药3.57 g);咽炎含片(河北国金药业有限公司，批号为0802131，每片相当于原生药 2.69 g);肺炎链球菌 (31001-9a)、乙型溶血性链球菌(32210-4a)冻干菌粉均由中国药品生物制品检定所提供;金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26-003]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]斜面保存菌种由河南省食品药品检验所提供;营养肉汤培养基(批号为060322)、血琼脂基础培养基(批号为070720)、pH=7.0氯化钠-蛋白胨水缓冲液(批号为 060426)、营养琼脂培养基(批号为060330)均由北京三药科技开发公司生产;无菌脱纤维羊血(批号为080725，青岛绿谷国际商贸有限公司)。

2 方法与结果[1-2]

2.1 菌液与药物配制

2.1.1 菌种复壮

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌菌株接种于营养肉汤培养基中，(35±1)℃培养20 h。取肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌菌株接种于10%无菌脱纤羊血肉汤培养基中，并于CO2培养箱中(35±1)℃培养20 h。

2.1.2 菌液活菌数计算

取经复壮增菌培养的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌菌悬液1 mL，用无菌生理盐水按 1 ∶10 倍比分别稀释至 10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，分别取各稀释级菌液 0.1，0.2，0.5 mL，均匀涂布于营养琼脂平板上，(35±1)℃培养20 h，确定最终使用的菌液稀释级与加菌液量:大肠埃希菌的稀释级为10-5，加菌量0.2 mL，平均含活菌量134 CFU/0.2 mL，金黄色葡萄球菌的稀释级为10-5，加菌量0.1 mL，平均含活菌量236 CFU/0.1 mL。按上述方法将肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌分别稀释至 10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，均匀涂布于血琼脂平板(含10%无菌脱纤羊血)上，(35±1)℃培养20 h，确定最终使用的菌液稀释级与加菌液量:肺炎链球菌的稀释级为10-5，加菌量0.2 mL，平均含活菌量106 CFU/0.2 mL;乙型溶血性链球菌稀释级为10-6，加菌量0.2 mL，平均含活菌量80 CFU/0.2 mL。

2.1.3 药物配制

称取复方牛蒡子含片适量，以pH=7.0的氯化钠-蛋白胨水缓冲液为稀释剂，依次制成含生药质量浓度分别为2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.82 g/L 的药液;称取咽炎含片适量，按以上述方法配制成含生药质量浓度依次为2 500，2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.82 g/L 的药液。

2.1.4 含药平皿制备

分别取上述供试品药液2 mL，加入无菌平皿内，立即加入温度为45～50℃的营养琼脂培养基18 mL，即刻摇匀，供检测大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌试验用;分别取上述供试品药液2 mL，加入血琼脂培养基(含10%无菌脱纤羊血)18 mL，即刻摇匀，供检测肺炎链球菌及乙型溶血性链球菌试验用;则制成的平皿中含生药质量浓度依次为 200，100，50，25，12.5，6.25，3.12，1.56，0.78 g/L 的复方牛蒡子含片含药平皿。取咽炎含片按上述方法制备含药平皿，则各平皿的最终质量浓度分别为 250，200，100，50，25，12.5，6.25，3.12，1.56，0.78 g/L(含生药质量浓度)。

2.2 菌株接种与培养

分别将稀释各菌液均匀涂布于不同质量浓度的含药平皿内;另设不含药物上述各菌种对照平皿，不接种菌液的各药物对照平皿，及不含药物的空白对照平皿，均置(35±1)℃培养20 h。结果不含药物的各菌种对照平皿中，阳性菌生长良好;不接种菌液的各药物对照皿和空白对照皿均无菌生长;含药平皿中菌落形态与阳性对照平皿相同。以平皿内无某一菌株生长的最低药物浓度为该药物对某一菌株的最低抑菌浓度(MIC)，结果见表1。