高效液相色谱法测定盐酸川芎嗪氯化钠注射液的含量及有关物质

夏赛忠

（浙江省嵊泗县人民医院，浙江 舟山 202450）

盐酸川芎嗪化学名为2，3，5，6-四甲基吡嗪盐酸盐，具有抗血小板聚集作用，且对已聚集的血小板有解聚作用，还可扩张小动脉、改善微循环和增加脑血流量，从而产生抗血栓和溶血栓的作用，临床主要用于治疗闭塞性血管疾病、脑血栓形成、冠心病、心绞痛等[1-2]。本试验建立了盐酸川芎嗪氯化钠注射液的含量测定及有关物质检查的高效液相色谱（HPLC）法，报道如下。

1 仪器与试药

LC-2010C型高效液相色谱仪（日本岛津），N2000色谱工作站；日本A&D电子分析天平（0.1 mg）。盐酸川芎嗪对照品（成都曼思特生物科技有限公司，纯度为99.0%）；盐酸川芎嗪氯化钠注射液（四川三精升和制药有限公司，批号为050201，050511，051025，规格为100 mL：盐酸川芎嗪40 mg与氯化钠0.9 g）；水为重蒸馏水，乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，10 μm）；流动相：乙腈 -水（40 ∶60）；流速：1.0 mL/min；检测波长：295 nm；柱温：30 ℃。理论塔板数按盐酸川芎嗪峰计算应不低于4 000。

2.2 含量测定

2.2.1 测定法

精密量取盐酸川芎嗪氯化钠注射液5 mL（相当于盐酸川芎嗪2 mg），加流动相制成每1 mL中含盐酸川芎嗪20 μg的溶液，作为供试品溶液。另取盐酸川芎嗪对照品适量，加流动相制成每1 mL中含20 μg的溶液，作为对照品溶液。取供试品和对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算盐酸川芎嗪的含量。

2.2.2 方法学考察

专属性考察：取供试品溶液、对照品溶液及空白流动相适量，依法进样，色谱图见图1。可见，流动相在盐酸川芎嗪峰处无干扰，盐酸川芎嗪峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5。

图1 盐酸川芎嗪高效液相色谱图

线性关系考察：取盐酸川芎嗪对照品适量，精密称定，用流动相制成质量浓度分别为 2.5，5.0，10.0，20.0，40.0 μg/mL 的溶液，各精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积 Y对盐酸川芎嗪质量浓度 X进行线性回归，得回归方程 Y=72 580 X-717.9，r=0.999 9（n=5）。结果表明，盐酸川芎嗪质量浓度在2.5～40.0 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取盐酸川芎嗪对照品适量，精密称定，用流动相制成含盐酸川芎嗪15.0，20.0，25.0 μg/mL的溶液，各精密吸取20 μL重复进样5次。结果3种质量浓度峰面积的 RSD分别为0.8% ，1.1%，1.2% （n=5）。

重现性试验：取同一批样品（批号为050201），按2.2项下方法平行制备供试品溶液并依法测定。结果平均标示含量为99.5%，RSD=0.56% （n=6）。

回收率试验：在已知含量（10 μg/mL）供试品溶液中，分别加入一定量的盐酸川芎嗪对照品，配成高、中、低3种质量浓度溶液（15，20.0，25 μg/mL），按 3.1 项下试验，测得回收率分别为 99.6%，100.2%，100.3%，RSD 分别为 0.69%，0.54%，0.82%（n=3）。

稳定性试验：取2.2.1项下同一供试品溶液（批号为050201），置室温下于不同时间（1，2，3，4，6，8 h）分别进样 20 μL。结果峰面积的 RSD为1.02%（n=6），表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.2.3 样品含量测定

取3批样品，照2.2.1项下方法测定。结果见表1。

2.3 有关物质检查

2.3.1 测定法

将盐酸川芎嗪氯化钠注射液（0.4 mg/mL）作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释成每1 mL中含盐酸川芎嗪4.0 μg的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录仪满量程的20%～25%；再取供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中若显示杂质峰，则各杂质峰面积总和不得大于对照品溶液主峰的面积（1.0%）。

2.3.2 方法学考察

专属性考察：分别将样品在60℃温度、强光[照度为（4 500±500）lx]、相对湿度为95%的环境下放置10 d，各取上述破坏试验溶液20 μL注入色谱仪，记录色谱图至盐酸川芎嗪峰保留时间的3倍。结果样品的破坏产物和主峰可实现基线分离，分离度均大于1.5，不干扰有关物质的测定，说明本色谱条件适用性良好，可用于盐酸川芎嗪注射液有关物质的检查。

检测限确定：取盐酸川芎嗪对照品适量，精密称定，用流动相制成每1 mL中含0.01 mg的溶液，精密吸取5 μL，注入液相色谱仪，此时信噪比约等于3，故检测限为50 ng。

进样精密度试验：取质量浓度为4.0 μg/mL的对照品溶液，依法测定。结果对照品溶液主峰面积的 RSD为0.81%（n=5），表明方法的进样精密度良好。

重现性试验：精密吸取样品20 μL，依法测定。结果杂质含量的RSD为2.06%（n=6），表明方法重现性良好。

2.3.3 样品有关物质测定

依法对3批样品进行有关物质检查。结果见表1。

表1 3批样品测定结果（n=3）

3 讨论

目前测定川芎嗪含量的方法有HPLC法[3-4]、紫外分光光度法[5]、毛细管电泳法[6]等。2005年版《中国药典（二部）》[7]也收录了磷酸川芎嗪片、磷酸川芎嗪胶囊、磷酸川芎嗪注射液，分别采用电位滴定法和紫外分光光度法进行含量测定，但没有对有关物质进行控制。本试验所建立的HPLC法方法简便、快速、准确，对盐酸川芎嗪氯化钠注射液质量的全面控制提供了一个有价值的参考。

[1]张国清，赵江花.川芎嗪在心血管疾病中的药理作用研究进展[J].中国当代医药，2009，16（4）：142.

[2]何 晶.川芎嗪的药理作用及临床应用[J].首都医药，2005，12（23）：31-32.

[3]李小燕.RP-HPLC法测定盐酸川芎嗪注射液的含量[J].广西医学，2003，25（6）：925-927.

[4]王贵发.高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪葡萄糖注射液中川芎嗪的含量[J]. 医药导报，2004，23（8）：583-584.

[5]吴 艳，刘建辉，吴 振.注射用磷酸川芎嗪冻干粉含量测定的研究[J]. 黑龙江医药，2006，19（2）：81-82.

[6]韩风梅，杨 新，李 捃，等.盐酸川芎嗪注射液中盐酸川芎嗪的毛细管电泳测定[J]. 湖北大学学报（自然科学版），1999，21（1）：67.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：89.