尼可刹米注射液细菌内毒素检查法的建立

2010-06-01张广伟周继春

中国药业 2010年6期

张广伟，周继春

（河南省食品药品检验所，河南郑州 450003）

尼可刹米注射液为中枢兴奋药，主要用于治疗疾病或呼吸抑制药中毒引起的呼吸及循环衰竭[1]，收载于2005年版《中国药典（二部）》，但并无热原或细菌内毒素检查方法。天津药业焦作有限公司的药品注册标准中增加了热原检查项目，但在实际操作中经常出现注射本品后兔体温急剧升高的现象，分析原因可能是注射速度过快所致不良反应，为使标准更适宜操作、可控，该公司委托我所建立尼可刹米注射液细菌内毒素检查方法。现报道如下。

1 仪器与试药

DC3A型干式恒温器（南京三爱斯技术开发有限公司）；ZH-2型自动漩涡混合器（天津药典标准仪器厂）。尼可刹米注射液，（规格 1.5 mL ∶0.375 g，批号为 07070122，07091021，08032431，08051531，08062222，08110121，天津药业焦作有限公司）。鲎试剂（TAL，批号为0710262、规格为0.5 mL/支、灵敏度 0.5 EU/mL，批号为0712270、规格为0.5 mL/支、灵敏度0.125 EU/mL；湛江安度斯生物有限公司；批号为0705300、规格为0.5 mL/支、灵敏度 0.25 EU/mL，批号为 0901122、规格为 0.5 mL/支、灵敏度0.125 EU/mL，湛江博康海洋生物有限公司）。细菌内毒素工作标准品（WSE，规格为 120 EU/支，批号为 150601-200862），细菌内毒素检查用水（BET用水，批号为2008-4，规格为10 mL/支）均由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 供试品细菌内毒素限值（L）确定

根据细菌内毒素限值的计算公式：L=K/M，其中 K为人每kg体重每h最大可接受的内毒素剂量，注射剂的K值为5 EU/（kg·h），M为人用每kg体重每h的最大供试品剂量，人均体重按60 kg计算。参照该药品说明书及《临床用药须知》[1-2]，本品成人1次最大给药剂量为1 250 mg/（60 kg·h），则L=K/M=5 EU/（kg·h）/1 250 mg/（60 kg·h）=0.24 EU/mg。考虑到本品为急救用药，应标准从严，结合干扰试验结果，确定 L为0.15 EU/mg。

2.2 TAL灵敏度复核

按照2005年版《中国药典（二部）》附录的要求复核所用TAL进行复核，结果均符合规定。见表1。

2.3 干扰预试验

将样品用 BET用水进行倍比稀释，分别稀释 2，4，8，16，32，64，128，256，512 倍，制成质量浓度为 125，62.5，31.25，15.62，7.8，3.9，1.95，0.98，0.49 mg/mL的溶液，将上述稀释溶液用湛江安度斯生物有限公司生产的TAL（灵敏度为0.5 EU/mL，批号为08110121）依法进行干扰试验预试验[3]。结果见表2。可见，供试品溶液在0.49 mg/mL及其以下质量浓度时对试验可能不造成干扰。为了较准确地确定最大不干扰浓度，将样品分别制成质量浓度为2.0，1.0，0.9，0.8，0.7，0.6，0.5 mg/mL 的溶液，再次进行干扰试验预试验，结果样品稀释至0.9 mg/mL时即不再对试验产生干扰。

表1 TAL灵敏度复核结果

表2 样品细菌内毒素干扰预试验结果

表3 尼可刹米注射液细菌内毒素干扰试验结果

2.4 干扰试验

根据预试验结果，将3个批号的样品稀释至0.9 mg/mL，分别取上述2个厂家的 TAL（安度斯 λ0.5，海洋 λ0.25），依法进行干扰试验[2]。结果见表3。可见，样品高质量浓度时对TAL与细菌内毒素的凝集反应有干扰作用，经稀释至0.9 mg/mL时即可排除干扰作用，Et均在0.5～2.0 ES之间，其最大不干扰质量浓度为0.9 mg/mL。