丙肝病毒核心抗原检测对于丙型肝炎诊断的价值

许 方,李晓兰,祝 琳

(1.大连医科大学附属二院检验科,辽宁大连116027;2.大连医科大学检验医学院)

据WHO统计,自1989年丙型肝炎被发现以来,估计全球约1.7亿-2.0亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),感染率为3%,每年新发丙型肝炎病例约3.5万例,丙型肝炎在早期临床表现上与乙型肝炎相比,症状较轻,但是其较乙型肝炎易早期出现肝硬化,导致肝癌,病死率较高[。1]由于丙肝病毒的高度变异性,疫苗的研究在短期内难有突破性进展。丙型肝炎的预后不良,目前尚无理想的特效药物和治疗措施。因此早期诊断是防止丙型肝炎病毒传播的有效手段。本研究对90例丙肝感染者和391例高危人群同时测定血清中HCV-cAg,以此观察丙型肝炎核心抗原检测对于丙型肝炎诊断的价值。

1 材料与方法

1.1 检测对象 标本来自2008年4月-2009年2月大连医科大学附属第二医院门诊及病房患者。丙肝抗体阳性组90例,病房HCV-Ab阴性ALT大于200U/L者263例及肝炎门诊就诊HCV-Ab阴性ALT大于70 U/L者128例,共计391例。分离血清并置于-70℃冰箱保存,确保标本仅冻融一次。

1.2 检测方法

1.2.1 HCV-cAg检测采用湖南景达制药有限公司提供的HCV-cAg酶联免疫检测试剂盒,具体操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.2 HCV-Ab检测采用北京科卫临床诊断试剂有限公司提供的HCV-Ab诊断试剂盒,具体操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.3 HCV-RNA定量检测采用深圳匹基生物工程有限公司提供的HCV核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒,利用美国AB公司7500实时PCR分析系统进行定量分析。

2 结果

感染组HCV-cAg阳性率为37.78%,高危人群组HCV-cAg阳性率为0.51%(见表1)。高危人群组2例HCV-cAg阳性,对其做HCV-RNA检测,1例为阴性,1例为阳性,结果为2.3×105拷贝/ml。

表1 感染组、高危人群组HCV-cAg检测结果

3 讨论

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的一种重要的世界性传染病[2],流行病学资料显示,在肝癌发病率中等的地区,如日本、意大利、西班牙等国家肝癌多由丙型肝炎所致,也有资料表明发达国家的慢性肝病主要与HCV感染有关[3]。丙型肝炎病毒主要是通过输血及血液制品获得,1989年Coo等用分子克隆技术发现了丙型肝炎病毒(HCV)。HCV是多变异的病毒,在同型各株间,甚至同一患者不同时期分离的克隆之间亦有差异,基因序列的差异,将导致编码产物抗原型的不同[4]。由于输血后丙型肝炎引起的医疗纠纷不断,而且受血次数越多,感染病毒的几率越高,如患者机体免疫力差,而输入的血液中丙型肝炎病毒复制活跃,就会造成丙型肝炎感染[5]。由此可见,尽早检出和早期防治丙型肝炎感染刻不容缓。

目前,对于HCV感染的临床诊断仍以ELISA法检测HCV抗体为主,但抗体检测存在着一些不足之处。其一,由于使用HCV基因重组抗原质量及各抗原片段包被比例的不同,各厂家试剂间的灵敏度和特异性存在着一定差异。其二,HCV-Ab产生有一个明显的窗口期,平均为70d,所以抗-HCV阴性并不能排除携带HCV并且具有传染性的可能。其三,在抗-HCV ELISA法试剂盒中,由于酶标抗体是广谱抗人IgG抗体,对吸附在固相上的IgG抗体无筛选作用,这就降低了检测的特异性。临床使用中常出现灰区样品检测结果,导致结果难以判断,并造成血液浪费[7]。

此外,常用的HCV检测方法还有PCR定性或定量检测,PCR检测HCV-RNA灵敏度高,人在感染HCV 1-2周,血清中即可检测到HCV-RNA,HCVRNA可以反映病毒的复制与传染性,为病毒血症的标志,是诊断HCV的“金标准”。但HCV-RNA检测影响因素也多,且所有器材必须高压灭菌,需要专业的人员操作,需要精密的仪器设备、较高的实验技巧等,在一些基层医院难以开展,给技术的推广造成了一定的局限性。

近些年关于HCV核心抗原(HCV-cAg)的检测有越来越多的报道,HCV-cAg检测可以将HCV检测的窗口期缩短至15 d[8],通过大量实验研究表明,HCV核心抗原诊断试剂较HCV抗体检测对HCV感染的阳性检测提前14-68 d,平均35.2d[3]。这就降低了HCV经血传播的风险,具有可行性和较广泛的应用基础。HCV核心抗原也是在HCV感染者体内出现的早期感染标志,几乎与HCV RNA同时出现。据文献报道,HCV核心抗原阳性样品中HCV-RNA阳性率为 85%以上,两者之间密切相关[9-12]。目前,HCV-cAg检测大多以进口试剂为主,国产试剂也在近几年问世,但在临床推广上仍做的远远不够。HCV-cAg检测作为一种新的检测方法在一定程度上可以弥补抗体检测方法的不足,前者具有高度敏感性及特异性,可以明显缩短窗口期,有利于丙型肝炎的早期诊断,减少因输血传播丙型肝炎的发生率[13-14]。实验只需3小时,操作简便,成本较低。

本实验所检测的90例丙肝抗体阳性的标本中,其中有34例HCV-cAg阳性,阳性率为37.78%,低于覃桂芳等的报道42.50%[15],其原因在于两者对于标本的选取有所不同。本研究所选的90例血清样本,来自仅是丙肝抗体检测为阳性而未经临床确诊的患者,其中既有丙肝患者,也有既往感染者,也不排除由于药物干扰以及其它自身免疫性疾病所产生的假阳性结果,故阳性率较低是可以解释的。由此可见,HCV-cAg对丙型肝炎早期诊断有较大的价值,但两者的联合检测更有意义。

本文所选的391例转氨酶升高但丙肝抗体阴性的标本中,其中2例为HCV-cAg阳性,阳性率为0.51%,经RT-RNA确证1例为阴性,1例为阳性。有文献报道高危人群的阳性率为0.55%[16],但是阳性率无太大可比性,原因有二:其一,所选标本例数不同,可能存在抽样误差。本研究标本为391例,如能扩大样本量,相信实验结果将更具有科学性和客观性。其二,高危人群组的确立标准不同,我们的标准是HCV-Ab阴性,ALT大于200 U/L的住院患者以及ALT大于70 U/L的肝炎门诊就诊患者,其中门诊128例,住院263例,而住院患者多数已有明确诊断,为丙肝以外的其它疾病,导致ALT升高的原因也多种多样,这与其他研究的高危人群并不相同。

391例HCV-Ab阴性标本中,检出HCV-cAg阳性2例,经HCV-RNA确证 1例为阳性。表明仅用HCV-Ab检测的确存在漏诊的风险,尤其是对手术前丙肝病毒筛查的病例,它涉及到术中感染责任和用血安全等问题,丙肝核心抗原检测在一定程度上降低了这些风险。丙型肝炎患者在感染丙肝病毒后1-4周内血清HCV-RNA转阳,同时HCV-cAg出现,随后ALT增高和HCV抗体转阳[17]。故丙肝抗体检测在丙肝病毒感染的急性期检出率低,部分病例可出现假阴性,我们认为,HCV-Ab、HCV-cAg的共同检测既可以防止窗口期漏检又可以排除一些其它疾病的干扰,在一定程度上降低丙型肝炎诊断假阳性率,可以提高丙型肝炎检测的准确性,而且不需要特殊的仪器及试剂,有助于丙型肝炎的筛查以及临床上的病情判断。

在高危人群组中,有 1例HCV-cAg阳性,但HCV-RNA阴性的标本,说明了核心抗原与 HCVRNA的检测并不是100%完全相关的,原因可能为该患者为丙肝早期,RNA＜103个拷贝或者由于污染、保存条件不完善等原因引起的RNA样本有降解,另一个原因可能由于现有的核心抗原检测试剂盒还不够完善,导致假阳性的存在,由于该患者为门诊患者,所以没有进一步追访的条件,未能确认。

综上所述,HCV核心抗原检测窗口期短,敏感性好,特异性高,操作简便、快速,不需要特殊的仪器,费用低廉,能达到早期诊断的目的,因此,协同检测HCV-Ab、HCV-cAg适合大规模筛查和大多数地区医院的常规检查。

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