血管内皮生长因子C和survivin表达与贲门癌进展及预后的关系

于金海,徐越超,袁 蒙,陈 岩,何 亮,王大广,所 剑

(吉林大学第一医院胃结直肠外科,吉林长春130021)

胃癌是我国高发的恶性肿瘤之一,其主要的转移途径是经淋巴道转移,贲门癌是胃癌的一个特殊类型,其发病率逐年增高[1],因此,探讨与贲门癌进展及预后相关的因素对指导其综合治疗有重要意义。研究表明[2],血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)可以特异性地促进淋巴管生长,在肿瘤淋巴道转移中起重要作用;肿瘤细胞通过逃避细胞凋亡而迅速增殖,生长素(survivin)是家族成员,它通过抑制凋亡因子caspase-3和caspase-7的活性而抑制细胞凋亡,促进细胞增殖。本研究旨在探讨VEGF-C、survivin及相关临床病理指标与贲门癌进展及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

2000年1月至2005年12月间,我院普通外科手术切除贲门癌蜡块标本64例。男38例,女26例;年龄36-79(平均67)岁;全部为腺癌。所有患者均行根治性手术;中位随访时间为45.5(4-90)个月。

1.2 主要试剂和方法

1.2.1 试剂 鼠抗人VEGF-C抗体和兔抗人survivin抗体。免疫组化染色采用SABC法。试剂均为美国Zymed公司进口产品,购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2.2 染色评价 (1)VEGF-C表达:胞浆内或胞膜上染成棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞,在400倍光学显微镜下至少计数200个肿瘤细胞,如标本的阳性肿瘤细胞数超过10%,则此标本定为VEGF-C阳性,如少于或等于10%则定为VEGF-C阴性;见图1。(2)survivin表达:胞浆内或胞膜上染成棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞,在400倍光学显微镜下至少计数200个肿瘤细胞,如标本的阳性肿瘤细胞数超过10%,则此标本定为VEGF-C阳性,如少于或等于10%则定为VEGF-C阴性;见图2。

1.3 统计学分析 χ2检验,分析贲门癌VEGF-C、survivin表达与临床病理指标的关系。t检验和方差分析(ANOVA)检验VEGF-C表达与和LMVD之间的相关关系。Kaplan-Meier法评估术后生存率,绘制生存曲线,采用log-rank检验分析两生存曲线之间的关系。统计学软件采用SPSS10.0。

2 结果

2.1 VEGF-C及survivin表达情况,VEGF-C表达和survivin表达的关系

VEGF-C阳必表达率为60.9%(39/64);survivin阳必表达率为54.7%(35/64)。VEGF-C表达阳性组survivin阳性表达率84.6%,高于survivin表达阴性组的8.0%。VEGF-C与survivin呈正相关性(P=0.003 05)。两者表达分布关系见表1。

表1 64例贲门癌患者VEGF-C及survivin表达分布关系

2.2 VEGF-C和survivin与贲门癌临床病理指标之间的关系

VEGF-C和survivin与贲门癌临床病理指标之间的关系见表2。表2显示,VEGF-C的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、T分期相关;survivin的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、T分期相关。

表2 VEGF-C和survivin与64例贲门癌患者临床病理指标之前的关系

2.3 VEGF-C、survivin与贲门癌的预后关系

25例VEGF-C阴性患者3年或5年生存率分别为70%和64%,39例VEGF-C阳性患者则分别为48%和35%;VEGF-C阳性组患者的生存率明显低于阴性组患者(P=0.0213)。29例survivin阴性组患者的3年和5年生存率为73%和61%,35例survivin阳性组患者则分别为51%和34%;survivin阳性组患者的生存率明显低于survivin阴性组患者(P=0.002 26)。见图3。

图1 VEGF-C在贲门癌中的表达

图2 survivin在贲门癌中的表达

图3 不同VEGF-C和survivin表达的贲门癌患者生存曲线

3 讨论

胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,其中贲门癌占16%[3],由于其解剖位置特别,其生物学特性及转移亦较特殊,淋巴道转移仍然是其主要转移途径。研究表明,血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C),有特异性促进淋巴管生成的作用,近年越来越引起人们的关注。Jeltsch等在过度表达VEGF-C的转基因鼠的真皮层有大量扩张的淋巴管[4]。Skobe等[5]将转染VEGF-C基因的MDA-MB-453/GFP人乳腺癌细胞注射于裸鼠脚垫,发现瘤内新生淋巴管明显增加,分化良好且与对照组有明显差异,瘤内淋巴管与瘤周相连。Ohta等[6]发现在恶性间皮瘤中瘤细胞VECF-C的表达与瘤内及瘤周淋巴管数量明显相关。Yonemura等[7]用RT-PCR和免疫组化法研究了胃癌中VEGF-C表达,发现多数侵入淋巴管的肿瘤细胞VEGF-C表达阳性,VEGF-C表达与淋巴结状态,淋巴管侵犯、肿瘤浸润方式明显相关。用原位杂交法研究一组黑色素瘤VEGF-C mRNA表达,发现淋巴结阳性组VEGF-C mRNA表达明显高于淋巴结阴性组[6]。在一组前列腺癌和一组食管鳞癌的研究中也有类似发现[8,9]。我们研究发现,贲门癌VECF-C表达率为60.9%,VECF-C阳性组淋巴结转移率明显高于VECF-C阴性组,提示VEGF-C促进了肿瘤淋巴系统播散。这与国外学者研究结论是一致的。

凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis,IAPs)是一类高度保守的抗凋亡基因表达产物,广泛存在于各种恶性肿瘤细胞中,对凋亡调控发挥着重要的作用。survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,基因全长15 kb,有4个外显子和3个内含子,定位于人染色体17q25。此外,survivin的表达还具有细胞周期依赖性,特异性地在G2/M期表达,通过与细胞有丝分裂纺锤体的微管结合,参与对细胞基因转录调节。survivin表达于胚胎组织,而不见于终末分化的成熟组织,但在人类大多数的肿瘤组织和转化细胞中大量表达。Kawasaki[10]等报道survivin与胃癌的发生发展有关。他们发现survivin在胃癌的阳性表达率为53.2%,癌旁及正常组织无表达。而Leung,Krieg[11]等研究发现survivin的表达水平与胃腺癌的病理演变有关。

survivin与VEGF关系密切,VEGF在血管生成中的抗凋亡作用可以通过诱导survivin的表达来实现[12]。而survivin的上调是内皮细胞在血管生成过程中维持生存能力的必要条件。survivin通过促进血管内皮细胞增殖和三维毛细血管网的形成,参与肿瘤新生血管的形成过程。VEGF促进survivin的表达而同时高表达的survivin又维持和保护了VEGF-C的促内皮细胞功能,从而促进了肿瘤血管生成和浸润转移。survivin是血管形成中生长因子诱导的保护性基因,维持血管内皮细胞的正常增殖。survivin不仅可以抑制肿瘤细胞的凋亡,而且可以抑制肿瘤血管内皮细胞凋亡。促血管因子VEGF在肿瘤细胞中高表达,不仅直接促进血管形成,还可以诱导survivin表达,产生抗凋亡作用,引起血管过度增生。因此,二者共同作用,促进血管形成并有可能引起肿瘤转移。

本研究中64例贲门癌VEGF-C阳性表达为39例,这些病例中survivin阳性33例,且二者之间有正相关性。进一步研究发现,二者与贲门癌及淋巴结转移均有关,在淋巴结转移的病例中,二者均是高表达,从上述情况中可以推测,.survivin与VEGF-C关系密切,是否存在survivin表达,产生抗凋亡作用,同时引起淋巴管过度增生,二者共同作用,促进贲门癌通过淋巴道转移,这尚需要进一步研究证实。

[1]Buchwald H,Avidor Y,Braunwald E et al.Bariatric surgery:a systematic review and meta-analysis[J].JAMA,2004,292(14):1724.

[2]Ling S,hu Y.Expression of VEGF-Cin rat cornea after alkali injury[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2004,24(5):483.

[3]Brennan MF.Current status of surgery for gastric cancer:a review[J].Gastric Camcer,2005,8(2):64.

[4]Jeltsch M,Kaipainen A Joukov V,et al.Hyperplasia of lymphatic vessels in VEGF-C transgenic mice[J].Science,1997,276(5317):1423.

[5]Skobe M.Induction of tumor lymphangiogenesis by VEGF-C promotes breast cancer metastasis[J].Nat Med,2001,7(2):192.

[6]Ohta Y.VEGF and VEGF type C play an important role in angiogenesis and lymphangiogenesis in human malignant mesothelioma tumours[J].Br J Cancer,1999,8191):54.

[7]Yonemura Y,Endo Y,Fujita H,et al.Role of vascular endothelial Growth factor C expression in the development of lymph node metastasis in gastric cancer[J].Clin Cancer Res,1999,5:1823.

[8]Kimura Y.Watanabe M,Ohga T,et al.Vascular endothelial growth factor C expression correlates with lymphatic involvement and poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma[J].Oncol Rep,2003,10:1747.

[9]Tsurusaki T,Kands S,Sakai H,et al.Vascular endothelial growth factor-C expression in human prostatic carcinoma and its relationship to lymph node metastasis[J].Br J Cancer,1999,80:309.

[10]Kawasaki J,Aaltieri DC,Lu CD,et al Inhibitor of apoptosis by survivin predicts shorter rates on colorectal cancer[J].Cancer Res,1998,58:5071.

[11]Yu J,Leung W K,Ebert MP,et al Increased expression of survivin on gastric cancer patients and in first degree relatives[J].Br J Cancer,2002,87(1):91.

[12]Oconnor D S,ChechnerJS,Adida C,et al Control of apoptosis during angiogenesis by survivin expression in endothelial cells[J].Am J Pathol,2000,156(2):393.