对市售灯盏花素片的质量考察

邹 龙， 朱敬杰， 刘清飞， 林俊生， 罗国安*， 王义明

（1.湖南中医药大学，湖南长沙410208；2.清华大学医学院中药现代化研究中心，北京100084；3.江西中医学院中药系，江西南昌 330006）

对市售灯盏花素片的质量考察

邹 龙1， 朱敬杰1， 刘清飞2， 林俊生3， 罗国安2*， 王义明2

（1.湖南中医药大学，湖南长沙410208；2.清华大学医学院中药现代化研究中心，北京100084；3.江西中医学院中药系，江西南昌 330006）

灯盏花素片；灯盏乙素；质量考察；市售

目的：对不同厂家不同批次的灯盏花素片进行质量考察。方法：建立了HPLC测定灯盏花素片中灯盏乙素含量，测定崩解时限及硬度。其中，HPLC方法的条件为：Agilent TC-C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸=23∶77（V/V）为流动相，流速0.8 mL/min，检测波长：335 nm，柱温为35℃。结果：所测产品的灯盏乙素含量在（15.67±0.12）mg～（17.92±0.34）mg之间，崩解时限在1～26min范围内，硬度差异较大，在（7±2）N～（69±6）N之间。结论：本实验中所建立的色谱方法简便、准确、重现性好。各厂家生产的灯盏花素片中灯盏乙素含量、崩解时限均符合卫生部颁标准，但质量存在差异。

灯盏花素是从菊科植物短葶飞蓬 （灯盏细辛）Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.全草中提取的黄酮苷类成分［1］。灯盏花素片即为该类有效成分制成的片剂，收载于部颁药品标准中药成方制剂第十三册中［2］。灯盏花素主要为灯盏乙素（野黄芩苷）和灯盏甲素的混合物，其中灯盏乙素（5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷）含量占95%以上［3］。现代药理研究表明：灯盏花素能有效舒张脑血管，降低脑血管阻力，增加脑血流量；有抗凝血、抗血栓形成及促进纤溶活性作用；此外对肝肾也有保护作用［4-6］。临床上主要用于治疗中风后遗症，冠心病，心绞痛等。目前，国内有多个药厂生产的灯盏花素片，质量是否全部符合要求，是临床安全有效应用的基础。本实验采用高效液相法对国内7个厂家共14个批号的灯盏花素片进行含量测定，并结合崩解时限和硬度，考察国内不同厂家灯盏花素片质量。

1 仪器与材料

1.1 试验仪器

Agilent 1100（美国）高效液相色谱仪：G1311A型泵，G1315型DAD检测器；RUC-5200型超声波清洗机（上海睿祺电子设备有限公司）；梅特勒-托利多精密电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；YPD-200C型片剂硬度仪（上海黄海药检仪器有限公司）；LB-LD型崩解时限测定仪（上海黄海药检仪器有限公司）。

1.2 试剂与试药

试剂：乙腈（色谱纯，默克，德国），水为重蒸水，甲醇（分析纯，上海实验试剂有限公司）。磷酸（含量≥85%，广州化学试剂厂）。试药：灯盏乙素对照品（HPLC检测纯度为100%，中国药品生物制品检定所，批号：110842-200605）供含量测定用；灯盏花素片样品均为市售成药（A1湖南康普制药有限公司，批号080111；A2湖南康普制药有限公司，批号080501；B1昆明制药集团股份有限公司，批号08AD；B2昆明制药集团股份有限公司，批号09AF；C1昆明兴中制药责任有限公司，批号20080902；C2昆明兴中制药责任有限公司，批号20090102；C3昆明兴中制药责任有限公司，批号20090302；D1云南生物谷灯盏花药业有限公司，批号20080502；D2云南生物谷灯盏花药业有限公司，批号20090101；D3云南生物谷灯盏花药业有限公司，批号20090401；E1云南省玉溪望子隆生物制药有限公司，批号20080201；E2云南省玉溪望子隆生物制药有限公司，批号20090201；F1广东彼迪药业有限公司，批号20081101；G1广东环球制药有限公司，批号081002）。

图1 空白溶剂（A）、对照品（B）和供试品（C）HPLC色谱图

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的灯盏乙素对照品10.16 mg，置50 mL量瓶中，加入适量的甲醇超声溶解，冷至室温后补充甲醇至刻度，摇匀，即得浓度为203.2 μg/mL灯盏乙素对照品储备液。精密量取灯盏乙素对照品储备液1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得灯盏乙素对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取灯盏花素片10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于灯盏花素20 mg），置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min［2］，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤。精密量取续滤液0.5 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤即得。

同法制备不含灯盏花素片的空白溶液。

2.3 HPLC色谱条件及系统适应性试验

2.3.1 HPLC色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸 =23∶77（V/V）；流速：0.8 mL/min；柱温：35℃；检测波长：335 nm；进样量：10 μL。

2.3.2 专属性试验

分别吸取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液，按HPLC色谱条件检测，色谱图见图1。在本色谱条件下，供试品中的灯盏乙素主峰与其他杂质峰分离度大于1.5，对称因子为0.99，按灯盏乙素峰计算理论塔板数为14 000，表明本分析方法专属性好。

2.3.3 线性关系考察、最低检测限和最低定量限

分别精密吸取2.1项下灯盏花乙素对照品储备液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mL 置10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为10.16、20.32、30.48、40.64、60.96、81.28 μg/mL 的系列对照品溶液，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，吸取续滤液，按HPLC色谱条件测定其峰面积。以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程：A=21.130C－5.398 0，R2=0.999 9，表明灯盏乙素在 10.16～81.28 μg/mL范围内，线性关系较好。

取浓度为10.16 μg/mL灯盏乙素对照品溶液，稀释至适当浓度，按HPLC色谱条件测定。当S/N≥3时，即为最低检测浓度；当S/N≥10时，即为最低定量浓度。本色谱条件下最低检测限为0.010 16 μg/mL，最低定量限为 0.033 87 μg/mL。

2.3.4 精密度考察

取2.3.3 项下的低（10.16 μg/mL）、中（40.64 μg/mL）、高（81.28 μg/mL）3 种浓度的对照品溶液，重复进样6次，计算日内精密度。连续3 d进样6次，计算日间精密度。结果见表1。灯盏乙素低、中、高3种浓度的日内、日间RSD<1%，表明该分析条件下精密度较好。

表1 日内及日间精密度结果（n=6）

2.3.5 重复性试验

按2.2项下供试品的制备方法，对同一批样品（A1），制备6份供试品溶液，按HPLC色谱条件检测。通过标准曲线分别计算灯盏乙素含量（mg/片）及RSD。结果见表2。灯盏乙素的平均含量为（16.21±0.33）mg/片，RSD=2.02%，表明该方法重复性良好。

表2 重复性结果（n=6）

2.3.6 稳定性试验

按2.2项下方法操作制备供试溶液（A1），室温放置，分别于 0、2、4、6、8 h，按 HPLC 色谱条件检测含量（n=3），计算RSD，考察供试品中灯盏乙素的稳定性。结果见表3。8 h内灯盏乙素含量RSD=0.65%，表明供试品溶液中灯盏乙素含量较为稳定。

表3 供试品溶液中灯盏乙素稳定性结果（n=3）

2.3.7 回收率试验

精密称取已知含量的样品（A1）细粉适量，共9份，分置50 mL量瓶中，分别精密加入灯盏乙素对照品适量（约相当于厂家标示量灯盏乙素含量的80%，100%，120%）各3份，按2.2项下方法制备供试品液，按HPLC色谱条件检测，计算灯盏乙素的回收率。结果见表4。低、中、高3种灯盏乙素加入量的平均回收率均在99.69% ～101.26%之间，且RSD≤3%，表明回收率较好。

表4 回收率的试验结果（n=3）

2.4 样品含量测定

取各厂家不同批号的灯盏花素片供试品按2.2项下方法操作，制备供试品溶液，按HPLC色谱条件检测，计算灯盏乙素含量（mg/片）。灯盏乙素含量在15～20 mg/片之间，各厂家的灯盏花素片中灯盏乙素含量与标示量相比均偏低。具体结果见表5。

表5 各厂家灯盏花素片中灯盏乙素含量、崩解时限及硬度测定结果（n=3）

2.5 崩解时限的测定

照《中国药典》2005年版一部附录ⅫA崩解时限检查法检查灯盏花素片的崩解时限。将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架上，浸入1 000 mL烧杯中，并调节吊篮位置，使下降时筛网距烧杯底部25 mm，烧杯内盛有温度为（37±1）℃的水，调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下15 mm处。取供试品6片，分别置于上述吊篮的玻璃管内，加挡板，开始进行崩解时限检查，记录崩解时间。结果见表5，各厂家各批号的灯盏花素片崩解时限均小于30 min，符合卫生部颁标准。

2.6 硬度的测定

取各厂家不同批号的灯盏花素片供试品，利用片剂硬度仪检测供试品的硬度。结果表明：各厂家各批号的灯盏花素片硬度差异较大，具体结果见表5。

2.7 统计分析

对灯盏乙素的含量进行方差分析，各厂之间的具体方差分析见表6，各厂家各批号灯盏乙素占标示量的百分含量的方差分析见表7。结果表明，不同厂家之间，以及不同批号间均存在着差异。

3 讨论

3.1 关于灯盏花素片中灯盏乙素的含量测定方法时有报道，本实验建立的灯盏乙素检测方法具有分析时间短、灵敏度高、重复性好，准确度高等特点，可用于本制剂的质量控制。

表6 各厂家灯盏花素片中灯盏乙素占标示量百分含量方差分析

表7 各厂家各批号灯盏花素片中灯盏乙素占标示量百分含量方差分析

3.2 本实验采用了卫生部颁标准中规定的灯盏乙素提取方法，即甲醇超声提取法。含量测定之前曾比较了提取时间的影响，超声15 min，20 min，30 min的提取结果基本相同，说明30 min的提取不会破坏灯盏乙素。为保证提取完全，超声时间定为30 min，这与部颁标准一致。

3.3 市售灯盏花素片的崩解时限均符合药典要求，但是各厂家产品的崩解时限和硬度差异较大，其中A1硬度偏小，取药时即发生碎片现象。

3.4 根据卫生部颁标准要求，灯盏花素片中灯盏乙素的含量应为15～20 mg/片。实际测定的7个厂家共14个批号的灯盏花素片的含量均符合卫生部部颁标准的要求。但不同厂家生产的灯盏花素片中灯盏乙素与标示量相比普遍偏低，且有些厂家之间含量差异显著。这可能使得在临床应用该制剂时，产生药效差异。灯盏花素片中灯盏乙素为发挥药效的主要成分，为了进一步提高灯盏花素片的疗效和质量，作者建议以灯盏乙素的含量确定投药量，保证有效成分含量在一定范围内，防止含量波动过大，造成临床疗效的不稳定。

［1］张卫东，陈万生，王永红，等.灯盏花黄酮苷化学成分的研究［J］.中草药，2000，31（8）：565-566.

［2］中华人民共和国卫生部药品标准WS3-B-2516-97［S］.

［3］崔建梅，吴 松.灯盏花素的研究进展［J］.天然产物研究与开发，2003，15（3）：255-258.

［4］王丽娟，朱坤杰，邱丽萍，等.灯盏花素对动物学习记忆能力的影响［J］.中国药业，2000，9（1）：26-27.

［5］王 影，杨样良，刘 宏，等.灯盏花素抗凝血作用的研究［J］.中药材，2003，26（9）：656-658.

［6］王 文，行 利，李军昌，等.灯盏花素注射液对糖尿病肾病患者血液流变学的影响［J］.第四军医大学学报，2003，24（5）：411.

R927.2

A

1001-1528（2010）07-1147-04

2009-11-04

邹 龙（1969－），男，博士，副教授，主要从事中药新制剂与新剂型研究。Tel：（0731）88458230 E-mail：zoulong100@yahoo.com.cn