息喘丸质量标准的研究

谢仕伟， 李国荣， 梁少强， 杨光英， 杨 乐， 林慧菁

（广东省东莞市药品检验所，广东东莞 523109）

息喘丸质量标准的研究

谢仕伟， 李国荣， 梁少强， 杨光英， 杨 乐， 林慧菁

（广东省东莞市药品检验所，广东东莞 523109）

息喘丸；苦杏仁；胡颓子叶；甘草；TLC；盐酸麻黄碱；HPLC

目的：提高息喘丸的质量标准。方法：增加了苦杏仁、胡颓子叶和甘草的薄层色谱鉴别，以及盐酸麻黄碱的HPLC法含量测定。盐酸麻黄碱的色谱条件：色谱柱为Agilent TC-C18反相柱（5 μm×250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈-0.3%三乙胺水溶液（4∶96，磷酸调至pH 2.5），流速为1.0 mL/min，检测波长为205 nm，柱温为35℃。结果：薄层色谱鉴别中，供试品在与苦杏仁对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点；在与胡颓子叶、甘草对照药材色谱相应的位置上，紫外光灯（365 nm）下分别显相同颜色的荧光斑点。HPLC法含量测定中，盐酸麻黄碱在0.066 2～1.655 μg（r=1.00）呈良好的线性关系，平均加样回收率为99.2%（RSD=0.82%）。结论：所建立方法简便、准确、专属性强、重复性好，能有效的控制息喘丸的质量。

息喘丸收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第20册［1］，由无患子根、墨旱莲、苦杏仁（去油）、五指柑、甘草、胡颓子叶和党参等十四味中药和盐酸麻黄碱组成，功能为益气养阴，清肺平喘，止咳化痰，临床上用于气阴不足，痰热阻肺，喘息气短，吐痰黄腻，咽干口渴和慢性支气管炎等。但该标准只有盐酸麻黄碱的薄层鉴别项，尚无药材的定性和含量测定指标。为有效地控制该制剂的质量，本实验建立了苦杏仁、胡颓子叶和甘草的薄层色谱法（TLC）鉴别，以及采用高效液相色谱法（HPLC）对有效成分盐酸麻黄碱进行含量测定。提高后的质量标准方法操作简便、重现性好、专属性强，结果科学准确，适合作为本品的质量标准。

1 仪器和试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（美国Agilent公司，型号：Agilent 1200系列），电子天平（Sartorius BP211D），超声波清洗器（美国Branson公司，型号B5510E，频率40 kHz）。

1.2 实验材料

各对照药材和对照品均由中国药品生物制品检定所提供，其中盐酸麻黄碱对照品批号为110714-9202；息喘丸（批号：J00001，J00002，J00003，KF0001 均由广东中一药业有限公司生产并提供）；乙腈为色谱纯（天津市四友生物医学技术有限公司），水为超纯水，其他试剂为分析纯。硅胶G（薄层色谱用，Merck）。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 苦杏仁 取本品适量，研细，称取约5 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液与适量柱层析用硅胶G混合均匀，蒸干，得到的干燥粉末直接加在层析柱（内径2.0 cm，长度15 cm，湿法装柱）上，用石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（1∶1）100 mL洗脱，弃去洗脱液，再用乙酸乙酯100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，滤过，即得供试品溶液。另取苦杏仁对照药材0.5 g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）为展开剂，展开，晾干，喷以10%磷钼酸硫酸溶液，105℃下加热至斑点清晰，置日光下观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点，阴性样品无此斑点，见图1。

2.1.2 胡颓子叶 取本品适量，研细，称取约7 g，置具塞锥形瓶中，加入乙酸乙酯20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2 mL溶解，滤过，即得供试品溶液。另取胡颓子叶对照药材1 g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷－三氯甲烷-甲醇（3∶5∶1）为展开剂，展开，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，晾干，于105℃加热数分钟后置紫外光灯（365 nm）下观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点，阴性样品无此斑点，见图2。

图1 苦杏仁TLC薄层色谱图

图2 胡颓子叶TLC薄层色谱图

2.1.3 甘草 取“胡颓子叶”项下的供试品溶液，另取甘草对照药材0.5 g，水煎煮1 h，过滤，滤液蒸干，残渣加入乙酸乙酯20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加乙酸乙酯2 mL溶解，滤过，即得对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷－三氯甲烷－甲醇（4∶5∶1）为展开剂，展开，晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，晾干，于105℃加热数分钟后置紫外光灯（365 nm）下观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性样品无此斑点，见图3。

图3 甘草TLC薄层色谱图

2.2 盐酸麻黄碱的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent TC-C18反相柱（5 μm×250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.3%三乙胺水溶液（4∶96，磷酸调至pH 2.5）；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；检测波长：205 nm；进样量：10 μL。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算不得低于3 000，盐酸麻黄碱峰与相邻的其他峰的分离度应大于1.5。

2.2.2 盐酸麻黄碱对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，用流动相溶解（必要时超声处理）制成每1 mL 含100 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率为250 W，频率为40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 专属性试验 取按处方比例及制法制备的缺盐酸麻黄碱阴性样品，按2.2.3项下方法制备阴性对照溶液。精密分别吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，按上述色谱条件测定，结果阴性对照无干扰见图4。

图4 HPLC色谱图

2.2.5 线性关系 分别精密吸取同一份对照品溶液（浓度为66.2 μg/mL）1、2、5、10、15、20、25 μL 注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以进样量（X）作为横坐标，峰面积（Y）作为纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程：Y=156.4X－1.934，r=1.00。结果表明，盐酸麻黄碱在0.066 2～1.655 μg的范围内呈现良好线性关系。

2.2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于配制后 0、4、8、12、24、48 h 进样 10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，结果盐酸麻黄碱峰面积的RSD为0.14%（n=7），表明供试品溶液在48 h内稳定。

2.2.7 精密度试验 取同一份盐酸麻黄碱对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，测定，计算盐酸麻黄碱峰面积的RSD为0.35%，结果表明精密度良好。

2.2.8 重复性试验 取同一批号的息喘丸按供试品溶液制备方法平行制备6份，测定盐酸麻黄碱的峰面积，计算盐酸麻黄碱含量，结果其RSD为1.0%，表明该方法具有良好的重复性。

2.2.9 加样回收率试验 分别精密称取盐酸麻黄碱对照品0.021 50 g，置20 mL量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，即得对照品贮备液（浓度为1.075 mg/mL）。取同一供试品（批号：KF0001；含盐酸麻黄碱9.10 mg/g）6份，按表1加入适量本品和盐酸麻黄碱对照品，置具塞锥形瓶中，按上述供试品制备方法和色谱条件测定，计算。结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）

2.2.10 样品测定 分别取3批不同批号的息喘丸，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，取对照品溶液与供试品溶液，分别进样10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，计算盐酸麻黄碱的含量及RSD。结果见表2。

表2 样品测定结果（n=4）

3 讨论

3.1 本实验经过反复比较供试品提取方法和展开条件，优选了正文的TLC条件对本品中苦杏仁、胡颓子叶和甘草进行鉴别，结果表明灵敏度高，专属性强，鉴别效果清晰，且操作较简便。

3.2 取一定浓度的对照品溶液，照分光光度法（中国药典2005年版一部附录V A）在200～400 nm下扫描。结果显示，盐酸麻黄碱在（205±2）nm处有最大吸收，故选择205nm为测定波长。

3.3 药典收载“麻黄”含量测定项下的流动相为乙腈-0.1%磷酸（9∶87）［2］，发现该条件下盐酸麻黄碱的峰形和分离度均不佳；据文献报道［3-5］，流动相中加入扫尾试剂三乙胺和适量磷酸，盐酸麻黄碱的峰形尖锐对称，且与其他相邻杂质达到基线分离。最后，考虑到保留时间的适中和稳定等其它因素，把流动相确定为乙腈-0.3%三乙胺水溶液（4∶96，磷酸调至pH 2.5）。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第20册）［S］.1998：267.

［2］中国药典［S］.一部.2005：223.

［3］邓开英，胡太德.RP-HPLC测定镇咳宁糖浆中盐酸麻黄碱的含量［J］. 华西药学杂志，2004，19（3）：230-231.

［4］郭德铭，蒋 琼，陈 波.HPLC测定小儿化痰止咳颗粒中的盐酸麻黄碱［J］. 华西药学杂志，2008，23（5）：598-599.

［5］吴龙云，刘 元，宋志钊，等.HPLC法测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量［J］.中国民族民间医药杂志，2009，18（9）：22-23.

R927.2

B

1001-1528（2010）07-1257-04

2009-06-02

谢仕伟（1981－），男，硕士，主管药师，研究方向：天然药物分析。Tel：13826438012 E-mail：ken181@21cn.com