千斤脑康宁胶囊治疗脾肾两虚、脑髓不足之痴呆药效学研究

刘 元， 李星宇， 宋志钊， 李友娣， 何 飞

（广西中医药研究院，广西南宁 530022）

千斤脑康宁胶囊治疗脾肾两虚、脑髓不足之痴呆药效学研究

刘 元， 李星宇， 宋志钊， 李友娣， 何 飞

（广西中医药研究院，广西南宁 530022）

千斤脑康宁胶囊；大鼠、小鼠痴呆模型；抗急性脑缺氧；阳虚、脾虚模型

目的：观察千斤脑康宁胶囊的治疗脾肾两虚、脑髓不足之痴呆药效学作用。方法：采用三氧化铝致大鼠、小鼠痴呆、30%乙醇致小鼠记忆再现障碍、断头致小鼠急性脑缺氧、氢化可的松致小鼠阳虚及利血平致小鼠脾虚等模型，观察千斤脑康宁胶囊的治疗老年痴呆药效学作用。结果：千斤脑康宁胶囊能明显增强痴呆模型大鼠、小鼠及记忆再现障碍小鼠的学习记忆能力；明显延长急性脑缺氧小鼠大脑存活时间；并能明显增强阳虚、脾虚模型小鼠体质。结论：千斤脑康宁胶囊具有抗痴呆、抗急性脑缺氧、增强阳虚、脾虚模型小鼠体质作用。

千斤脑康宁胶囊是我研究院根据广西地方民族经验方，经筛选后进行研制的中草药制剂，主要由千斤拔、扶芳藤、鹿角胶、山萸肉等中药组成，具有补肾益脾，活血化痰，健脑生髓之功效，对脾肾两虚，痰瘀阻络，脑髓不足所致之痴呆疗效显著。根据其作用特点，我们从抗痴呆、抗急性脑缺氧、增强阳虚、脾虚模型小鼠体质等方面，观察千斤脑康宁胶囊的活性作用，为临床用于治疗老年痴呆提供药效学资料。

1 材料

1.1 动物

昆明种小鼠，清洁级；Wistar大鼠，SPF级，均由广西医科大学实验动物中心提供。动物合格证号：SCXK（桂）2003-0003。

1.2 药品

千斤脑康宁胶囊，批号061008，由南宁市冠峰制药有限公司提供，0.5 g/粒，每粒胶囊相当于1.22 g生药。脑复康片，0.4 g/片，批号：20050203，由广西南宁市制药企业集团公司出品。参芪片，0.25 g/片，批号：20040914，由吉林制药股份有限公司出品，以上药品试验时均用蒸馏水配制成所需浓度药液供动物灌胃给药。

2 方法与结果

2.1 千斤脑康宁胶囊对痴呆大鼠、小鼠学习与记忆的影响

2.1.1 三氯化铝致大、小鼠痴呆模型复制方法［1-2］：大鼠以戊巴比妥钠32 mg/kg（小鼠44 mg/kg）腹腔麻醉，剪去皮肤，暴露头骨，于左侧脑室部位（前囟后1 mm，中线旁开2 mm处）埋置外径1.38 mm、内径为0.66 mm的外套管，深度为4 mm（小鼠为2.5 mm），以牙托粉和502胶水固定，0号大头针制成活套内芯封闭管口。造模给药时，拔除内芯，以注射针头经外套管向脑室内注射，深度约5 mm（小鼠约3.5 mm）。从手术日起，连续8 d im青霉素钠2万u/只/d（小鼠0.8万u/只/d），以防感染。手术后第4天起，每鼠每天脑室注射0.5%三氯化铝10 μL（小鼠2 μL），连续5 d。手术对照组脑室折射等容量人工脑脊液。

2.1.2 对痴呆大鼠学习与记忆的影响（Y型电迷路法）：选用240～280 g的♀性大鼠56只，随机分为7组，每组8只。分组后给药或给等体积蒸馏水，给药剂量见表1。每天灌胃1次，连续19 d。第15天至19天，每天给药后1 h，用Y型电迷路法测试大鼠的空加学习记忆能力。

电迷路法［3］：大鼠在迷路仪内的一臂（起步区）静置2 min，按两臂交替法给予灯光条件刺激5 s，继而施以电击（控制电压60 V）至其逃避至安全区，灯光继续作用15 s，然后熄灯15 s，接着给予第2次测验。每天依次重复训练15次，记录正确反应次数。实验规定，大鼠受电击后，20s内从起步区直接逃至安全区视为“正确反应”，其余均属“错误反应”（包括电击前自动逃离安全区，5 s内不知返回等情况）。连续测试5 d，每天数值换算成正确反应百分率并组内平均，组间比较，结果见表1。

结果表明，千斤脑康宁胶囊可明显提高训练正确反应百分率。

2.1.3 对痴呆小鼠学习与记忆的影响：选用27～37 g的♂性小鼠70只，随机分为7组，每组10只。分组后给药或给等体积蒸馏水，给药剂量见表2～4。每天灌胃1次，连续26 d。第16，18天及26天给药后1 h，用避暗法、跳台法及Y型水迷路法测定千斤脑康宁胶囊对痴呆小鼠学习与记忆的影响。

避暗法［4］：将小鼠背对洞口放入明室，小鼠通过洞口进入暗室，受电击后（电压36v）又逃回明室，训练5 min，24 h（给药后1 h），再将小鼠放入明室，记录自放入至第1次进入暗室的时间为潜伏期及5min内进入暗室受电击的次数。5 min内未钻洞者，潜伏期按300 s计算，结果见表2。

表1 千斤脑康宁胶囊对痴呆大鼠学习记忆的影响（Y型电迷路法n=8）

跳台法［4］：将小鼠置入跳台仪中平台上，先适应环境3 min，然后通电（电压36v），当小鼠跳下平台受电击后会重新跳上平台，逃避电击。跳下时以小鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应，训练5 min，并记录5 min内触电次数（错误次数），24 h后（给药后1 h）再将小鼠置于平台上，记录自放入至第一次跳下平台受电击的时间为潜伏期及5 min内跳下平台受电击的次数（错误次数）。5 min内未跳下平台者，潜伏期按300 s计算。结果见表3。

表2 千斤脑康宁胶囊对痴呆小鼠学习记忆的影响（避暗法）（x ± s，n=10）

表3 千斤脑康宁胶囊对痴呆小鼠学习记忆的影响（跳台法）（x ± s，n=10）

Y型水迷路法［3］：将小鼠置于Y型迷路仪中训练（水深10 cm），水温（25±0.5）℃，将小鼠尾对Y型迷路仪叉口，以其在15 s内从入水区直接抵达平台为正确反应，否则作为错误，小鼠抵达平台后休息15 s再重复训练，每只小鼠学习（训练）10次，记录正确反应次数并换算成正确反应百分率。24 h（给药后1 h）再次同法测试记忆情况。结果见表4。

结果表明，千斤脑康宁胶囊能使小鼠记忆潜伏期明显延长，错误次数明显减少，学习和记忆正确反应百分率明显提高。

2.2 千斤脑康宁胶囊对30%乙醇致小鼠记忆再现障碍的影响（避暗法）

选用体重18～22 g的♂性小鼠60只，随机分为6组，每

组10只。训练前小鼠灌胃给药，给药剂量见表5。每天灌胃给药1次，连续11 d。末次药后1h开始训练（避暗法），训练时小鼠钻洞1次后即取出。24 h后测试。测试前30 min灌胃给30%乙醇15 mL/kg，正常对照组给等容量蒸馏水，记录钻洞潜伏期及5 min内钻洞次数（错误次数）。实验电压为36v，结果见表5。

表4 千斤脑康宁胶囊对痴呆小鼠学习记忆的影响（Y型水迷路法）（x ± s，n=10）

表5 千斤脑康宁胶囊对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响（避暗法x ± s，n=10）

结果表明，千斤脑康宁胶囊能使记忆再现障碍小鼠钻洞潜伏期明显延长，错误次数明显减少。

2.3 千斤脑康宁胶囊对痴呆小鼠急性脑缺氧的影响［4］

小鼠痴呆模型造模方法同2.1项，然后选用18～22 g的♂性小鼠70只，随机分为7组，每组10只。给药剂量见表6。每天灌胃给药1次，连续30 d。第30天给药后1 h，用断头台沿耳根部快速切断，以张口呼吸停止为指标记录小鼠大脑存活时间。结果见表6。

表6 千斤脑康宁胶囊对痴呆小鼠急性脑缺氧的影响（±s，n=10）

表6 千斤脑康宁胶囊对痴呆小鼠急性脑缺氧的影响（±s，n=10）

t检验，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别 剂量/（粒/kg）大脑存活时间/s正常对照组20.5±2.42手术对照组 21.1±1.67模型组 20.6±2.32脑复康片 0.3 23.6±2.72*千斤脑康宁胶囊 3.0 24.0±1.70**1.5 22.6±1.35*0.75 21.3±1.89

结果表明，千斤脑康宁胶囊能明显延长小鼠大脑存活时间，对小鼠急性脑缺氧有一定的保护作用。

2.4 千斤脑康宁胶囊对阳虚小鼠游泳时间的影响（抗疲劳实验）［3］

选用18～22 g♂性小鼠60只，随机分为6组，每组10只。给药剂量见表7。每天灌胃给药1次，连续9 d。在给药同时，小鼠皮下注射氰化可的松30 mg/kg（正常对照组除外），第10天ig给药后1 h（不再皮下注射氰化可的松），进行抗疲劳实验，将每一组的动物放入一游泳箱内（体积52 cm×40 cm×22 cm，水深20 cm，水温23℃ ±0.5℃），6组动物同时进行实验。小鼠不负重，当小鼠头部沉入水中15 s不能浮出水面者即为体力耗竭，记录小鼠入水起至体力耗竭时止所需的时间为小鼠游泳时间。结果见表7。

表7 千斤脑康宁胶囊对阳虚小鼠游泳时间的影响（x ± s，n=10）

结果表明，千斤脑康宁胶囊能使阳虚小鼠游泳时间明显延长。

2.5 千斤脑康宁胶囊对脾虚小鼠游泳时间的影响（抗疲劳实验）［3］

选用18～22 g♂性小鼠60只，随机分为6组，每组10只。给药剂量见前实验。每天灌胃给药1次，连续9 d。在给药同时，小鼠皮下注射利血平0.2 mg/kg（正常对照组除外），末次药后4.5 h进行抗疲劳实验，将每一组的动物放入一游泳箱内（体积52 cm×40 cm×22 cm，水深20 cm，水温23℃ ±0.5℃），6组动物同时进行实验。小鼠不负重，当小鼠头部沉入水中15 s不能浮出水面者即为体力耗竭，记录小鼠入水起至体力耗竭时止所需的时间为小鼠游泳时间。结果见表8。

表8 千斤脑康宁胶囊对脾虚小鼠游泳时间的影响（x ± s，n=10）

结果表明，千斤脑康宁胶囊能使脾虚小鼠游泳时间明显延长。

3 讨论

阿尔茨海默病（Alzheimer’Disease，AD）亦称老年性痴呆症。是老年人中最常见的神经退行性疾病之一［5］。中医学认为痴呆为神态病，其病倦在脑：但灵机、记性，与脑髓不足有十分密切关系，亦与心脾肾等脏腑功能失调有关。盖“肾为先天之本”，肾主骨生髓而通于脑，年老之人，肾精亏虚，脑髓失冲，神机失控而迷惑愚钝，动作笨拙，反应迟缓；“脾为后天之本，气血生化之源”，脾胃虚弱，健运失司，气血生化之源不足，气血亏虚，精亏血少，少以养心，亦无以上充于脑，致使髓海不足，心脑失所滋养，故神不守舍，产生痴呆诸症。病因病机多因人至老年，体力渐衰，脾肾亏虚，精血虚少，脑髓不足所致。千斤脑康宁胶囊是为脾肾两虚，痰瘀阻络，脑髓不足之痴呆症而设，以补肾益脾，活血化痰，健脑生髓为法。实验结果说明，千斤脑康宁胶囊能明显增强痴呆模型大鼠、小鼠及记忆再现障碍小鼠的学习记忆能力；明显延长急性脑缺氧小鼠大脑存活时间；而且对阳虚、脾虚模型小鼠体质有明显增强作用，体现了中医整体治疗的特色。

［1］徐叔云.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1991：613.

［2］李 玲，陈汝筑.脑室注射氯化铝对小鼠学习记忆功能的影响［J］.贵阳医学院学报，1998：23（3）272.

［3］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：176，174，331，149.

［4］陈 奇.中药药理研究方法学［M］.上海：人民卫生出版社，1993：892，894，783.

［5］肖 飞.Alzheimer Disease病因研究现状［J］.中风与神经疾病杂志，2008：25（4）510-512.

R285.5

B

1001-1528（2010）07-1220-04

2009-06-12

广西壮族自治区科技攻关项目（桂科攻0537018-13）

刘 元（1965－），女，副研究员，研究方向：中药药理学研究及新药开发。Tel：（0771）5877473 E-mail：liuyuan0821@vip.163.com