青藤碱肠溶片在Beagle犬体内药动学研究

陈万一，何海霞，李秋波，冯晓科，康纪平，周远大（1.重庆市肿瘤研究所，重庆市 40000；.重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室，重庆市 400016；.四川省养麝研究所，都江堰市 61180）

青藤碱（Sinomenine）具有抗炎、镇痛、解热和免疫调节[1]的作用。青藤碱肠溶片临床上用于治疗类风湿关节炎，疗效较好[2]。其在大鼠、家兔体内的药动学研究已有报道[3，4]，而在Beagle犬体内药动学研究尚未见文献报道。为此，本文建立了以高效液相色谱（HPLC）法测定青藤碱肠溶片给药后在Beagle犬体内血药浓度的方法，并进行了药动学研究。

1 材料

1.1 仪器

1100 HPLC仪（美国Agilent公司）；pHS-3C酸度计（上海精密科学仪器有限公司）；VXH-3型快速混合器（上海跃进医疗器械厂）；B160A型医用低速离心机（河北省安新县白洋离心机厂）；BP61型电子天平（德国Startorious公司）。

1.2 试药

青藤碱肠溶片（商品名为正清风痛宁片，西安利君制药有限责任公司，批号：0707291，规格：每片20 mg）；内标去水吗啡注射液（沈阳第一制药厂，批号：20020613，规格：5 mg∶mL－1）；青藤碱对照品（西安赛邦医药科技有限公司，批号：20070402，纯度：98%）；二氯甲烷为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

1.3 动物

健康Beagle犬8只，体质量（10±0.8）kg，♀♂各半，四川养麝研究所提供，质量合格证号和环境设施合格证号分别为川实动管第63号和第64号。

2 方法与结果

2.1 血药浓度测定方法的建立

2.1.1 色谱条件。色谱柱为Phenomenex Gemini C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.01 mol·L－1磷酸二氢钠-三乙胺（55∶45∶0.1，调pH至7），流速为0.8 mL·min－1，内标为去水吗啡，检测波长为262 nm，柱温为30℃，进样量为50 μL。

2.1.2 专属性试验。在选定的色谱条件下，取青藤碱对照品+内标溶液、空白血浆、空白血浆+青藤碱对照品+内标及Beagle犬给药1 h后血浆样品，进样分析，色谱见图1。

由图1可见，青藤碱与内标峰形尖锐，与血浆中内源性物质及其它杂质分离良好，保留时间分别为10、13 min。

2.1.3 青藤碱对照品溶液制备。精密称取青藤碱对照品适量，用甲醇溶解并定容，制备成300 μg·mL－1的贮备液，于4 ℃保存。临用前，用犬空白血浆按倍数稀释法稀释至所需浓度，即得青藤碱的标准工作液。

2.1.4 内标溶液制备。取1支去水吗啡注射液，加甲醇制备成200 μg·mL－1的贮备液，于4 ℃保存。临用前，加水稀释成40 μg·mL－1，即得内标工作液。

2.1.5 样品处理。取血浆样品0.4 mL，加入内标50 μL（40 μg·mL－1），混合均匀，加入二氯甲烷4 mL，漩涡混匀1 min后3500 r·min－1离心5 min，静置分层。取二氯甲烷层清液，50℃水浴中氮气吹干，流动相100 μL复溶，每次进样50 μL。

图1 高效液相色谱图A.青藤碱对照品+内标；B.空白血浆；C.空白血浆+青藤碱对照品+内标；D.血浆样品；1.青藤碱；2.内标Fig 1 HPLC chromatographyA.sinomenine control+internal standard；B.blank plasma；C.blank plasma+sinomenine control+internal standard；D.plasma sample；1.sinomenine；2.internal standard

2.1.6 标准曲线、线性范围和最低定量浓度。分别取青藤碱贮备液适量及犬空白血浆，制成浓度为90、45、22.5、4.5、0.45、0.045、0.0075 μg·mL－1的青藤碱血浆样品，按“2.1.5”项下方法处理，进样，所得数据以血浆中青藤碱的浓度X对青藤碱与内标的峰面积比值Y进行线性回归，得血浆中青藤碱的标准曲线为Y＝0.3920X+0.7052（r＝0.9991）。结果表明，青藤碱检测浓度在0.0075～90 μg·mL－1范围内线性关系良好，最低定量浓度为0.0075 μg·mL－1（RSD＝9.23%，n＝5）。

2.1.7 回收率和精密度。取青藤碱贮备液适量及犬空白血浆，制成高、中、低浓度（45、4.5、0.045 μg·mL－1）样品，按“2.1.5”项下方法处理，评价本法的方法回收率与萃取回收率（含药血浆经样品处理所得测定值与同时用流动相配制的同浓度标准溶液测定值计算萃取回收率）及日内精密度（每个浓度同日内测定5次）、日间精密度（每个浓度连续测5 d，每天测1次），结果见表1。

表1 回收率及精密度试验结果（n＝5）Tab 1 Recovery rate and precision tests（n＝5）

2.2 给药及血药浓度测定

选取8只Beagle犬，♀♂各半，实验前禁食12 h后，根据临床人用剂量，于次日晨8时空腹灌服10 mg·kg－1青藤碱肠溶片，分别于给药后0、15、30、60、90、120、240、480 min，从前肢静脉取血2 mL，分离血浆，按“2.1.5”项下方法处理进样，以青藤碱峰面积与内标峰面积之比值代入标准曲线方程计算血药浓度，平均药-时曲线见图2。

2.3 药动学参数

采用3p97计算机软件选择最佳房室模型，结果Beagle犬按10 mg·kg－1量口服青藤碱肠溶片后在体内的血药浓度-时间曲线经拟合后为一室开放模型，计算求得其药动学参数见表2。

图2 犬单剂量口服10 mg·kg－1青藤碱肠溶片后的平均血药浓度-时间曲线Fig 2 Mean plasma concentration-time curves in dogs after administration of single oral dose of 10 mg·kg－1sinomenine enteric tablets

表2 青藤碱肠溶片在犬体内的药动学参数（n＝8）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of sinomenine enteric tablets in dogs（n＝8）

3 讨论

在文献[5，6]报道的测定青藤碱浓度的HPLC法中，主要采用氨基比林或者氯霉素作为内标，但在本实验室条件下，效果均不理想。笔者经多次预试验及改进[3]，最终采用去水吗啡为内标，选取流动相甲醇-0.01mol·L－1磷酸二氢钠的比例为55∶45，结果取得了良好的分离分析效果。

已有文献[2～4]报道了口服青藤碱后在大鼠、家兔体内的药动学参数，本实验研究结果表明，Beagle犬服用青藤碱肠溶片后血药浓度迅速升高，血药浓度-时间曲线经拟合后符合一室开放模型，且根据CL/F（s）值（（0.36±0.12）L·min－1）和tmax值（（69.66±16.41）min），提示本品吸收及消除均较快，为其临床用药提供了依据。

[1]孔庆峰，李 军.青藤碱凝胶的制备及质量控制[J].中国中药杂志，2005，30（20）：1573.

[2]陈顺乐，鲍春德，陈湘君，等.利君正清风痛宁片治疗类风湿关节炎的疗效观察[J].中国药房，2000，11（3）：126.

[3]张斯汉，周远大，何海霞.正清风痛宁肠溶片的生物等效性研究[J].中国中药杂志，2008，33（6）：684.

[4]刘启德，梁美蓉，欧卫平，等.青藤碱时辰药代动力学研究[J].中药新药与临床药理，1995，6（1）：24.

[5]杨广德，刘军保，王志军，等.反相高效液相法测定血浆中青藤碱的含量[J].中国药学杂志，1993，28（3）：152.

[6]张先洲，周延安，罗顺德，等.青藤碱凝胶剂的质量标准研究[J].医药导报，2003，22（8）：571.