参降汤对心肌缺血再灌注模型的影响研究*

蔡少峰 张新凤 冯则一 郧阳医学院附属东风总医院 (十堰 442008)

参降汤是导师张新风主任多年从事中医心血管病防治的临床经验方,由党参、降香、水蛭、红花、苏木、香附、徐长卿等组成。主要用于冠心病之心绞痛、心律失常及介入治疗后心功能低下者,在临床上取得较好的疗效。本实验观察参降汤对心肌缺血再灌注模型大鼠的影响,现报道如下:

1 材料 1.1 实验动物 健康雄性 Wistar大鼠,体重200士 20g,由郧阳医学院提供,合格证号:SCXK(鄂 )2003-0005。

1.2 观察药品 参降汤主要由党参、降香、水蛭、红花、苏木、香附、徐长卿等组成。购于东风总医院 ,水煎煮 2次,合并所煎药液,浓缩至每毫升含生药 0.699(低剂量组)与每毫升含生药 2.80(高剂量组)。卡托普利 (开搏通 )中美上海施贵宝制药有限公司,批号:20061020。 12.5mg/片,溶解至每毫升含原药0.137mg。

2 方法 2.1 实验动物与给药方法 将大鼠随机分为 5组,每组 8只。① 假手术组;② 模型组;③参降汤低剂量组;④参降汤高剂量组;⑤对照组。假手术组与模型组每天灌服生理盐水;低剂量组灌服参降汤药含生药 13.98◦ kg-1◦ d-1;高剂量组灌服参降汤药含生药 55.92◦ kg-1◦ d-1;对照药组灌服卡托普利溶液含原药 3.75mg◦ kg-1◦ d-1;各组均于试验前一周开始给药每天灌药 2次每次 2mL。

2.2 心肌缺血再灌注模型的建立 按文献[1]方法适当加以改进,末次给药后 1h,大鼠腹腔注射 0.3%戊巴比妥那麻醉(30mg/kg),固定后,行气管切开术,并给予人工机械通气,呼吸频率 65～ 70次 /min。于胸骨左缘 2～ 4肋间打开胸腔及心包膜,暴露心脏;在肺动脉圆锥右缘,于左心耳下缘 1～ 2mm处经左冠状动脉下浅层心肌穿一 5/0号丝线,连同一直径 2mm聚氯乙烯管结扎冠状动脉左前降支(Left desending coronary artery,LAD),造成心肌缺血。结扎 LAD10min后将眼科剪伸入聚氯乙烯管,剪开管壁的同时剪断丝线,使缺血心肌恢复血流灌注,再灌 30min后结束实验。整个实验过程中,用RM6240C多道生理信号采集处理系统连续记录标准肢体Ⅱ导心电图,以结扎后出现心电图Ⅱ导 ST段抬高或降低为模型成功的标志。

2.3 标本采集 再灌注即刻从颈动脉取血 2mL,分离血清检测 CK、LDH。并立即取左室心尖组织,以生理盐水冲洗残血,滤纸吸干水分,用生理盐水制成 10%心肌均浆,分别测定心肌 SOD、MDA含量。步骤和计算公式严格按照试剂盒说明书操作。

3 实验结果 见表 1、表 2。

表1 参降汤对缺血再灌注损伤大鼠血清LDH、CK含量的相互比较(±s)

表1 参降汤对缺血再灌注损伤大鼠血清LDH、CK含量的相互比较(±s)

与模型组比较△P＜0.01,与假手术组比较,▲P＜0.01,与低剂量组比较,◇P＜0.01,◆ P＜0.05,与高剂量组比较,□ P ＜ 0.01,■ P ＜0.05。

组 别 n CK(U/mL) LDH(nmoL/g)假手术组 8 66.63± 9.72△◇ 1370.80± 140.46△◇■模型组 8 175.14± 19.60▲◇□ 2616.15± 353.48▲◇□低剂量组 8 97.28± 13.83△▲■ 1977.31± 158.17△□高剂量组 8 73.44± 15.99△◇ 1656.85± 207.46△◇对照组 8 110.57± 12.52△▲□ 2002.17± 222.24△□

表2 参降汤对缺血再灌注后大鼠SOD、M DA水平的相互比较(±s)

表2 参降汤对缺血再灌注后大鼠SOD、M DA水平的相互比较(±s)

与模型组比较△P＜0.01,与正常对照组比较,▲P＜0.01,◇P＜0.05,与低剂量组比较,◆P＜0.01,与高剂量组比较 ,□P ＜ 0.01。

组 别 n SOD(U/mg) M DA(nmoL/g)假手术组 8 131.73± 22.30△◆ 6.60± 1.11△◆□模型组 8 66.82± 9.28▲◆□ 19.08± 1.90▲◆□低剂量组 8 110.14± 15.23△▲ 12.08± 1.91△▲□高剂量组 8 124.87±9.00△ 9.61±1.73△▲◆卡托普利组 8 116.03± 12.56△◇ 13.02± 2.17△▲□

实验结果显示①缺血再灌注模型组大鼠心肌组织的 MDA含量较假手术明显升高(P＜0.01),而 SOD水平则显著降低(P＜0.01),说明心肌缺血再灌注导致组织的抗氧化能力显著降低。②对照组、参降汤高剂量及低剂量组的心肌组织 MDA含量均显著低于缺血再灌注模型组 (P＜0.01),参降汤高剂量的心肌组织 MDA含量均显著低于低剂量组及对照组;对照组、参降汤高剂量及低剂量组的心肌组织 SOD活性则显著高于缺血再灌注模型组(P＜0.01)。说明参降汤对心肌细胞具有与卡托普利相近的保护作用,可明显增强机体清除自由基的能力,且高剂量组优于低剂量组及对照组。

CK广泛存在于细胞浆膜中,尤以心肌细胞最多,当心肌细胞受损伤时 ,CK渗到血液中 ,活性增高,故血清中 CK活性越高,心肌损伤越严重。LDH亦是一种心肌酶,当心肌缺血再灌注损伤时,心肌酶释放增加。

实验结果显示:①心肌缺血再灌注模型组的血清 LDH、CK水平显著高于假手术组 (P＜0.01),表明缺血再灌后血清LDH、CK水平显著升高。②对照组、参降汤高剂量及低剂量组的血清 LDH、CK值均显著低于缺血再灌注模型组(P＜0.01),参降汤高剂量组的血清 LDH、CK值显著低于低剂量组及对照组,说明参降汤组及卡托普利均可以减少因缺血再灌注而引起的心肌酶的释出,且高剂量参降汤作用优于卡托普利及低剂量参降汤。

4 讨 论 目前,心肌缺血再灌注损伤的发病机制尚未彻底阐明,可能是多种因素共同作用的结果,如自由基的产生增加、细胞内钙超载以及内皮损伤等的影响。在心肌缺血再灌注时,自由基的含量可增加数倍,过多的自由基可激发链式脂质过氧化反应造成细胞膜的损伤,严重时造成细胞的死亡[2]。M DA是氧自由基脂质过氧化的最终产物,可破坏细胞膜,使胞内 Ca2+、Mg2+严重超负荷,线粒体合成三磷酸腺昔(AT P)的量明显减少,进而抑制心功能 ,引起严重的心律失常,最终导致心肌细胞死亡。因此测定 M DA含量能间接反映氧自由基的含量和脂质过氧化的程度。SOD是体内清除氧自由基抗氧化酶系统的成员之一,对一体内氧化和抗氧化平衡起着非常重要的作用,可清除超氧阴离子,保护细胞免受氧自由基损伤。因此测定SOD活性能反映机体内抗脂质过氧化的能力[3]。

中医学中虽无心肌缺血再灌注损伤这一病名,但根据其临床表现,应分属中医的“心悸”、“怔忡”等病范畴。祖国医学关于“心悸”、“怔忡”证候表现的描述早在《内经》中即已有之,如《素问◦至真要大论》篇曰:“心中澹澹大动”;《素问◦三部九候论》曰:“叁伍不调者病”;以及《灵枢◦本神》篇所讲的“心休惕”等。心悸之病始见于汉代张仲景的《伤寒杂病论》,书中称心悸为心动悸、心下悸、心中悸、惊悸等不同名称。而心悸之病名则首见于唐◦孙思邈的《千金要方》,书中曰:“阳气外击,阴气内伤,……虚则惊,掣心悸……”。心悸、怔忡的产生多正虚在前,陈士铎《石室秘录》说:“怔忡之证,……此肝肾之虚,而心气之弱也”。心主血脉,有赖心气的推动 ,心气不足,则血运无力 ,气虚日久,血行滞缓则心脉瘀阻。近代许多医家亦认为本病多属虚证,以气虚为本,血瘀为标。气为血帅,心气不足则血液运行无力,心失所养而致心悸、怔忡;气行不畅,血脉瘀阻,脉道不通,故脉歇止不齐。

参降汤是导师张新风主任多年从事中医心血管病防治的临床经验方,临床观察证实[4],该方对冠心病心律失常有较好的临床作用。参降汤以党参益气养血为君以治本,红花活血通经,祛瘀止痛,苏木活血祛瘀通经以治标,共为臣药,党参与红花、苏木相配,共奏补气活血化瘀之功。降香理气化瘀,香附疏肝理气,共为佐药,与活血化瘀药红花、苏木相配 ,根于“气为血之帅,气行则血行,气滞则血瘀”。徐长卿镇静止痛,亦为佐药协助君臣药以加强治疗作用。总之,诸药合用共奏补气活血化瘀,理气止痛之功。

通过试验,可得出如下结论:①参降汤能够显著抑制心肌SOD活力的下降 ,也可使 M DA生成量显著减少,保护心肌细胞膜,进而保护缺血再灌的心肌。②参降汤可显著减轻心肌细胞损伤程度,减少心肌损伤时引起的心肌酶 CK、LDH的释放;③参降汤的作用优于西药对照组,从而为中医药防治此病提供了理论依据。

[1] 齐志敏 ,张 莹,王 倩.大鼠心肌缺血再灌注损伤实验模型研究[J].中国临床康复,2004.30(8):6620-6621.

[2] Pierre S,Jamme I,Droy L,et al.Ginkgo biloba extract(EGb 761)protects Na,K-ATPase activity during cerebral ischemia in mice[J].Neuroreport,1999,10(1):47.

[3] 王迪浔 ,金惠铭.人体病理生理学[M].北京:人民卫生出版社,2002,744-746.

[4] 蔡少峰 ,张新凤,李继端.参降汤治疗冠心病室性早搏临床观察[J].中国中医药信息杂志,2007,14(1):68.