结核患者检测 T淋巴细胞亚群的意义

王 敏,蒋 强,刘赛云,程文兵,张明霞

(深圳市第三人民医院肝研所,广东 深圳 518020)

结核病是全世界范围内最普遍的传染性疾病之一,近十年来,全球结核病的发病率呈增高趋势。全球约有 1/3人口感染结核杆菌,其中约 900万人为活动性结核病[1]。结核杆菌感染率很高,但发病率却较低,表明结核病发生、发展和转归不仅与感染的细菌量及其毒力等因素有关,且取决于机体免疫功能。结核杆菌是胞内寄生菌,机体抗结核免疫主要是细胞免疫,决定细胞免疫强弱的主要是 T淋巴细胞亚群的数量及功能。我们应用流式细胞仪对 92例肺结核患者及 54例健康人进行了 T淋巴细胞亚群检测,现将研究结果报道如下:

1 资料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 肺结核患者组 选取 2008年 1月至2009年 11月本院住院及门诊确诊患者 92例。其中男性 54例,女性 38例,年龄 18-59岁,平均 33.7岁。

1.1.2 健康对照组 54例健康成人标本来源于本院体检中心。其中男性 23例,女性 31例,年龄18-58岁,平均 34.9岁。均衡性检验显示,肺结核患者组与健康对照组两组之间的年龄、性别差异均无统计学意义(P＞0.05)。

1.1.3 肺结核的诊断标准 (1)痰、胸腔积液结核分枝杆菌阳性或淋巴结、胸膜、肺组织活检证实结核者;(2)有明显结核中毒症状;(3)抗结核抗体(抗 TB-Ab-IgG)吸光度值≥0.30或蛋白纯化衍生物(PPD)试验中、强度阳性;(4)胸片有典型肺结核影像改变;(5)抗结核治疗有效。具备上述诊断标准第 1项或 2-5项者,诊断为肺结核。所有患者均无慢性肝炎、肾病、肿瘤等影响免疫功能的疾病。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂 采用法国 Immunotech公司的三色荧光标记的单克隆抗体 CD4-FlTC/CD8-PE/CD3-PC5;OptiLyse C免洗溶血素原液;以及自备的PBS液体;空白对照组为鼠 IgG1-FTTC/IgG1-PE/IgG1-PC5。

1.2.2 仪器 使用 Coulter Epics XL流式细胞仪(美国 Beckman Coulter公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 标本处理 抽取外周静脉血 2 ml,使用EDTA抗凝。每份标本编 3支试管,其中一管立即在SFM—2000血球分析仪上进行白细胞计数与分类。其余两管中,一管加入三标的单克隆抗体 20μl,另一管中加入对照样本量 20μl;每管各加入全血 100 μl,充分混匀,室温下孵育 15 min;然后在每管中加入 OptiLyse C免洗溶血素 500μl,充分混匀,室温下孵育 15 min;在每管中加入 PBS缓冲液 500μl,混匀,室温下孵育 10 min。

1.3.2 对照组处理 以对照管作为空白定标,淋巴细胞设门,计算 5 000个淋巴细胞,记录标本的阳性细胞百分率。

1.4 统计学方法 各数据以(x±s)表示,采用t检验,方差分析,判断各组之间的相关程度,由SPSS 10.0软件包完成统计学分析。

2 结 果

2.1 肺结核患者 T淋巴细胞亚群检测结果与性别、年龄的关系 见表 1、表 2。表 1说明经统计分析,肺结核患者性别间 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8差异无统计学意义(P＞0.05)。表 2说明经统计分析,显示成人肺结核患者各年龄组间 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 肺结核患者T淋巴细胞亚群检测结果与性别的关系(x±s)

表2 肺结核患者T淋巴细胞亚群检测结果与年龄的关系(x±s)

2.2 肺结核患者与对照组 T淋巴细胞亚群的关系 见表 3。表 3说明经统计分析,肺结核患者 T细胞亚群比较,除 CD8增高外,CD3、CD4、CD4/CD8均明显降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。

表3 肺结核患者与对照组T淋巴细胞亚群数据对比分析(x±s)

3 讨 论

结核杆菌是胞内寄生菌,机体抗结核免疫主要是细胞免疫,决定细胞免疫强弱的主要是 T淋巴细胞亚群数量及功能。自 1979年 Kung和 Goldstein等[2]首次报道 T细胞单克隆抗体 OKT系列制备成功以来,对人 T细胞的研究提供了有力的工具。研究发现 T淋巴细胞在机体免疫过程中起着中心枢纽的作用,它不仅发挥着细胞免疫功能,而且是体液免疫不可缺少的组成部分。正常免疫应答的形成有赖于 T淋巴细胞亚群(主要是CD4与 CD8)之间的相互促进或相互制约。辅助性 T淋巴细胞(CD4)和抑制性 T细胞(CD8)是免疫调节的中心环节。Syriala等[3]研究表明,CD4/CD8比值降低是疾病严重和不良的重要指标之一,机体对结核杆菌的免疫以细胞免疫为主,通过效应 T淋巴细胞直接杀灭结核杆菌,辅助性 T淋巴细胞可促进效应 T淋巴细胞的杀菌功能,并释放大量淋巴因子发挥抗结核作用。抑制性T淋巴细胞抑制机体的细胞和体液免疫功能,导致机体免疫力下降。本文结果显示,肺结核患者与健康对照组相比 CD3、CD4、CD4/CD8明显降低,而 CD8明显增高(P＜0.05),与有关报道一致[4]。提示结核发病与机体免疫力下降有关,免疫功能正常的机体感染结核分枝杆菌后,可诱导 T细胞活化成为致敏的 T淋巴细胞产生各种细胞因子,从而杀灭结核分枝杆菌,使机体免于发病,使病灶局限。若免疫功能异常,则可导致发病或病灶恶化[5]。肺结核患者痰菌阳性是结核病进展、结核病变开放的重要指标,从上面的实验结果可看出,结核病患者的 CD3、CD4阳性细胞数及 CD4/CD8比值均低于正常对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05),尤其是 CD4/CD8阳性细胞比值差异具有统计学意义(P＜0.05)。结果表明 T淋巴细胞亚群在一定程度上可反映结核病患者的细胞免疫水平,检测病人外周血中 T淋巴细胞亚群数及比例可以判断受检者的细胞免疫水平,特别是 CD4/CD8比值比单项 CD3、CD4、CD8敏感。可能是由于结核病患者免疫力低下,从而导致 CD4/CD8阳性细胞比例失调,病情严重患者的 CD4/CD8阳性细胞比值长期降低。CD4下降使效应 T细胞杀菌活性降低,与杀菌有关的淋巴因子分泌减少,CD8升高直接抑制机体免疫力,使结核菌繁殖而发病。

本文结果表明,T淋巴细胞亚群变化可作为判断肺结核免疫功能的指标之一,相信随着对结核病的发病及免疫病理损伤机理研究的深入,将在临床诊断、预后判断及预防和治疗中,发挥重要作用。

[1] Aziz MA,Wright A.The world health organization/international union against tuberculosisand lung disease global project on surveillance for anti-tuberculosis drug resistance:A model for other infectious diseases[J].Clin Infect Dis,2005,41(4)∶258-262.

[2] Reinher EL,Sehlosnman SF.The differentiation and function of human T lymphocytes[J].Cell,1980,19∶821.

[3] Syriala H,Surcel HM,Honen J.Low CD4/CD8lymphocyte ratio in acute myocardial infarction[J].Clin Exp Immunol,1991,83∶326.

[4] 费晓峰,吴建鸿.肺结核患者血清中 IAP和 T淋巴细胞亚群关系的研究[J].中国防痨杂志,2003,25(6)∶388-390.

[5] 阎世明,余秉真,周善德,等.老年肺结核患者周围血 T淋巴细胞亚群的观察[J].中华老年医学杂志,1990,9(3)∶172.