Survivin基因在鼻型 NK/T细胞淋巴瘤的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系

董英辉 金永丽 王靖华 陈龙邦 马恒辉

鼻型 NK/T细胞淋巴瘤是一类少见的淋巴瘤亚型，具有特殊的形态学表现、免疫表型及生物学特性，对化疗药物极易产生耐药性，生存时间短，预后不良，是近年来国内外学者的研究热点之一。Survivin是迄今为止发现的凋亡抑制作用最强的凋亡抑制因子。Survivin的组织分布具有明显的特征性，除胸腺和生殖腺外，Survivin在正常分化成熟的组织细胞中不表达，而当细胞发生转化或细胞恶变时又重新获得表达，在卵巢癌、肺癌、胃癌、恶性淋巴瘤等绝大多数肿瘤中 Survivin都有高表达。本文旨在研究凋亡抑制蛋白 Survivin在鼻型 NK/T细胞淋巴瘤中的表达，并进一步分析其表达与细胞增殖的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 50例鼻型 NK/T细胞淋巴瘤标本为 2000至2007年南京军区南京总医院病理科存档蜡块，其中男 32例，女18例;年龄 7～78岁，平均年龄 38岁;发生部位主要为鼻腔、鼻咽部、上腭等面中线部结构;所有病例诊断前均未做治疗。标本均用 10%中性甲醛固定，石蜡包埋组织。参照 WHO(2000年)关于淋巴组织肿瘤分类标准，并做 LCA、CD 3ε、CD 56、Perforin、GranB免疫组化染色明确诊断和分类。另取 12例正常淋巴结组织作为对照。

1.2 实验试剂 兔抗人 Survivin多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司(浓缩型，稀释度 1∶200)，鼠抗人 Ki-67单克隆抗体(浓缩型，稀释度 1∶200)、免疫组化 Envision试剂、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发公司。

1.3 免疫组化方法 采用免疫组化 Envision System，步骤如下:组织蜡块 4μm厚切片，脱蜡至水，高温高压抗原修复，一抗4℃孵育过夜，EnvisionTM试剂室温下孵育 30min，DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封片后光镜下观察。采用已知的免疫组化染色阳性标本作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定

1.4.1 Survivin染色的判断标准:Survivin阳性物质定位于细胞质，少数定位于胞核，为淡黄色至棕黄色颗粒状。根据阳性细胞数和着色深度计分，每例随机观察 5个高倍镜(×400)视野，按下列标准计分:阳性表达细胞 ＜5%为 0分，5%～24%为1分，25% ～49%为 2分，50% ～74%为 3分，＞75%为 4分。阳性细胞表达的着色深度:基本不着色为 0分，淡黄色为 1分，黄色为 2分，棕黄色为 3分。两者得分相乘，少于 1分的病例判定为表达阴性，其余的病例判定为表达阳性。

1.4.2 ki-67增殖指数:ki-67阳性物质定位于细胞核，为黄色至棕黄色颗粒状。随机选择至少5个高倍镜(×400)视野进行计数，每个视野计数 500个肿瘤细胞，计算ki-67阳性细胞数占总细胞数的百分比，即为ki-67增殖指数。

1.5 统计学分析 应用 SPSS 12.0统计软件，采用 Fisher精确概率法和两独立样本 t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin基因在鼻型NK/T细胞淋巴瘤和正常淋巴结组织中的表达 鼻型 NK/T细胞淋巴瘤中 Survivin阳性表达率为60%(30/50)，正常淋巴结组织中 Survivin阳性表达率为16.7%(2/12)，均呈弱阳性(图 1)，且主要表达于少数生发中心细胞，两者比较差异有统计学意义(χ2=7.82，P＜0.05)。

2.2 Survivin基因表达与Ki-67增殖指数的关系 Survivin阳性表达的鼻型 NK/T细胞淋巴瘤 Ki-67增殖指数为(38±16)%，而 Survivin阴性表达的鼻型 NK/T细胞淋巴瘤 Ki-67增殖指数为(23±22)%，两者差异有统计学意义(t=2.80，P＜0.05)。Survivin阳性表达组的增殖指数显著高于阴性组，提示 Survivin阳性表达的鼻型 NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖活性明显增强。见图 2。

图 1 Survivin在鼻型 NK/T细胞淋巴瘤中阳性表达(Envision×200)

图 2 ki-67在鼻型 NK/T细胞淋巴瘤中的表达(Envision×100)

3 讨论

Survivin在细胞增殖、凋亡和血管形成等多方面均起着重要作用。Survivin的组织分布有明显的细胞选择性，它表达于胚胎和发育的胎儿组织，不见于终末分化的正常成人组织(胸腺和生殖腺除外)，但在体内外分化组织、人类大多数肿瘤组织内有 Survivin的表达[1，2]，提示 Survivin在肿瘤的发生中可能具有重要作用。顾霞等[3]研究发现在不同类型的淋巴瘤中Survivin的表达水平存在明显的差异，Survivin的高表达与高度恶性相关，并认为其可能作为淋巴瘤诊断、分型的一个分子标记。本组鼻型 NK/T细胞淋巴瘤中 Survivin阳性表达率占 60.00%，而在 12例正常淋巴结组织中 Survivin仅 2例弱阳性表达，且主要局限于少数代表 B细胞增殖的生发中心细胞，证实鼻 NK/T细胞淋巴瘤中Survivin基因表达上调，提示Survivin基因在鼻NK/T细胞淋巴瘤发生发展过程中可能起重要作用。Survivin生发中心的弱阳性表达，提示其可能对与细胞生存和增殖有一定的调节作用，或其表达受到内部微环境中的某些因素的调节。梁群英等[4，5]分别检测了 24例和 25例鼻型 NK/T细胞淋巴瘤中 Survivin的表达，阳性率分别为 45.8%(11/24)和 68%(17/25)，均显著高于对照组，都认为 Survivin可能参与了鼻型NK/T细胞淋巴瘤的发生发展。

作为凋亡抑制蛋白，Survivin是迄今发现凋亡抑制作用最强的凋亡抑制因子[6]。Survivin可通过多种调控机制，发挥其强大的抗凋亡作用。同时，它也是细胞周期调节因子，在抑制细胞凋亡和在细胞周期的 G2/M期中保证正常细胞分裂均起重要作用，并且具有促进细胞增殖的作用[7]。临床研究表明，ki-67抗原的表达可反映肿瘤细胞的增殖特性，与恶性肿瘤的发展、转移和预后高度相关[8]。在本研究中，鼻型 NK/T细胞淋巴瘤 Survivin阳性表达的 ki-67增殖指数显著高于 Survivin阴性表达的 ki-67增殖指数，Survivin的表达与 ki-67增殖指数呈正相关，提示 Survivin可能促进鼻型NK/T细胞淋巴瘤的细胞增殖。朱红霞等[9]发现高表达 survivin的 HEK 293细胞生长速度加快，高密度生长耐受能力也较对照高，表明 Survivin使HEK 293细胞生长中的接触抑制作用下降，集落形成能力增强。

本研究显示，Survivin在鼻型NK/T细胞淋巴瘤中高表达，提示Survivin在鼻型NK/T细胞淋巴瘤的发生发展中起到一定的作用。Survivin表达与肿瘤细胞增殖呈明显正相关，表明其发挥抗凋亡作用的同时亦有促进肿瘤细胞增殖作用。这为进一步阐明 Survivin在鼻型NK/T细胞淋巴瘤发生发展中的作用具有启发意义。

1 Sarela AI，Macadam RC，Farmery SM，et al.Expression of theanti-apoptosisgene，surviving，predicts death from recurrent colorectal carcinoma.Gut，2000，46:645-650.

2 Trieb K，Lehner R，Stulnig T，et al.Survivin expression in human osteosarcoma isa marker for survival.Eur JSurg Oncol，2003，29:379-382.

3 顾霞，林汉良.不同类型淋巴瘤 survivin的表达及其意义.癌症，2004，23:655-661.

4 梁群英，郭瑞珍，唐文台，等.survivin基因在鼻型 NK/T细胞淋巴瘤的表达及其与 p53和 bcl-2基因表达的关系.肿瘤防治杂志，2003，10:343-344，369.

5 明萌，邹典定，王大斌，等.鼻NK/T细胞淋巴瘤生存素基因表达与细胞凋亡和增殖的关系.武汉大学学报(医学版)，2004，25:501-503，520.

6 Adida C，Crotty PL，McGrath J，et al.Developmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosisgene survivin in human andmouse differentiation.Am JPathol，1998，152:43-49.

7 杨连粤，易彤波.caspase-3、caspase-8与 Fas介导凋亡信号转导及其在肝细胞癌凋亡中的作用.中国现代医学杂志，2000，10:27-29.

8 Backus HH，Van Goeningen CJ，Vos W，et al.Differential expression of cell cycle and apoptosis related proteins in colorectal mucosa，primary colon tumors，and livermetastases.JClin Pathol，2002，55:206-211.

9 朱红霞，刘爽，周翠琦，等.抗凋亡基因 survivin促进细胞转化的作用机制.中华医学杂志，2002，82:338-340.